Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against <em>Toxoplasma gondii</em> Obtained Via SCNT

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged ...

Whitehead Institute for Biomedical Research

&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D; DNA &#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2; &#xFF08;DSBs&#xFF09; &#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5FEB;&#x901F;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; H2AX &#x6838;&#x5FC3;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x53D8;&#x5F02; (&#x4EE5;&#x5F62;&#x6210; &gamma;-H2AX) &#x7ECF;&#x8FC7;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x57DF;&#x4FA7;&#x7FFC; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E2D;&#x3002;&#x8C03;&#x67E5; H2AX &#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x751F;&#x6210;&#x7684; H2AX &#x7F3A;&#x9677; (H2AX(Delta)/Delta) &#x9F20;&#x6807; (ES) &#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;H2AX (Delta) / &#x4E09;&#x89D2;&#x6D32;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x662F;&#x53EF;&#x884C;&#x7684;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5BF9;&#x7535;&#x79BB;&#x8F90;&#x5C04; (IR) &#x9AD8;&#x5EA6;&#x654F;&#x611F;&#x548C;&#x5C55;&#x54C1;&#x7684;&#x81EA;&#x53D1;&#x6027;&#x548C;&#x7EA2;&#x5916;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6C34;&#x5E73;&#x5347;&#x9AD8;&#x3002;&#x503C;&#x5F97;&#x6CE8;&#x610F;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;H2AX &#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#xFF0C;NHEJ &#x672C;&#x8EAB;&#x56E0;&#x4E3A; H2AX (Delta) / &#x4E09;&#x89D2;&#x6D32; ES &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x77AC;&#x6001;&#x68C0;&#x6D4B;&#x652F;&#x6301;&#x6B63;&#x5E38;&#x6C34;&#x5E73;&#x548C; V (D) J &#x91CD;&#x7EC4;&#x7684;&#x4FDD;&#x771F;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x8FD8;&#x652F;&#x6301;&#x4F53;&#x5185;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;H2AX (Delta) / &#x4E09;&#x89D2;&#x6D32; ES &#x7EC6;&#x80DE;&#x5C55;&#x89C8;&#x6539;&#x53D8;&#x7EA2;&#x5916;&#x8BF1;&#x5BFC; BRCA1 &#x91CD;&#x70B9;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; H2AX &#x51FD;&#x6570;&#x662F;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;

&#x7535;&#x79BB;&#x8F90;&#x5C04;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x548C;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D; H2AX &#x7F3A;&#x5E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;

In mammalian cells, DNA double-strand breaks (DSBs) cause rapid phosphorylation of the H2AX core histone variant (to form gamma-H2AX) in megabase chromatin domains flanking sites of DNA damage. To investigate the role of H2AX in mammalian cells, we generated H2AX-deficient (H2AX(Delta)/Delta) mouse embryonic stem (ES) cells. H2AX(Delta)/Delta ES cells are viable. However, they are highly sensitive to ionizing radiation (IR) and exhibit elevated levels of spontaneous and IR-induced genomic instability. Notably, H2AX is not required for NHEJ per se because H2AX(Delta)/Delta ES cells support normal levels and fidelity of V(D)J recombination in transient assays and also support lymphocyte development in vivo. However, H2AX(Delta)/Delta ES cells exhibit altered IR-induced BRCA1 focus formation. Our findings indicate that H2AX function is essential for mammalian DNA repair and genomic stability.

Increased ionizing radiation sensitivity and genomic instability in the absence of histone H2AX.

Dans les cellules de mammif&egrave;res, cassures de l&#39;ADN double-brin (CDB) causent rapide phosphorylation de la variante d&#39;histone H2AX core (pour former des gamma-H2AX) dans les domaines de la chromatine megabase flanquant les sites des l&eacute;sions de l&#39;ADN. Afin d&#39;&eacute;tudier le r&ocirc;le de H2AX dans les cellules de mammif&egrave;res, nous avons g&eacute;n&eacute;r&eacute; H2AX d&eacute;ficient (cellules souches embryonnaires (ES) de H2AX(Delta)/Delta) souris. H2AX (Delta) / Delta CSEh est viables. Cependant, ils sont tr&egrave;s sensibles aux rayonnements ionisants (IR) et pr&eacute;sentent des niveaux &eacute;lev&eacute;s d&#39;instabilit&eacute; g&eacute;nomique spontan&eacute;e et induite par l&#39;IR. Notamment, H2AX n&#39;est pas obligatoire pour NHEJ en soi car H2AX (Delta) / Delta CSEh soutenir les niveaux normaux et la fid&eacute;lit&eacute; de la recombinaison de V (D) J essais transitoires et soutiennent &eacute;galement le d&eacute;veloppement des lymphocytes in vivo. Cependant, H2AX (Delta) / Delta ES cellules pi&egrave;ce alt&eacute;r&eacute; BRCA1 IR induite par la formation de mise au point. Nos r&eacute;sultats indiquent que H2AX fonction est essentielle pour la stabilit&eacute; g&eacute;nomique et de la r&eacute;paration de l&#39;ADN chez les mammif&egrave;res.

Sensibilit&eacute; accrue des rayonnements ionisants et l&#39;instabilit&eacute; g&eacute;nomique en l&#39;absence de l&#39;histone H2AX.

Erh&#xF6;hte ionisierender Strahlung Empfindlichkeit und genomische Instabilit&#xE4;t in Abwesenheit von Histon H2AX.

In cellule di mammifero, interruzioni di DNA double-strand (DSBs) causano rapida fosforilazione della H2AX core istone variante (a forma di gamma-H2AX) in domini di cromatina megabase fiancheggianti siti di danni al DNA. Per indagare il ruolo di H2AX in cellule di mammifero, abbiamo generato H2AX-carente (le cellule staminali embrionali (ES) del mouse H2AX(Delta)/Delta). H2AX (Delta) / Delta ES cells sono vitali. Tuttavia, essi sono molto sensibili alle radiazioni ionizzanti (IR) e presentano elevati livelli di instabilit&agrave; genomica spontanea e indotta da IR. In particolare, H2AX non &egrave; richiesto per NHEJ per s&eacute; perch&eacute; H2AX (Delta) / Delta ES cells sostenere livelli normali e fedelt&agrave; di ricombinazione V (D) J in dosaggi transitori e supporta anche lo sviluppo dei linfociti in vivo. Tuttavia, H2AX (Delta) / esposizione di cellule ES Delta alterata formazione focus BRCA1 IR-indotta. I nostri risultati indicano che H2AX funzione &egrave; essenziale per la stabilit&agrave; genomica e riparazione del DNA dei mammiferi.

Sensibilit&agrave; aumentata radiazione ionizzante e instabilit&agrave; genomica in assenza di istone H2AX.

&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; DNA &#x4E8C;&#x672C;&#x9396;&#x5207;&#x65AD; &#xFF08;Dsb&#xFF09; H2AX &#x30B3;&#x30A2; &#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3; &#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E; DNA &#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x4E26;&#x3076;&#x7D50;&#x679C;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; (&#x30AC;&#x30F3;&#x30DE; H2AX &#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#xFF09; &#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;H2AX &#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; H2AX &#x6B20;&#x640D; (H2AX(Delta)/Delta) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x840C;&#x82BD;&#x671F;&#x306E;&#x830E; (ES) &#x7D30;&#x80DE;&#x3002; &#x751F;&#x6210;H2AX (&#x30C7;&#x30EB;&#x30BF;)/&#x30C7;&#x30EB;&#x30BF; ES &#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x5B9F;&#x5B58;&#x3057;&#x5F97;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x96FB;&#x96E2;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA; &#xFF08;IR&#xFF09; &#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x3067; IR &#x8A98;&#x767A;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;H2AX &#x81EA;&#x4F53;&#x305F;&#x3081; NHEJ &#x306F;&#x5FC5;&#x8981;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093; H2AX (&#x30C7;&#x30EB;&#x30BF;)/&#x30C7;&#x30EB;&#x30BF; ES &#x7D30;&#x80DE;&#x6B63;&#x5E38;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3068;&#x5FE0;&#x5B9F;&#x5EA6; V (D) J &#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306E;&#x904E;&#x6E21;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x305F; in vivo &#x3067;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;H2AX (&#x30C7;&#x30EB;&#x30BF;)/&#x30C7;&#x30EB;&#x30BF; ES &#x7D30;&#x80DE;&#x5C55;&#x793A;&#x5909;&#x66F4; IR &#x8A98;&#x8D77; BRCA1 &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AB;&#x30B9;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;H2AX &#x95A2;&#x6570;&#x304C;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E; DNA &#x4FEE;&#x5FA9;&#x3068;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x96FB;&#x96E2;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x3068;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3; H2AX &#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3002;

