基于计算机断层扫描的小鼠后肢血管三维可视化的样品制备

可以使用步骤方案拍摄下肢和腹部器官血管的CT图像。该方法能够全面评估整个血管。此外，可以仅评估动脉或同时评估动脉和静脉。

预防血栓，漏血或血液好，避免气泡非常重要。手术前，将PBS中的1单位/克肝素注射到小鼠的腹膜腔内。30分钟后，在安乐死小鼠的胸骨上做一个中线切口，并用销钉固定开放的胸部。

切除心脏前的升主动脉，然后切除肺以暴露降主动脉。斜切下主动脉以显示血管的横截面。接下来，在运行血管舒张缓冲液时将22号导管插入下主动脉。

将导管的根部固定并打结，以防止由于回流而泄漏。完成后，用加热的血管舒张溶液开始灌注，固定压力在13至15千帕斯卡之间。三分钟后，将4%多聚甲醛溶液在PBS中浸泡3分钟。

停止灌注，并用2mL以1：1的比例稀释的新鲜制备的造影剂填充连接到导管的延长管，以固定在13至15千帕斯卡之间注注。要可视化动脉，请检查口腔的脚趾甲，以确认造影剂已到达动脉。以同样的方式，检查隔膜的下腔静脉，以确认造影剂的完整循环并可视化所有血管。

如果造影剂的循环完全，请关闭三向旋塞阀并取出管子。将样品在4摄氏度下孵育过夜。在该协议中，小鼠下肢的所有血管都可视化。

后肢缺血模型的结果证实，非结扎股动脉与股静脉平行。此外，造影剂的中断使得观察股动脉结扎和侧支血管的发展变得容易。可以看到一些装满造影剂的血管。

另一方面，还注意到由于非造影剂混合或灌注不足而导致的造影剂中断。通过对比介质的立体显微镜观察不可能看到身体表面的动脉，这使得评估脉管系统缺陷变得更加容易。插入导管时避免气泡非常重要。

由于他们的腹部器官也很放松，因此可以取出器官并进行CT扫描。通过使用这种方法，我们能够确定一个新的饱和季度。