一种简单灵活的接种方法，用于准确评估拟南芥和其他植物的白粉病感染表型

白粉病是一种重要的植物病害。准确测定疾病表型甚至需要接种病原体。由于现有方法效率低下，我们开发了该协议。

我们的孢子接种方法可以轻松实现均匀接种，并且简单且可扩展。因此，任何处理白粉病的实验室都可以轻松使用这种方法。研究人员还可以在纸板箱上安装网眼，并将其用于孢子接种。

如何去除孢子并将其刷过网状物是一个关键步骤。因此，在视频中演示这一点可能会非常有帮助。对于此协议，请获取一卷50微米尼龙膜网或48微米不锈钢网。

将大型中密度胶合板切割成 24.5X10 英寸和 12X10 英寸的碎片，用于制作接种盒。要制作带有网眼的可拆卸顶盖，请将长木方形销钉切成两组 26 英寸和 12.75 英寸。将四块粘合并钉在盒子周围。

拿起亚克力板，使用八个角夹将所有亚克力板组装到一个盒子里。在盒子的亚克力板正面切一个 7X2 英寸的开窗。为了制备新鲜的白粉病孢子作为接种物，请在22摄氏度和65%相对湿度的生长室中种植干净的拟南芥免疫受损的pad4-1突变植物六到八周。

种植植物以确定标准公寓的感染表型。接种一株或半株PAP4-1植物，以形成足够的新鲜白粉病孢子。当有来自受感染植物的新鲜孢子时，将一整株植物移入接种室内的接种箱中进行感染测试。

切下15至20片严重感染的拟南芥叶子，如果有冷凝水，则让它们干燥。用一对长镊子用一只手倒置握住一到两片叶子。然后将双手穿过腔室的开口，用一把剪刀轻轻敲击镊子的手臂，同时慢慢地将叶子移动到安装在接种盒上的网上方。

用细扇式搅拌机刷子将孢子从不同方向刷过整个网状表面，以最大限度地提高孢子在植物上的均匀分布。用刷子轻轻拍打网眼几次，以甩掉卡在网眼中的孢子。孢子沉淀后，从接种箱中移出装有接种植物的平板。

用塑料圆顶盖住平面，并将其放置在22摄氏度和65%相对湿度的生长室中。疾病表型可在接种后 5 天或 8 至 12 天进行。通过移除盒子的顶部和底部，用胶带粘住角落以使其牢固，并在顶部用胶水安装一个 50 微米的网格，将纸板箱转换为接种盒。

将包含植物的平板移动到接种室内，并将较小的接种盒放在平板顶部以覆盖植物。然后移开并刷拭孢子。制作一个比培养皿稍大的迷你接种盒。

将盘子存放在四摄氏度的冰箱中，直到使用。从叶柄的基部切下一到两片完全展开的叶子，用于每株要测试的植物。将分离叶的叶柄以30度角插入琼脂培养基中。

在接种室内接种叶子，并将带盖的板移动到生长室中。为了评估感染表型，在接种后四到五天将叶子转移到新鲜无菌MS琼脂平板上。切下叶柄的基部，然后将叶子插入新鲜琼脂培养基中。

在接种后 8 或 9 天评估疾病表型。显微分析显示孢子均匀分布在平板底部的显微载玻片上。光照接种后分布在6个不同位置的孢子密度计算结果无显著差异。

在用孢子大量接种后也取得了类似的结果。在大量接种后12 d检查不同植物基因型的接种均匀性。与野生型植物哥伦比亚0相比，pad4-1植物表现出更强的疾病易感性。

在易感植物上接种后约10天产生的足够新鲜孢子很重要，因为新鲜孢子更容易去除，更有可能建立定植。白粉病仅定植于植物表皮细胞。通过剥离表皮或激光显微解剖来分离白粉病感染的细胞，将使宿主反应的更有针对性的转录组学和蛋白质组学研究成为可能。

该方法将帮助研究人员更有效地确定白粉病感染表型，因此应有助于更有效地研究植物白粉病相互作用的功能。