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; DNA &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xB098;&#xB204;&#xAE30; (DSBs) megabase chromatin &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xC758; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; (&#xAC10;&#xB9C8; H2AX &#xD615;&#xC131;)&#xC744; H2AX &#xCF54;&#xC5B4; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; &#xBCC0;&#xD615; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC;. H2AX &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC0DD;&#xC131; H2AX &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; (H2AX(Delta)/Delta) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; (ES&#xC758;) &#xC138;&#xD3EC;. H2AX (&#xB378;&#xD0C0;) / &#xB378;&#xD0C0; ES &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC804;&#xB9AC; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120; (IR)&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC801;&#xC678;&#xC120; &#xC720;&#xB3C4; genomic &#xBD88;&#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC804;&#xC2DC;. &#xD2B9;&#xD788;, H2AX &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; NHEJ &#xB2F9;&#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; H2AX (&#xB378;&#xD0C0;) / &#xB378;&#xD0C0; ES &#xC138;&#xD3EC; &#xACFC;&#xB3C4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC218;&#xC900; &#xBC0F; V (D) J &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xC758; &#xCDA9;&#xC2E4;&#xB3C4; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9BC;&#xD504; &#xAD6C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; H2AX (&#xB378;&#xD0C0;) &#xB378;&#xD0C0; ES &#xC138;&#xD3EC; &#xC804;&#xC2DC; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC801;&#xC678;&#xC120; &#xC720;&#xB3C4; BRCA1 &#xCD08;&#xC810; &#xD615;&#xC131; /. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; H2AX &#xD568;&#xC218; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; DNA &#xC218;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xAC8C;&#xB188; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC99D;&#xAC00; &#xC804;&#xB9AC; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120; &#xBBFC;&#xAC10;&#xB3C4; histone H2AX &#xBD80;&#xC7AC; genomic &#xBD88;&#xC548;&#xC815;&#xC131;.

En c&eacute;lulas de mam&iacute;feros, roturas de doble cadena de DNA (consejos escolares distritales) causan r&aacute;pida fosforilaci&oacute;n de la variante de histonas core H2AX (para formar gamma-H2AX) en dominios de cromatina megabase flanqueando los sitios de da&ntilde;o en el ADN. Para investigar el papel de H2AX en c&eacute;lulas de mam&iacute;feros, generamos deficiencia de H2AX (c&eacute;lulas madre embrionarias (ES) de H2AX(Delta)/Delta) rat&oacute;n. H2AX (Delta) / c&eacute;lulas madre embrionarias de Delta son viables. Sin embargo, son altamente sensibles a la radiaci&oacute;n ionizante (IR) y exhiben niveles elevados de inestabilidad gen&oacute;mica espont&aacute;nea e inducidas por IR. En particular, H2AX no se requiere para NHEJ propiamente porque H2AX (Delta) / c&eacute;lulas Delta ES apoyan los niveles normales y la fidelidad de recombinaci&oacute;n V (D) J en ensayos transitorios y tambi&eacute;n apoyan desarrollo de linfocitos in vivo. Sin embargo, H2AX (Delta) / exposici&oacute;n de las c&eacute;lulas Delta ES alterado BRCA1 inducida por IR formaci&oacute;n de enfoque. Nuestros resultados indican que H2AX funci&oacute;n es esencial para la reparaci&oacute;n del ADN mam&iacute;fera y estabilidad gen&oacute;mica.

Sensibilidad creciente radiaci&oacute;n ionizante y la inestabilidad gen&oacute;mica en la ausencia de la histona H2AX.

&#x6211;&#x4EEC;&#x91C7;&#x7528;&#x57FA;&#x56E0;&#x6253;&#x9776;&#x7814;&#x7A76; H2AX&#xFF0C;&#x5728;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x5468;&#x56F4; DNA &#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;H2AX &#x548C; p53 &#x7F3A;&#x9677;&#x5C0F;&#x9F20; (H(delta/delta)P(-/-)) &#x8FC5;&#x901F;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x672A;&#x6210;&#x719F;&#x7684; T &#x548C; B &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624;&#x548C;&#x5B9E;&#x4F53;&#x80BF;&#x7624;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;H2AX haploinsufficiency &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x5728;&#x6B63;&#x5E38;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x9020;&#x6210;&#x5BF9; p53 &#x7F3A;&#x9677;&#x80CC;&#x666F;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x66F4;&#x6210;&#x719F; B &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x80BF;&#x7624;&#x65E9;&#x671F;&#x53D1;&#x75C5;&#x3002;&#x5927;&#x591A;&#x6570; H2AX(delta/delta)p53(-/-) &#x6216; H2AX(+/delta)p53(-/-) B &#x6CBF;&#x88AD;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624; harbored &#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; &#xFF08;&#x8FD0;&#x52A8;&#x573A;&#xFF09; 12 / 15 &#xFF08;c-myc&#xFF09; &#x6613;&#x4F4D;&#x4E0E;&#x5F02;&#x5E38; V (D) J &#x6216;&#x7C7B;&#x7684;&#x6807;&#x5FD7;&#x5207;&#x6362;&#x91CD;&#x7EC4;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;H2AX(delta/delta)p53(-/-) &#x80F8;&#x817A;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624;&#x5DF2;&#x514B;&#x9686;&#x7684;&#x6613;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x5E76;&#x4E0D;&#x6D89;&#x53CA;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F4D;&#x70B9;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6269;&#x5F20;&#x671F;&#x95F4;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D1;&#x751F;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;H2AX &#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x9632;&#x6B62;&#x5F02;&#x5E38;&#x4FEE;&#x590D;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7F16;&#x7A0B;&#x548C;&#x4E00;&#x822C; DNA &#x65AD;&#x88C2;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#xFF0C;&#x5242;&#x91CF;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6291;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x548C;&#x5BF9;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x503C;&#x5F97;&#x6CE8;&#x610F;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;H2AX &#x6620;&#x5C04;&#x5230;&#x7ECF;&#x5E38;&#x6539;&#x53D8;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x764C;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x533A;&#x57DF;&#x53EF;&#x80FD;&#x7275;&#x8FDE;&#x7537;&#x5B50;&#x4E2D;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x3002;

&#x6291;&#x5236;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D; H2AX&#xFF1A; &#x5242;&#x91CF;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x5668;&#x7624;&#x6613;&#x4F4D;&#x548C;&#x80BF;&#x7624;&#x3002;

We employed gene targeting to study H2AX, a histone variant phosphorylated in chromatin surrounding DNA double-strand breaks. Mice deficient for both H2AX and p53 (H(delta/delta)P(-/-)) rapidly developed immature T and B lymphomas and solid tumors. Moreover, H2AX haploinsufficiency caused genomic instability in normal cells and, on a p53-deficient background, early onset of various tumors including more mature B lymphomas. Most H2AX(delta/delta)p53(-/-) or H2AX(+/delta)p53(-/-) B lineage lymphomas harbored chromosome 12 (IgH)/15 (c-myc) translocations with hallmarks of either aberrant V(D)J or class switch recombination. In contrast, H2AX(delta/delta)p53(-/-) thymic lymphomas had clonal translocations that did not involve antigen receptor loci and which likely occurred during cellular expansion. Thus, H2AX helps prevent aberrant repair of both programmed and general DNA breakage and, thereby, functions as a dosage-dependent suppressor of genomic instability and tumors in mice. Notably, H2AX maps to a cytogenetic region frequently altered in human cancers, possibly implicating similar functions in man.

Histone H2AX: a dosage-dependent suppressor of oncogenic translocations and tumors.

Nous avons utilis&eacute; le ciblage pour &eacute;tudier H2AX, une variante d&#39;histone phosphoryl&eacute;e dans la chromatine environnantes double-brins d&#39;ADN g&eacute;nique. Les souris d&eacute;ficientes pour H2AX et p53 (H(delta/delta)P(-/-)) a rapidement d&eacute;velopp&eacute; des lymphomes T et B immatures et tumeurs solides. En outre, H2AX haploinsuffisance provoqu&eacute; instabilit&eacute; g&eacute;nomique dans les cellules normales et, sur un fond de p53-deficient, l&#39;apparition pr&eacute;coce de tumeurs diverses, y compris les lymphomes B plus matures. La plupart des H2AX(delta/delta)p53(-/-) ou des H2AX(+/delta)p53(-/-) B lign&eacute;e lymphomes nourri chromosome 12 (des hommes ISFH) / 15 (c-myc) translocations avec poin&ccedil;ons de classe ou aberrants V (D) J Interrupteur de recombinaison. En revanche, H2AX(delta/delta)p53(-/-) Lymphome thymique avait des translocations clonales qui ne comportait pas de locus de r&eacute;cepteur de l&#39;antig&egrave;ne et qui s&#39;est probablement produite durant l&#39;expansion cellulaire. Ainsi, H2AX permet d&#39;&eacute;viter la r&eacute;paration aberrante des deux programm&eacute;s et coupure g&eacute;n&eacute;rale de l&#39;ADN et, par cons&eacute;quent, fonctionne comme un suppresseur de dose-d&eacute;pendante de l&#39;instabilit&eacute; g&eacute;nomique et des tumeurs chez les souris. En particulier, H2AX correspond &agrave; une r&eacute;gion cytog&eacute;n&eacute;tique fr&eacute;quemment alt&eacute;r&eacute;e dans les cancers humains, impliquant &eacute;ventuellement des fonctions similaires chez l&#39;homme.

