连续记录仪器化大鼠的肾血流量使我们能够暂时确定导致我们正在研究的疾病过程的事件顺序。在我们的案例中,它是高血压,我们试图确定高血压中发生的肾血流量减少是否先于高血压,还是高血压的结果。我们今天将要展示的系统以及动物的制备实际上是为了能够连续24小时测定肾血流量,一次持续数周,以研究慢性事件并研究大鼠在家庭环境,笼子里。
与所有手术技术,实践,耐心和对细节的关注一样,我们将需要掌握这些程序,直到可以按时实施。开始用电剪在麻醉大鼠第七颈椎周围的小睡区域剃除整个腹部。剃须后,用 10% 聚维酮碘和 70% 乙醇交替擦拭该区域三次。
将大鼠置于俯卧位。用手术刀在午睡和左胁上切开一厘米。然后用止血钳在从侧腹切口到颈部后部的透明皮下间隙进行钝性解剖。
将皮肤按钮连接到流动探头上,并用止血钳将流动探头从颈部穿过皮下隧道到侧腹切口。然后将大鼠置于仰卧位,并做一个四到五厘米的中线腹部切口。用弯曲的显微夹层钳解剖左肾动脉周围的区域,露出足以放置流动探头的空间。
然后钝性地用止血钳刺穿左四方腰肌,将血流探头的头部穿过脂肪组织下的肾动脉拉入腹腔。将聚酯纤维网放在腹壁上。将流量探头的尖端钩到左肾动脉并将其连接到流量计。
在探头尖端周围添加一些凝胶,流量计上将出现流速值。使用组织粘合剂将附着在探头上的聚酯纤维网粘在腹壁上,并保持直到干燥并粘合。探头就位后,断开流量探头与流量计的连接,并用盐水浸泡的纱布覆盖腹部。
要缝合探针,请将大鼠转向俯卧位。将皮肤按钮连接到流动探头上,并在侧面皮下形成流动探头的圆形环。将颈部的切口和纽扣缝合到皮肤上。
然后用四条OTT手术缝合线缝合侧腹。再次将流量探头连接到流量计,并将大鼠转回背部位置以检查肾血流量。进行最终的流动探头调整,以优化其在肾动脉上的位置。
最后,用四条奥特手术缝合线在皮肤上用三根奥特丝缝合肌肉。当大鼠从麻醉中完全恢复时,将大鼠返回到运动反应笼系统,将流量探头连接到血流量计,并允许大约一周的恢复期以稳定探头和流量测量。在钝盐敏感的大鼠中连续测量平均动脉压和血流量,同时从低盐饮食切换到高盐饮食。
来自雄性大鼠的代表性数据记录了四周,并以分钟平均值显示。在平均动脉压和血流量方面观察到明显的昼夜差异。虽然血压随着高盐饮食而升高,但血流量趋于减少而不是增加,这表明肾血管阻力增加。
这种技术的最大优点是它可以长时间研究肾血流量,最重要的是在未麻醉的条件下。在研究对各种刺激的反应时,这一点非常重要,您可以在受控的未麻醉条件下使用同一只动物,并在短时间内或很长的时间内跟踪同一只动物,以查看对某些特定刺激的反应或病理性疾病是什么。