杂交集合和单分子检测对完全重构的 CMG 的运动进行成像

我们在单分子水平上研究真核复制体不同组分的运动动力学。为了获得对细胞如何复制其整个基因组、每个细胞周期的深入定量理解。在 2015 年的一项突破中，真核 DNA 复制在体外从纯化的蛋白质成分中完全重构。

这让我们对系统有很大的控制权。从那时起，它被广泛用于回答有关 DNA 复制不同阶段的问题，同时提高了时间和空间分辨率。这是使用冷冻电镜和单分子生物物理学等互补方法完成的。

在单分子领域中，该系统的最大挑战之一是所涉及的蛋白质数量以及需要这些组分的浓度，以便最大限度地提高整个反应的效率，因为这会使单分子成像复杂化。此处描述的方案介绍了一种混合方法，其中蛋白质复合物首先使用集成生物化学以有效的方式组装，然后在单分子环境中引入和研究。这避免了在单分子水平上引入两种高浓度的蛋白质。

我们说明了这种方法，用于研究复制解旋酶 CMG 在通过基于起源的途径组装后在单分子水平上对 DNA 的行为。但这种方法也可用于研究许多其他类型的 DNA 结合蛋白复合物的动力学。