Histone H2AX : suppresseur de dose-d&eacute;pendante des translocations oncog&egrave;nes et tumeurs.

Histone H2AX: eine Dosis-abh&#xE4;ngige Suppressor der onkogenen Translokationen und Tumoren.

Abbiamo impiegato gene targeting per studiare H2AX, una variante dell&#39;istone fosforilata in interruzioni di cromatina circostante DNA double-strand. Topi carenti sia per H2AX e p53 (H(delta/delta)P(-/-)) sviluppato rapidamente immaturi T e B linfomi e tumori solidi. Inoltre, H2AX aploinsufficienza causato instabilit&agrave; genomica in cellule normali e, su uno sfondo di p53-deficient, ad esordio precoce di tumori diversi tra cui linfomi B pi&ugrave; maturi. La maggior parte dei H2AX(delta/delta)p53(-/-) o H2AX(+/delta)p53(-/-) B lineage linfomi harbored cromosoma 12 (IgH) / 15 (c-myc) traslocazioni con caratteristiche distintive di aberrante V (D) J o classe switch ricombinazione. Al contrario, linfomi timici H2AX(delta/delta)p53(-/-) avevano traslocazioni clonale che non coinvolgono loci recettore antigene e che probabilmente si &egrave; verificato durante l&#39;espansione cellulare. Cos&igrave;, H2AX aiuta a prevenire la riparazione aberrante sia programmato e generale rottura del DNA e, quindi, funziona come un soppressore di dosaggio-dipendente di instabilit&agrave; genomica e tumori nei topi. In particolare, H2AX mappe di una regione citogenetica frequentemente alterata in tumori umani, possibilmente che funzioni simili nell&#39;uomo.

Istone H2AX: un soppressore di dosaggio-dipendente della traslocazione oncogenica e tumori.

H2AX&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x5468;&#x8FBA; DNA &#x4E8C;&#x672C;&#x9396;&#x5207;&#x65AD;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3; &#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x52C9;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;H2AX &#x3068; p53 &#x306E;&#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; (H(delta/delta)P(-/-)) &#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x672A;&#x719F; T &#x304A;&#x3088;&#x3073; B &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B;&#x30FB;&#x56FA;&#x5F62;&#x816B;&#x760D;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;H2AX &#x30CF;&#x30D7;&#x30ED;&#x306F;&#x6B63;&#x5E38;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068; p53 &#x6B20;&#x640D;&#x306E;&#x80CC;&#x666F;&#x3088;&#x308A;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F; B &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x65E9;&#x671F;&#x767A;&#x75C7;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E; H2AX(delta/delta)p53(-/-) &#x307E;&#x305F;&#x306F; H2AX(+/delta)p53(-/-) B &#x306E;&#x8840;&#x7D71;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B;&#x304B;&#x304F;&#x307E;&#x308F;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; 12 (IgH)/15 &#xFF08;c-myc) &#x8EE2;&#x5EA7;&#x7570;&#x5E38; V (D) J &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;H2AX(delta/delta)p53(-/-) &#x80F8;&#x817A;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x3092;&#x542B;&#x307E;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x306E;&#x5C55;&#x958B;&#x6642;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;H2AX &#x3067;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30EB;&#x30C9;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x4FEE;&#x7406;&#x3084;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A; DNA &#x306E;&#x7834;&#x640D;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3068;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x7528;&#x91CF;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30B5;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;H2AX &#x3092;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x764C;&#x3067;&#x5909;&#x66F4;&#x7D30;&#x80DE;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x5730;&#x57DF;&#x7537;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F; implicating &#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3; H2AX: &#x767A;&#x764C;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x7528;&#x91CF;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; H2AX chromatin &#xC8FC;&#xBCC0; DNA &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xB098;&#xB204;&#xAE30; phosphorylated &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; &#xBCC0;&#xD615;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC44;&#xD0DD;. &#xC950; H2AX &#xBC0F; p53 &#xACB0;&#xD54D; (H(delta/delta)P(-/-)) &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBBF8; &#xC219; T&#xC640; B lymphomas&#xACFC; &#xB2E8;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC885;&#xC591;. &#xB610;&#xD55C;, H2AX haploinsufficiency &#xC815;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0;, &#xB354; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; B lymphomas&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xC99D;&#xC0C1; p53 &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xBC30;&#xACBD;&#xC5D0; genomic &#xBD88;&#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xC57C;&#xAE30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; H2AX(delta/delta)p53(-/-) &#xB610;&#xB294; H2AX(+/delta)p53(-/-) B &#xD608;&#xD1B5; lymphomas &#xD53C;&#xB09C;&#xB41C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; 12 (&#xACE0;&#xB4F1;&#xD559;&#xAD50;) / &#xD0C8; &#xC120; V (D) J &#xB610;&#xB294; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xC758; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC73C;&#xB85C; 15 (c-myc) translocations &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58; &#xC7AC;&#xACB0;&#xD569;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, H2AX(delta/delta)p53(-/-) thymic lymphomas &#xD074;&#xB860; translocations&#xB294; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; loci&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xACE0;&#xB294; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; H2AX &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xBAA8;&#xB450;&#xC758; &#xD0C8; &#xC120; &#xC218;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xC77C;&#xBC18; DNA &#xD30C;&#xC190;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xBC0F;, &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xAC8C;&#xB188; &#xBD88;&#xC548;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC758;&#xC874; &#xC5B5;&#xC555;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9;. &#xD2B9;&#xD788;, H2AX cytogenetic &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC554; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xC5D0; &#xC790;&#xC8FC; &#xBCC0;&#xACBD; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xB0A8;&#xC790;&#xC5D0; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB9E4;&#xD551;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Histone H2AX: &#xAE08;&#xD558;&#xB294; translocations &#xBC0F; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC758;&#xC874; &#xC5B5;&#xC555;.

Empleamos gene targeting para estudiar H2AX, una variante de la histona fosforilada en roturas de doble cadena de DNA circundantes de cromatina. Ratones deficientes para H2AX y p53 (H(delta/delta)P(-/-)) r&aacute;pidamente desarrollaron tumores s&oacute;lidos y linfomas T y B inmaduros. Adem&aacute;s, H2AX haploinsufficiency provocado inestabilidad gen&oacute;mica en c&eacute;lulas normales y, sobre un fondo de p53 deficientes, inicio temprano de varios tumores incluyendo linfomas de B m&aacute;s maduros. La mayor&iacute;a H2AX(delta/delta)p53(-/-) H2AX(+/delta)p53(-/-) B linaje linfomas albergaban cromos&oacute;micas o 12 (IgH) / 15 (c-myc) translocaciones con se&ntilde;as de identidad de clase o aberrante V (D) J interruptor recombinaci&oacute;n. En contraste, los linfomas t&iacute;micos H2AX(delta/delta)p53(-/-) tuvieron clonales translocaciones que no implic&oacute; loci de receptor de ant&iacute;geno y que probablemente se produjo durante la expansi&oacute;n celular. As&iacute;, H2AX ayuda a prevenir reparaci&oacute;n aberrante de ambos programado y rotura general de ADN y, por tanto, funciona como un supresor de dosis dependiente de inestabilidad gen&oacute;mica y tumores en ratones. En particular, H2AX asigna a una regi&oacute;n citogen&eacute;tica alterada con frecuencia en los c&aacute;nceres humanos, implicando posiblemente funciones similares en el hombre.

Histona H2AX: un supresor de la dosis dependiente de translocaciones oncog&eacute;nicas y tumores.

&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;HSC&#xFF09; &#x6570;&#x5B57;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;HSC &#x7A33;&#x6001;&#x8C03;&#x8282;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684; BCL-2 &#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x6CA1;&#x6709;&#x7CBE;&#x786E;&#x7684;&#x5B9A;&#x4E49;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6709;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x7684;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x662F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x661F;&#x548C;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x9AD3;&#x7CFB;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;-1 (MCL-1&#xFF09;&#x3002;Mcl-1 &#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5220;&#x9664;&#x5BFC;&#x81F4;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x7684;&#x6D88;&#x878D;&#x3002;&#x8FD9;&#x5BFC;&#x81F4;&#x65E9;&#x671F;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x7956;&#x4EBA;&#x53E3;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x661F;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x589E;&#x52A0; Mcl-1 &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#xFF0C;MCL-1 &#x4EE5;&#x589E;&#x52A0;&#x51C0;&#x5316;&#x7684;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x6240;&#x9700;&#x3002;&#x5728;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC4;&#x7EC7;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x809D;&#x810F;&#x3001; Mcl-1 &#x5220;&#x9664;&#x6CA1;&#x6709;&#x524A;&#x5F31;&#x751F;&#x5B58;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;MCL-1 &#x662F;&#x786E;&#x4FDD;&#x65E9;&#x671F;&#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7A33;&#x6001;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x548C;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x3002;

&#x8D23;&#x6210;&#x6297;&#x51CB;&#x4EA1; MCL-1 &#x4E2D;&#x7684;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Apoptosis is important in controlling hematopoietic stem cell (HSC) numbers. However, the specific BCL-2 family member(s) that regulate HSC homeostasis are not precisely defined. We tested myeloid leukemia-1 (MCL-1) as an attractive candidate that is highly expressed in HSCs and regulated by growth factor signals. Inducible deletion of Mcl-1 in mice resulted in ablation of bone marrow. This resulted in the loss of early bone marrow progenitor populations, including HSCs. Moreover, growth factors including stem cell factor increased transcription of the Mcl-1 gene and required MCL-1 to augment survival of purified bone marrow progenitors. Deletion of Mcl-1 in other tissues, including liver, did not impair survival. Thus, MCL-1 is a critical and specific regulator essential for ensuring the homeostasis of early hematopoietic progenitors.

