斑马鱼是一个有吸引力的模型，但科学家们不知道这种生物在水源性剂量下吸收了多少。我们开发了一种技术，可以在暴露后消化组织并通过ICPMS量化金属。该技术使我们能够使用ICPMS准确量化和验证剂量反应。
这种方法有很大的潜力。药理学或环境金属暴露可以从细胞水平一直到动物模型中的整个器官系统。向15毫升聚丙烯离心管中加入约0.25毫升高纯度硝酸，最多可灭10只幼虫。
超声处理一小时以预消化样品。对于超声分析，在酸安全的微波蒸煮器中每隔五分钟进行短周期的组织消化，直到所有组织都明显氧化，产生均匀，透明的黄色溶液。仔细监测管子的完整性，以避免破裂，并在循环之间在离心机中进行短旋转。
一旦组织明显氧化，使用6.75毫升高纯水和涡旋将通风橱中的样品稀释至3.5%硝酸以充分混合。然后进行矩阵匹配的7点校准曲线，以考虑任何潜在的等压干扰。使用水性认证元素标准的储备浓度，取0.1毫升等分试样，并通过移液管进入新的15毫升离心管中。
用3.5%硝酸稀释至最终体积为10毫升，以生产十亿分之十一的标准溶液。使用10亿分之10的储备液，在3.5%硝酸中连续稀释0.1，1.0和5.0的十亿分之一标准溶液。使用0.1储备液，在3.5%硝酸中连续稀释0.001，0.005和0.01十亿分之一的标准溶液。
然后在准备用于样品分析的ICPMS仪器之前，确保氩气阀打开，所有管子连接牢固且清洁，5%硝酸打开用于冲洗管和玻璃器皿之间的样品分析。检查割炬和锥体的状况，并确保割炬盒已牢固锁定。并且喷雾室引流管正确连接到围膜上。
打开软件，检查真空读数，并确保所有涡轮泵都以100%的速度运行，单击等离子控制系统状态窗口中的“启动”以启动启动顺序。打开等离子泵和等离子体冷却器，栖息雾化器并点燃等离子体。等待等离子体点亮且稳定，此时状态窗口指示启动序列已完成。
此时，观察系统状态窗口上的绿点，这些绿点指示所有电源都已打开。在菜单栏中，单击下拉菜单中的控制，自动进样器。进入含有5%硝酸的管的自动进样器机架位置，让酸进入血浆。
在菜单栏中，单击下拉菜单中的扫描，磁铁。在“磁扫描”窗口中，在“标记质量位置”中键入 115，然后单击 Enter。让磁体在整个质量范围内扫描 30 分钟，同时仪器预热。
30 分钟后，使用自动进样器控件移动到十亿分之一多元素调整解决方案的位置。吸出调谐解决方案并调谐仪器以优化信号读数。调整 X、Y、Z 坐标的割炬位置，使割炬与等离子体控制窗口中锥体的中心和雾化器流速对齐。
在“离子光学调谐”窗口中对源、检测器和分析仪进行必要的调整。优化信号读数后，单击磁体扫描窗口中的停止，单击校准磁体，然后在弹出窗口中选择低分辨率。单击“确定”并打开“质量校准”smc 文件以校准磁体。
单击保存，使用将电流磁体校准应用于分析。当测量具有较大浓度范围的未知样品时，执行检测器校准以将低浓度下的离子脉冲计数信号与较高浓度下产生的衰减离子信号进行比较。通过单击“数据采集”启动样品分析，然后单击下拉菜单中的方法设置。
使用制造商提供的现有方法或基于感兴趣的元素创建方法。如有必要，可调整偏转器设置的分析模式、停留时间、开关延迟、扫描和周期数、分辨率、检测模式和停车质量。单击“保存”以记录方法设置。
优化每种金属和同种型的参数。在菜单栏中，单击“数据采集”。单击下拉菜单中的“批量运行”。
或者，单击菜单栏下方的 BATCH 图标，从电子表格导入批处理参数或在“批处理运行”窗口中创建序列。输入样品类型、自动进样器架位置、转移时间、洗涤时间、重复、样品 ID 和方法文件。安排校准曲线的标准溶液的批次运行，然后是质量控制标准，然后是未知样品。
通过每 5 到 10 个样品包含一个 0.5/00 的质量控制标准来监控仪器漂移和样品再现性。组织摄取研究是在顺铂和一种新型钌基抗癌化合物PMC79的水源暴露下进行的。对致死性和延迟孵化进行顺铂名义浓度评估。
0、3.75、7.5、15、30和60毫克每升顺铂。通过ICPMS分析测定了生物体组织中铂的积累，生物体组织中的浓度分别为每生物体0.05、8.7、23.5、59.9、193.2和461.9纳克。在所有顺铂浓度下均观察到延迟孵化。
去皮后，分别收集绒毛膜并分析铂金。用于去皮研究的非致死剂量顺铂确定，顺铂总递送剂量的93%至96%已积聚在绒毛膜中，其余剂量在幼虫组织内。斑马鱼幼虫暴露于每升PMC79的0，3.1，6.2，9.2和12.4毫克。
分析确定这些浓度含有每升0，0.17，0.44，0.66和0.76毫克的钌。与这种顺铂不同，在PMC79暴露的幼虫中没有观察到延迟孵化。绒毛膜未包含在钌分析中，因为它们在幼虫收集之前自然降解。
在每种浓度下分析的幼虫组织中的块状金属为每只幼虫0.19，0.41和0.68纳克钌。添加到暴露方案中的任何试剂都可能导致等压干扰。如果可能的话，考虑与三卡因相比，快速冷却等替代方案。
这种方法允许金属剂量定量的毒性，功效，实验在高等脊椎动物之间进行比较。我们特别兴奋的是，我们的阈值剂量在给予患者的一个数量级之内。