Obligate role of anti-apoptotic MCL-1 in the survival of hematopoietic stem cells.

L&#39;apoptose est importante dans le contr&ocirc;le des nombres de cellules souches h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques (CSH). Cependant, sp&eacute;cifiques BCL-2 membres de la famille qui r&eacute;gulent l&#39;hom&eacute;ostasie HSC ne sont pas d&eacute;finis pr&eacute;cis&eacute;ment. Nous avons test&eacute; 1 leuc&eacute;mie my&eacute;lo&iuml;de (MCL-1) comme un candidat attrayant qui est fortement exprim&eacute;e dans les CSH et r&eacute;glement&eacute;es par des signaux de facteur de croissance. Suppression inductible de Mcl-1 chez les souris a abouti &agrave; l&#39;ablation de la moelle osseuse. Cela a entra&icirc;n&eacute; la perte des premi&egrave;res populations de prog&eacute;niteurs moelle osseuse, y compris les CSH. En outre, facteurs de croissance, y compris le stem cell factor a augment&eacute; la transcription du g&egrave;ne Mcl-1 et requis de MCL-1 afin d&#39;augmenter la survie des anc&ecirc;tres de moelle purifi&eacute;e. Suppression de Mcl-1 dans les autres tissus, y compris le foie, ne portait pas atteinte &agrave; la survie. MCL-1 est donc un r&eacute;gulateur sp&eacute;cifique et critique essentiels pour assurer l&#39;hom&eacute;ostasie des prog&eacute;niteurs h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques pr&eacute;coces.

Obliger le r&ocirc;le d&#39;anti-apoptotique MCL-1 dans la survie des cellules souches h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques.

Verpflichten Rolle von anti-apoptotischen MCL-1 f&#xFC;r das &#xDC;berleben von h&#xE4;matopoetischen Stammzellen.

L&#39;apoptosi &egrave; importante nel controllo dei numeri di cellule staminali ematopoietiche (HSC). Tuttavia, le specifici membri famiglia BCL-2 che regolano l&#39;omeostasi HSC non precisamente definiti. Abbiamo testato la leucemia mieloide-1 (MCL-1) come un candidato interessante che &egrave; altamente espresso in HSCs e regolata da segnali di fattore di crescita. Eliminazione inducibile di Mcl-1 nei topi ha provocato l&#39;ablazione del midollo osseo. Ci&ograve; ha comportato la perdita delle prime popolazioni, progenitrici del midollo osseo, compresi HSCs. Inoltre, fattori di crescita, tra cui il fattore delle cellule staminali aumenta la trascrizione del gene della Mcl-1 e richiesto MCL-1 aumentare la sopravvivenza dei progenitori purificati del midollo osseo. Eliminazione della Mcl-1 in altri tessuti, tra cui il fegato, non ha alterato la sopravvivenza. Cos&igrave;, MCL-1 &egrave; un regolatore specifico e critico indispensabile per garantire l&#39;omeostasi dei primi progenitori ematopoietici.

Obbligare il ruolo di anti-apoptotic MCL-1, la sopravvivenza delle cellule staminali ematopoietiche.

&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306F;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE; (HSC) &#x306E;&#x6570;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;HSC &#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E; BCL 2 &#x5BB6;&#x65CF;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306F;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x306F;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B; HSCs &#x306E;&#x8868;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x5019;&#x88DC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;-1 (MCL-1&#xFF09; &#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Mcl 1 &#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x524A;&#x9664;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x306E;&#x30A2;&#x30D6;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F; HSCs &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;.&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; mcl-1 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3001;MCL 1 &#x7CBE;&#x88FD;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x3002;&#x524A;&#x9664; Mcl 1 &#x306E;&#x809D;&#x81D3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4ED6;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;MCL 1 &#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x7279;&#x5B9A;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x521D;&#x671F;&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x3092;&#x78BA;&#x4FDD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x6297;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; MCL 1 &#x306E;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x7FA9;&#x52D9;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3002;

Apoptosis&#xB294; &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (HSC) &#xC22B;&#xC790; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD2B9;&#xC815; HSC &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xC870;&#xC808; bcl-2 &#xAC00;&#xC871; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC815;&#xC758; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; Hscs&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xBC0F; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xD6C4;&#xBCF4;&#xB85C; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1;-1 (MCL-1) &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;. &#xC950;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; Mcl 1 &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC0AD;&#xC81C; &#xACE8; &#xC808;&#xC81C; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xC774; HSCs &#xB4F1; &#xCD08;&#xAE30; &#xACE8; &#xC870;&#xC0C1; &#xC778;&#xAD6C; &#xC190;&#xC2E4; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;&#xB294; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; Mcl-1 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; MCL-1 &#xC21C;&#xD654; &#xACE8; progenitors&#xC758; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;. &#xAC04;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; Mcl 1&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C;&#xB294; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xC190;&#xC0C1; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, MCL 1 &#xCD08;&#xAE30; hematopoietic progenitors&#xC758; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xC720;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC911;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xD2B9;&#xC815; &#xADDC;&#xC81C; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xC548;&#xD2F0;-apoptotic MCL-1 &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560; &#xC758;&#xBB34;&#xB97C;.

La apoptosis es importante en el control de n&uacute;meros de c&eacute;lulas madre hematopoy&eacute;ticas (HSC). Sin embargo, los miembros espec&iacute;ficos de familias BCL-2 que regulan la homeostasis HSC no son precisamente definidos. Probamos leucemia mieloide-1 (MCL-1) como un candidato atractivo que es altamente expresada en HSCs y regulada por se&ntilde;ales de factor de crecimiento. Eliminaci&oacute;n inducible de Mcl-1 en ratones dio lugar a la ablaci&oacute;n de la m&eacute;dula &oacute;sea. Esto dio lugar a la p&eacute;rdida de principios poblaciones de progenitoras de m&eacute;dula &oacute;sea, incluyendo HSCs. Por otra parte, factores de crecimiento como factor de c&eacute;lulas madre aument&oacute; la transcripci&oacute;n del gen Mcl-1 y requiere MCL-1 aumentar la supervivencia de progenitores de m&eacute;dula purificada. Eliminaci&oacute;n de Mcl-1 en otros tejidos, incluyendo el h&iacute;gado, no afecten negativamente a supervivencia. As&iacute;, MCL-1 es un regulador cr&iacute;tico y espec&iacute;fico esencial para garantizar la homeostasis de progenitores hematopoy&eacute;ticos tempranos.

Obliga a papel de anti-apoptotic MCL-1 en la supervivencia de las c&eacute;lulas madre hematopoy&eacute;ticas.

B &#x7EC6;&#x80DE;&#x7A33;&#x6001;&#x7EF4;&#x6301;&#x6301;&#x7EED;&#x4E0D;&#x65AD;&#x5730;&#x4EA7;&#x751F;&#x65B0;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x548C;&#x5176;&#x6D88;&#x9664;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5E73;&#x8861;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x6D46;&#x6DB2; BCL-2 &#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458; BAX &#x548C; BAK &#x662F;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x8C03;&#x8282; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x5728;&#x4E0D;&#x6210;&#x719F;&#x3001; &#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x9636;&#x6BB5;&#x3002;BAX &#x548C; BAK &#x662F;&#x591A;&#x4E2A;&#x523A;&#x6FC0;&#x8BF1;&#x5BFC; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x89E3;&#x5458;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;BAX-&#x548C; BAK &#x7F3A;&#x5931; B &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x663E;&#x793A;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8FDB;&#x7A0B; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x4EA4;&#x8054;&#x548C;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5411;&#x4E2D;&#x592E;&#x4EBA;&#x6C11;&#x653F;&#x5E9C; DNA&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC; Bax &#x548C; Bak &#x5C0F;&#x9F20;&#x7F3A;&#x5931;&#x7684;&#x6210;&#x4EBA;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E25;&#x91CD;&#x7684;&#x81EA;&#x8EAB;&#x514D;&#x75AB;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

BAX&#x3001; BAK B &#x7EC6;&#x80DE;&#x7A33;&#x6001;&#x548C;&#x81EA;&#x8EAB;&#x514D;&#x75AB;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x9884;&#x9632;&#x65B9;&#x9762;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

B cell homeostasis is maintained by a balance between the continual generation of new cells and their elimination. Here we show proapoptotic BCL-2 family members BAX and BAK are essential for regulating the number of B cells at both immature and mature developmental stages. BAX and BAK are critical mediators of B cell death induced by multiple stimuli. In addition, BAX- and BAK-deficient B cells display defective cell cycle progression to B cell receptor crosslinking and lipopolysaccharide, but not to CpG-DNA. Furthermore, inducible deletion of Bax and Bak in adult mice results in the development of severe autoimmune disease.

Essential role of BAX,BAK in B cell homeostasis and prevention of autoimmune disease.

Hom&eacute;ostasie cellulaire b est maintenu par un &eacute;quilibre entre la production continuelle de nouvelles cellules et de leur &eacute;limination. Ici, nous montrons des membres de la famille BCL-2 pro-apoptotique BAX et BAK sont essentiels pour le r&eacute;glage du nombre de lymphocytes B &agrave; des stades immatures et matures. BAX et BAK sont des m&eacute;diateurs critiques de la mort des cellules B induite par des stimuli multiples. En outre, BAX et BAK-B cellules d&eacute;ficientes en affichent la progression du cycle de cellules d&eacute;fectueuses B cell receptor r&eacute;ticulation et des lipopolysaccharides, mais pas d&#39;ADN CpG. En outre, inductible suppression de Bax et Bak chez la souris adulte se traduit par le d&eacute;veloppement de maladies auto-immunes graves.

R&ocirc;le essentiel de BAX, BAK dans l&#39;hom&eacute;ostasie des lymphocytes B et de la pr&eacute;vention d&#39;une maladie auto-immune.

&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x663E;&#x793A;&#x6838;&#x5FC3; Ig &#x91CD;&#x94FE; (&#x5BA4;&#x5185;&#x8FD0;&#x52A8;&#x573A;) &#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x589E;&#x5F3A;&#x5B50; (iEmu) V (D) J &#x548C;&#x7C7B;&#x4E2D;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x5207;&#x6362;&#x5728;&#x5BA4;&#x5185;&#x8FD0;&#x52A8;&#x573A;&#x8F68;&#x8FF9;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x66F4;&#x5145;&#x5206;&#x8BC4;&#x4F30;&#x6B64;&#x5143;&#x7D20;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5408;&#x5B50;&#x80DA;&#x7CFB;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x6838;&#x5FC3;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684; iEmu (cEmu) &#x4E5F;&#x88AB;&#x5220;&#x9664; &#xFF08;cEmu(Delta/Delta) &#x5C0F;&#x9F20;) &#x6216;&#x66FF;&#x6362; (cEmu(N/N) &#x5C0F;&#x9F20;) pgk-Neo(R) &#x76D2;&#x5F0F;&#x78C1;&#x5E26;&#x3002;CEmu(Delta/Delta) &#x5C0F;&#x9F20;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; B &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7F16;&#x53F7;&#xFF0C;&#x5728;&#x534F;&#x4F1A;&#x4E0E;&#x53D7;&#x635F;&#x7684; D &#x5230; J(H) &#x548C; V(H) &#x5230; DJ(H) &#x91CD;&#x6392;&#xFF0C;&#x800C; cEmu(N/N) &#x5C0F;&#x9F20;&#x5BA4;&#x5185;&#x8FD0;&#x52A8;&#x573A; V(D)J(H) &#x91CD;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x786E;&#x8BA4;&#x5176;&#x4ED6;&#x72EC;&#x8054;&#x4F53;&#x5143;&#x7D20;&#x914D;&#x5408; iEmu &#x5230; J(H) &#x91CD;&#x7EC4;&#x6267;&#x884C; D &#x4E2D;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x5757;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6; cEmu(Delta/Delta) &#x548C; cEmu(N/N) B &#x7CFB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x4E86;&#x76F8;&#x5BF9;&#x51CF;&#x5C11;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x80DA;&#x82BD;&#x7EBF;&#x8A8A;&#x672C;&#x6765;&#x81EA; J(H) &#x5730;&#x533A;&#x7684;&#x5BA4;&#x5185;&#x8FD0;&#x52A8;&#x573A;&#x8F68;&#x8FF9; &#xFF08;mu0 &#x548C; Imu &#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#xFF09; &#xFF1B;&#x867D;&#x7136;&#x53CC;&#x65B9;&#x90FD;&#x6709;&#x80DA;&#x82BD;&#x7EBF; V(H) &#x8A8A;&#x672C;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#xFF0C;cEmu &#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x5BA4;&#x5185;&#x8FD0;&#x52A8;&#x573A;&#x8F68;&#x8FF9; V (D) J &#x91CD;&#x7EC4;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD; J(H) &#x8FD1;&#x7AEF;&#x533A;&#x57DF;&#x8F68;&#x8FF9;&#x7684;&#x8F85;&#x52A9;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5916;&#x56F4; cEmu(Delta/Delta) B &#x7EC6;&#x80DE;&#x5DF2;&#x6B63;&#x5E38;&#x8868;&#x9762; Ig &#x548C;&#x76F8;&#x5BF9;&#x6B63;&#x5E38;&#x7C7B;&#x5207;&#x6362;&#x91CD;&#x7EC4;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;cEmu(Delta/Delta) B &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E5F;&#x6709;&#x76F8;&#x5BF9;&#x6B63;&#x5E38;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D85;&#x610F;&#x5916;&#x663E;&#x793A; cEmu &#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5176;&#x5BA4;&#x5185;&#x8FD0;&#x52A8;&#x573A;&#x53EF;&#x53D8;&#x533A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x53D8;&#x5F02;&#x3002;&#x5728;&#x5176;&#x80DA;&#x82BD;&#x7EBF; iEmu &#x7A81;&#x53D8;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x5C06;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x4ECA;&#x540E;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x6F84;&#x6E05; iEmu V(H)(D)J(H) &#x91CD;&#x7EC4;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x7684;&#x5BA4;&#x5185;&#x8FD0;&#x52A8;&#x573A;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x80DA;&#x82BD;&#x7EBF;&#x8F6C;&#x5F55;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x6F84;&#x6E05;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5BA4;&#x5185;&#x8FD0;&#x52A8;&#x573A;&#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x7684;&#x589E;&#x5F3A;&#x529F;&#x80FD;&#x901A;&#x8FC7;&#x80DA;&#x82BD;&#x884C;&#x5220;&#x9664;&#x3002;

Studies of chimeric mice demonstrated that the core Ig heavy chain (IgH) intronic enhancer (iEmu) functions in V(D)J and class switch recombination at the IgH locus. To more fully evaluate the role of this element in these and other processes, we generated mice homozygous for germ-line mutations in which the core sequences of iEmu (cEmu) were either deleted (cEmu(Delta/Delta) mice) or replaced with a pgk-Neo(R) cassette (cEmu(N/N) mice). The cEmu(Delta/Delta) mice had reduced B cell numbers, in association with impaired D to J(H) and V(H) to DJ(H) rearrangement, whereas cEmu(N/N) mice had a complete block in IgH V(D)J(H) recombination, confirming that additional cis elements cooperate with iEmu to enforce D to J(H) recombination. In addition, developing cEmu(Delta/Delta) and cEmu(N/N) B lineage cells had correspondingly decreased levels of germ-line transcripts from the J(H) region of the IgH locus (mu0 and Imu transcripts); although both had normal levels of germ-line V(H) transcripts, suggesting that cEmu may influence IgH locus V(D)J recombination by influencing accessibility of J(H) proximal regions of the locus. Consistent with chimera studies, peripheral cEmu(Delta/Delta) B cells had normal surface Ig and relatively normal class switch recombination. However, cEmu(Delta/Delta) B cells also had relatively normal somatic hypermutation of their IgH variable region genes, showing unexpectedly that the cEmu is not required for this process. The availability of mice with the iEmu mutation in their germ line will facilitate future studies to elucidate the roles of iEmu in V(H)(D)J(H) recombination in the context of IgH chromatin structure and germ-line transcription.

Elucidation of IgH intronic enhancer functions via germ-line deletion.

&Eacute;tudes des souris chim&eacute;riques ont d&eacute;montr&eacute; que les fonctions essentielles Ig cha&icirc;ne lourde (des hommes ISFH) intronic enhancer (iEmu) V (D) J et classe passer de recombinaison du locus IgH. Pour mieux &eacute;valuer le r&ocirc;le de cet &eacute;l&eacute;ment dans ces et d&#39;autres processus, nous avons g&eacute;n&eacute;r&eacute; des souris homozygotes pour les mutations germinales dans lequel l&#39;essentiel des s&eacute;quences d&#39;iEmu (cEmu) ont &eacute;t&eacute; soit supprim&eacute; (cEmu(Delta/Delta) souris) ou remplac&eacute;es avec une cassette de pgk-Neo(R) (cEmu(N/N), souris). Les souris cEmu(Delta/Delta) avaient r&eacute;duit le nombre de lymphocytes B, en liaison avec D avec facult&eacute;s affaiblies &agrave; J(H) et V(H) &agrave; DJ(H) de r&eacute;arrangement, tandis que les souris cEmu(N/N) avaient un bloc complet de recombinaison V(D)J(H) IgH, confirmant que les &eacute;l&eacute;ments cis suppl&eacute;mentaires coop&egrave;rent avec iEmu &agrave; appliquer D &agrave; recombinaison J(H). En outre, d&eacute;velopper des cellules de lign&eacute;e B cEmu(Delta/Delta) et cEmu(N/N) avait diminu&eacute; proportionnellement niveaux des transcriptions de la lign&eacute;e germinale de la r&eacute;gion J(H) du locus IgH (mu0 et transcriptions Imu) ; Bien que tous deux avaient des niveaux normaux de transcriptions V(H) de lign&eacute;e germinale, sugg&eacute;rant que cEmu peut-&ecirc;tre influer sur la recombinaison de V (D) J locus IgH en influant sur l&#39;accessibilit&eacute; des r&eacute;gions proximales J(H) du locus. Compatible avec les &eacute;tudes de chim&egrave;re, p&eacute;riph&eacute;rique cEmu(Delta/Delta) cellules B avaient Ig de surface normale et de classe relativement normale la recombinaison de commutateur. Cependant, les cellules cEmu(Delta/Delta) B a &eacute;galement eu l&#39;hypermutation somatique relativement normale de leurs g&egrave;nes de la r&eacute;gion variable IgH, montrant de fa&ccedil;on inattendue que le cEmu n&#39;est pas n&eacute;cessaire pour ce processus. La disponibilit&eacute; de souris avec la mutation iEmu dans leur lign&eacute;e germinale facilitera les &eacute;tudes futures afin d&#39;&eacute;lucider le r&ocirc;le d&#39;iEmu dans V(H)(D)J(H) de recombinaison dans le contexte de l&#39;ISFH chromatine structure et la lign&eacute;e germinale transcription.

&Eacute;lucidation des fonctions enhancer intronic IgH via la suppression de la lign&eacute;e germinale.

Studium der chimeric M&auml;use zeigten, dass die Ig schwere Kette (IgH) verband intronic Vergr&ouml;&szlig;erer (iEmu) Kernfunktionen in V (D) J und Klasse Rekombination bei der IgH-Locus wechseln. Um die Rolle dieses Elements in diesen und anderen Prozessen st&auml;rker zu bewerten, haben wir M&auml;use homozygot f&uuml;r Keimbahn-Mutationen, in denen der Kern waren entweder Sequenzen von iEmu (cEmu) (cEmu(Delta/Delta)-M&auml;use) gel&ouml;scht, oder ersetzt mit einer pgk-Neo(R)-Kassette (cEmu(N/N) M&auml;use) generiert. Die cEmu(Delta/Delta)-M&auml;use hatte B-Zell-Zahlen, in Verbindung mit gest&ouml;rter D J(H) und V(H), DJ(H)-Umlagerung, reduziert, w&auml;hrend cEmu(N/N) M&auml;use einen kompletten Block im IgH V(D)J(H) Rekombination hatte, best&auml;tigen, dass zus&auml;tzliche Cis-Elemente mit iEmu D zu J(H) Rekombination erzwingen zu kooperieren. Dar&uuml;ber hinaus hatte entwickeln Zellen f&uuml;r cEmu(Delta/Delta) und cEmu(N/N)-B-Linie entsprechend Ebenen der Keimbahn Abschriften aus der Region J(H) der IgH-Locus (mu0 und Imu Abschriften); abgenommen Obwohl beide normale Niveaus der Keimbahn V(H) Abschriften hatten, was darauf hindeutet, dass diese cEmu IgH Locus V (D) J Rekombination durch Einflussnahme auf die Zug&auml;nglichkeit von J(H) proximalen Regionen des Orts beeinflussen kann. Einklang mit Chim&auml;re Studien, periphere cEmu(Delta/Delta) hatte B-Zellen, normale Oberfl&auml;che Ig und relativ normal Klasse Rekombination zu wechseln. CEmu(Delta/Delta) B-Zellen hatte jedoch auch relativ normale somatische Hypermutation ihrer IgH Variable Region Gene, unerwartet zeigen, dass die cEmu nicht f&uuml;r diesen Prozess erforderlich ist. Die Verf&uuml;gbarkeit von M&auml;usen mit iEmu Mutation in die Keimbahn erleichtert zuk&uuml;nftige Studien um die Rollen der iEmu in V(H)(D)J(H) Rekombination im Rahmen der IgH Chromatin Struktur und Keimbahn Transkription zu erhellen.

Aufkl&auml;rung der IgH verband intronic Vergr&ouml;&szlig;erer Funktionen &uuml;ber Keimbahn l&ouml;schen.

Studi di topi chimerici hanno dimostrato che le funzioni principali Ig catene pesanti (IgH) intronic enhancer (iEmu) V (D) J e classe interruttore ricombinazione presso il locus IgH. Per valutare pi&ugrave; pienamente il ruolo di questo elemento in questi ed in altri processi, abbiamo generato topi omozigoti per mutazioni germinali nel quale il nucleo sequenze di iEmu (cEmu) erano sia cancellato (cEmu(Delta/Delta) topi) o sostituiti con una cassetta di pgk-Neo(R) (cEmu(N/N) topi). I topi cEmu(Delta/Delta) avevano ridotto numeri delle cellule di B, in associazione con compromissione D a J(H) e V(H) di riarrangiamento di DJ(H), mentre cEmu(N/N) topi avevano un blocco completo in IgH V(D)J(H) ricombinazione, confermando che cis ulteriori elementi cooperano con iEmu a imporre D a J(H) ricombinazione. Inoltre, lo sviluppo di cellule di derivazione B cEmu(Delta/Delta) e cEmu(N/N) era diminuita corrispondentemente livelli dei trascritti germinali dalla regione J(H) del locus IgH (mu0 e trascrizioni Imu); anche se entrambi avevano livelli normali di trascrizioni di germe-linea V(H), suggerendo che cEmu possono influenzare la ricombinazione di V (D) J locus IgH influenzando l&#39;accessibilit&agrave; delle regioni prossimali J(H) il locus. Coerente con gli studi di chimera, cEmu(Delta/Delta) periferico le cellule B avevano Ig di superficie normale e relativamente normale classe switch ricombinazione. Tuttavia, le cellule cEmu(Delta/Delta) B avevano anche relativamente normale ipermutazione somatica dei loro geni regione variabile di IgH, mostrando inaspettatamente che il cEmu non &egrave; richiesto per questo processo. La disponibilit&agrave; di topi con mutazione iEmu nella loro linea germinale agevoler&agrave; futuri studi per chiarire il ruolo di iEmu nella ricombinazione V(H)(D)J(H) nel contesto di IgH cromatina struttura e germinale trascrizione.

Delucidazione delle funzioni enhancer intronic IgH tramite eliminazione germinale.

&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x7814;&#x7A76; V (D) J &#x3068;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x3067;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2; &#x30A4;&#x30B0;&#x91CD;&#x9396; (IgH) &#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3; &#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC; (iEmu) &#x95A2;&#x6570; IgH &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x518D;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x5207;&#x308A;&#x66FF;&#x3048;&#x3066;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x3053;&#x306E;&#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x3088;&#x308A;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x307E;&#x305F;&#x306F; pgk-Neo(R) &#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8; &#xFF08;cEmu(N/N) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#xFF09; &#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x30DB;&#x30E2; iEmu (cEmu) &#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x30B3;&#x30A2; &#xFF08;cEmu(Delta/Delta) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#xFF09; &#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x7D30;&#x83CC;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;CEmu(N/N) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5B8C;&#x5168;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x8FFD;&#x52A0; cis &#x8981;&#x7D20; J(H) &#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306B; D &#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B; iEmu &#x3068;&#x5354;&#x529B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3001;IgH V(D)J(H) &#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; cEmu(Delta/Delta) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; DJ(H) &#x8EE2;&#x4F4D;&#x969C;&#x5BB3; D &#x306B; J(H) &#x3068; V(H) &#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x3067;&#x306E; B &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6570;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;cEmu(Delta/Delta) &#x3068; cEmu(N/N) &#x306E; B &#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x76F8;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x751F;&#x6B96;&#x7CFB;&#x5217;&#x8EE2;&#x5199; IgH &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7; &#xFF08;mu0 &#x3068; Imu &#x6210;&#x7E3E;&#xFF09;; &#x306E; J(H) &#x5730;&#x57DF;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x305D;&#x306E; cEmu IgH &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7; V (D) J &#x7D44;&#x63DB;&#x3048; J(H) &#x8FD1;&#x4F4D;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x8ECC;&#x8DE1;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3059;&#x308B;&#x751F;&#x6B96;&#x7CFB;&#x5217;&#x306E; V(H) &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x304C;&#x3002;&#x672B;&#x68A2; cEmu(Delta/Delta) &#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x7814;&#x7A76;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x305F; B &#x7D30;&#x80DE;&#x901A;&#x5E38;&#x8868;&#x9762; Ig &#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x666E;&#x901A;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9; &#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;cEmu(Delta/Delta) B &#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x304C;&#x4E88;&#x671F;&#x305B;&#x305A;&#x3001;cEmu &#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x5F7C;&#x3089; IgH &#x306E;&#x53EF;&#x5909;&#x9818;&#x57DF;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x8D85;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x751F;&#x6B96;&#x7CFB;&#x5217;&#x306E; iEmu &#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x53EF;&#x7528;&#x6027; iEmu IgH &#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x751F;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E; V(H)(D)J(H) &#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x751F;&#x6B96;&#x7CFB;&#x5217;&#x524A;&#x9664;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; IgH &#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3; &#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x89E3;&#x660E;

Chimeric &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD575;&#xC2EC; Ig &#xBB34;&#xAC70;&#xC6B4; &#xCCB4;&#xC778; (IgH) intronic &#xC99D;&#xAC15; (iEmu) &#xD568;&#xC218; V (D) J &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; IgH &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xD658; &#xC124;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB354;&#xC6B1; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC950; homozygous &#xC138;&#xADE0; &#xC120; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; iEmu (cEmu)&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC911; &#xD558;&#xB098; &#xD588;&#xB2E4; &#xCF54;&#xC5B4; (cEmu(Delta/Delta) &#xC950;)&#xB97C; &#xC0AD;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB610;&#xB294; &#xB300;&#xCCB4; pgk-Neo(R) &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8; (cEmu(N/N) &#xC950;) &#xC0DD;&#xC131; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. CEmu(Delta/Delta) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; cEmu(N/N) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xCD94;&#xAC00; cis &#xC694;&#xC18C; iEmu D J(H) &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9;&#xD560; &#xD611;&#xC870; &#xD655;&#xC778; IgH V(D)J(H) &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xC5D0; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xBE14;&#xB85D; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC18;&#xBA74; &#xD611;&#xD68C; &#xC7A5;&#xC560;&#xC778;&#xB41C; D&#xB294; J(H) &#xBC0F; V(H)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; DJ(H) &#xC7AC;&#xBC30;&#xCE58;, B &#xC138;&#xD3EC; &#xC22B;&#xC790;&#xB97C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. CEmu(Delta/Delta) &#xBC0F; cEmu(N/N) B &#xD608;&#xD1B5; &#xC140; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138;&#xADE0; &#xC120; &#xC131;&#xC801; &#xC99D;&#xBA85;&#xC11C; (mu0&#xC640; Imu &#xB179;&#xCDE8; &#xB85D;); IgH &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC758; J(H) &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xB808;&#xBCA8; &#xAC10;&#xC18C; &#xB300;&#xC751; &#xD558; &#xAC8C; &#xD588;&#xB2E4; &#xB610;&#xD55C;, &#xBE44;&#xB85D; &#xB458; &#xB2E4; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC138;&#xADE0; &#xC120; V(H) &#xC0AC;&#xBCF8;, &#xADF8; Cemu&#xB294; &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC758; J(H) &#xC778;&#xC811; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC5EC; IgH &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4; V (D) J &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC904; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; &#xC5F0;&#xAD6C;, &#xC8FC;&#xBCC0; Cemu(delta/delta)&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; B &#xC138;&#xD3EC; &#xC815;&#xC0C1; &#xD45C;&#xBA74; Ig&#xC640; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; &#xC7AC;&#xACB0;&#xD569; &#xC804;&#xD658; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, cEmu(Delta/Delta) B &#xC140; &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xAC8C; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB294; Cemu&#xC774;&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xACE0;&#xB4F1;&#xD559;&#xAD50; &#xBCC0;&#xC218; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; hypermutation&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC138;&#xADE0; &#xC120; iEmu &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC640; &#xC950;&#xC758; &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131; IgH chromatin &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xC138;&#xADE0; &#xC120; &#xC804;&#xC0AC;&#xC758; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; V(H)(D)J(H) &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xC5D0; Iemu&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xD558; &#xBBF8;&#xB798; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4;&#xD560; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;.

IgH intronic &#xD5A5;&#xC0C1; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC138;&#xADE0; &#xC120; &#xC0AD;&#xC81C;&#xC758; &#xD574;&#xBA85;.

Los estudios de ratones quim&eacute;ricos demostraron que las funciones de intronic reforzador (iEmu) de la cadena pesada (IgH) b&aacute;sicas Ig en la clase y V (D) J interruptor de recombinaci&oacute;n en el locus IgH. Evaluar m&aacute;s a fondo el papel de este elemento en &eacute;stos y otros procesos, hemos generado ratones homocig&oacute;ticos para las mutaciones de l&iacute;nea germinal en la que el n&uacute;cleo de secuencias de iEmu (cEmu) fueron eliminados (cEmu(Delta/Delta) ratones) o reemplazados con cintas de pgk-Neo(R) (cEmu(N/N) ratones). Los ratones cEmu(Delta/Delta) hab&iacute;an reducido n&uacute;mero de c&eacute;lulas de B, en asociaci&oacute;n con deterioro D a j y v (h) a cambio de DJ(H), mientras que cEmu(N/N) ratones ten&iacute;an un bloque completo en la recombinaci&oacute;n de IgH V(D)J(H), confirmando que elementos cis adicional cooperan con iEmu para hacer cumplir D a recombinaci&oacute;n de j. Adem&aacute;s, desarrollo cEmu(Delta/Delta) y cEmu(N/N) c&eacute;lulas de linaje B correspondientemente hab&iacute;a disminuido los niveles de las transcripciones de la l&iacute;nea germinal de la regi&oacute;n de j del locus IgH (mu0 y transcripciones de la Imu); Aunque ambos ten&iacute;an niveles normales de transcripciones de v (h) de la l&iacute;nea germinal, sugiriendo que CEMU puede influir en la recombinaci&oacute;n de V (D) J locus IgH por influir en la accesibilidad de regiones proximales j del lugar geom&eacute;trico. Consistente con estudios de quimera, cEmu(Delta/Delta) perif&eacute;rica c&eacute;lulas B ten&iacute;an Ig de superficie normal y relativamente normal clase interruptor recombinaci&oacute;n. Sin embargo, las c&eacute;lulas cEmu(Delta/Delta) B tambi&eacute;n ten&iacute;an relativamente normal hipermutaci&oacute;n som&aacute;tica de sus genes de la regi&oacute;n variable de IgH, mostrando inesperadamente que la cEmu no se requiere para este proceso. La disponibilidad de los ratones con la mutaci&oacute;n de iEmu en su l&iacute;nea germinal facilitar&aacute; los estudios futuros para dilucidar el papel de iEmu en V(H)(D)J(H) de recombinaci&oacute;n en el contexto de la transcripci&oacute;n de estructura y de la l&iacute;nea germinal de cromatina IgH.

Aclaraci&oacute;n de las funciones de potenciador intronic IgH mediante la eliminaci&oacute;n de la l&iacute;nea germinal.

&#x6297;&#x51CB;&#x4EA1;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; BCL-2 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5728;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; &#xFF08;ER&#xFF09;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5982;&#x4F55;&#x6B64;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x89C4;&#x7BA1;&#x548C;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x5B83;&#x8C03;&#x8282;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x51C0;&#x5316;&#x542B; BCL-2 &#x4ECE; ER &#x819C;&#x7684;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x53D1;&#x73B0; BCL-2 co-purified &#x4E0E;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;/&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#xFF0C;PP2A &#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x3002;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; PP2A &#x548C; BCL-2 &#x5728;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4;&#x534F;&#x4F1A;&#x88AB;&#x7ECF; co &#x6C89;&#x6DC0;&#x548C;&#x5FAE;&#x56CA;&#x85FB;&#x6BD2;&#x7D20;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x7EAF;&#x5316;&#x3002;&#x51FB;&#x5012;&#x6216;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x6291;&#x5236; PP2A &#x5BFC;&#x81F4;&#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; BCL-2 &#x548C;&#x5BFC;&#x81F4; BCL-2 &#x6C34;&#x5E73;&#x6574;&#x4F53;&#x4E0B;&#x964D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x6B64;&#x9000;&#x5316;&#x662F;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5728;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x884C;&#x4E8B;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x3002;&#x53CD;&#x8FC7;&#x6765;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; PP2A &#x5BFC;&#x81F4;&#x62AC;&#x9AD8;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; BCL-2&#x3002;&#x6700;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; PP2A &#x62C6;&#x88C5;&#x81F4;&#x654F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5BF9;&#x51E0;&#x7C7B;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x523A;&#x6FC0; &#xFF08;&#x5305;&#x62EC; ER &#x5E94;&#x529B;&#xFF09;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6548;&#x679C;&#x5E9F;&#x9664;&#x7279;&#x8272;&#x6572;&#x5728;&#x975E; phosphorylatable BCL-2 &#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x80CC;&#x666F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x652F;&#x6301;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF0C;PP2A &#x4ECB;&#x5BFC; BCL-2 &#x8131;&#x78F7;&#x88AB;&#x9700;&#x8981;&#x4ECE;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x964D;&#x89E3;&#xFF0C;&#x5F71;&#x54CD;&#x6297;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x5E94;&#x6FC0;&#x4FDD;&#x62A4; BCL-2&#x3002;

PP2A &#x8C03;&#x8282; BCL-2 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x53CA;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x964D;&#x89E3;&#x5728;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x3002;

Anti-apoptotic activity of BCL-2 is mediated by phosphorylation at the endoplasmic reticulum (ER), but how this phosphorylation is regulated and the mechanism(s) by which it regulates apoptosis are unknown. We purified macromolecular complexes containing BCL-2 from ER membranes and found that BCL-2 co-purified with the main two subunits of the serine/threonine phosphatase, PP2A. The association of endogenous PP2A and BCL-2 at the ER was verified by co-immunoprecipitation and microcystin affinity purification. Knock down or pharmacological inhibition of PP2A caused degradation of phosphorylated BCL-2 and led to an overall reduction in BCL-2 levels. We found that this degradation was due to the action of the proteasome acting selectively at the ER. Conversely, overexpression of PP2A caused elevation in endogenous BCL-2. Most importantly, we found that PP2A knock down sensitized cells to several classes of death stimuli (including ER stress), but this effect was abolished in a genetic background featuring knock in of a non-phosphorylatable BCL-2 allele. These studies support the hypothesis that PP2A-mediated dephosphorylation of BCL-2 is required to protect BCL-2 from proteasome-dependent degradation, affecting resistance to ER stress.

PP2A regulates BCL-2 phosphorylation and proteasome-mediated degradation at the endoplasmic reticulum.

L&#39;activit&eacute; anti-apoptotique BCL-2 est m&eacute;di&eacute;e par la phosphorylation au r&eacute;ticulum endoplasmique (re), mais comment cette phosphorylation est r&eacute;glement&eacute;e et l&#39;ou les m&eacute;canismes par lesquels elle r&eacute;glemente l&#39;apoptose sont inconnu. Nous avons purifi&eacute; des complexes macromol&eacute;culaires contenant la prot&eacute;ine BCL-2 des membranes ER et que BCL-2 co-purifi&eacute;es avec deux sous-unit&eacute;s principales de la s&eacute;rine/thr&eacute;onine phosphatase, PP2A. L&#39;association de PP2A endog&egrave;ne et BCL-2 &agrave; l&#39;ER a &eacute;t&eacute; v&eacute;rifi&eacute;e par co-immunopr&eacute;cipitation et microcystine purification d&#39;affinit&eacute;. Abattre ou inhibition pharmacologique de PP2A entra&icirc;n&eacute; la d&eacute;gradation du phosphoryl&eacute;s BCL-2 et a conduit &agrave; une r&eacute;duction des niveaux de BCL-2. Nous avons constat&eacute; que cette d&eacute;gradation est due &agrave; l&#39;action du prot&eacute;asome agissant s&eacute;lectivement &agrave; l&#39;ER. &Agrave; l&#39;inverse, la surexpression de PP2A caus&eacute; &eacute;l&eacute;vation endog&egrave;ne de BCL-2. Plus important encore, nous avons constat&eacute; que PP2A d&eacute;mantelez les cellules sensibilis&eacute;es &agrave; plusieurs classes de stimuli (y compris stress du re) de la mort, mais cet effet a &eacute;t&eacute; abolie dans un fond g&eacute;n&eacute;tique avec knock dans d&#39;un all&egrave;le non phosphorylable de BCL-2. Ces &eacute;tudes appuient l&#39;hypoth&egrave;se selon laquelle la m&eacute;diation PP2A d&eacute;phosphorylation de la prot&eacute;ine BCL-2 est n&eacute;cessaire pour prot&eacute;ger le BCL-2 de la d&eacute;gradation du prot&eacute;asome d&eacute;pendante, affectant la r&eacute;sistance au stress du re.

PP2A r&eacute;glemente la phosphorylation de la prot&eacute;ine BCL-2 et d&eacute;gradation induite par le prot&eacute;asome dans le r&eacute;ticulum endoplasmique.

Anti-Apoptotic Aktivit&auml;t der BCL-2 wird vermittelt durch Phosphorylierung an dem Endoplasmatischen Retikulum (ER), aber wie diese Phosphorylierung wird reguliert und die Mechanismen, mit denen es Apoptosis reguliert, sind unbekannt. Wir gereinigt Makromolekulare komplexe, die mit BCL-2 von ER-Membranen und festgestellt, dass mit die wichtigsten zwei Untereinheiten des Serin/Threonin-Phosphatase, PP2A BCL-2 co-purified. Der Verband der endogenen PP2A und BCL-2, bei der ER wurde vom co-Immunopr&auml;zipitation und Microcystin-Affinit&auml;tsreinigung best&auml;tigt. Knock down oder pharmakologische Hemmung der PP2A verursachte Verschlechterung der phosphorylierten BCL-2 und f&uuml;hrte zu eine allgemeine R&uuml;ckgang der BCL-2 Ebenen. Wir fanden, dass diese Verschlechterung aufgrund der Wirkungsweise von der Proteasom, die selektiv auf die ER t&auml;tig war. Umgekehrt verursacht eine &Uuml;berexpression von PP2A H&ouml;he in endogene BCL-2. Am wichtigsten ist, fanden wir, dass PP2A Knock down sensibilisierte Zellen auf verschiedene Klassen von Tod Reize (einschlie&szlig;lich ER Spannung), aber dieser Effekt einen genetischen Hintergrund mit Knock-out in der ein nicht-phosphorylatable BCL-2-Allel abgeschafft wurde. Diese Studien unterst&uuml;tzen die Hypothese, die vermittelte PP2A Dephosphorylierung von BCL-2 ist erforderlich, um Schutz von BCL-2 vor Proteasom-abh&auml;ngige Erniedrigung, Widerstand ER Stress beeinflussen.

PP2A regelt BCL-2-Phosphorylierung und Proteasom-vermittelten Abbau bei dem Endoplasmatischen Retikulum.

Attivit&agrave; anti-apoptotic BCL-2 &egrave; mediato dalla fosforilazione al reticolo endoplasmatico (ER), ma come questa fosforilazione &egrave; regolata ed i meccanismi comprendono che regolarizza il apoptosis sono sconosciuti. Abbiamo purificato complessi macromolecolari contenenti BCL-2 da membrane ER e trovato che BCL-2 co-purified con le due subunit&agrave; principale della fosfatasi della serina/treonina, PP2A. L&#39;associazione di PP2A endogeni e BCL-2 al pronto soccorso &egrave; stata verificata da co-immunoprecipitazione e microcistina purificazione di affinit&agrave;. Abbattere o inibizione farmacologica di PP2A causato degradazione di fosforilata BCL-2 e ha portato a una generale riduzione dei livelli di BCL-2. Abbiamo trovato che questo degrado era dovuto all&#39;azione del proteasoma che agiscono in modo selettivo al pronto soccorso. Al contrario, sovraespressione di PP2A causato elevazione in endogeni BCL-2. Soprattutto, abbiamo trovato che PP2A abbattere le cellule sensibilizzate per diverse classi di stimoli di morte (tra cui lo stress ER), ma questo effetto &egrave; stata abolita in un background genetico caratterizzato da knock in di un allele non-phosphorylatable di BCL-2. Questi supporto studi l&#39;ipotesi che mediata PP2A defosforilazione di BCL-2 &egrave; richiesto per proteggere BCL-2 dalla degradazione del proteasoma-dipendente, che interessano la resistenza agli stress di ER.

PP2A regola la fosforilazione di BCL-2 e degradazione mediata dal proteasoma al reticolo endoplasmatico.

&#x6297;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x6D3B;&#x52D5; BCL 2 &#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53; &#xFF08;ER&#xFF09; &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304C;&#x8ABF;&#x6574;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x69CB;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; BCL 2 &#x304B;&#x3089;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x819C;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x3001;BCL 2 &#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x8131;&#x71D0;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x3001;PP2A &#x306E;&#x4E3B;&#x306A; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#xFF0C; &#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5185;&#x56E0;&#x6027; PP2A &#x304A;&#x3088;&#x3073; bcl-2 ER &#x3067;&#x306E;&#x5354;&#x4F1A;&#x306F;&#x3001;co &#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x3068;&#x7D30;&#x83CC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;&#x6D44;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5012;&#x3059;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F; PP2A &#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178; bcl-2 &#x52A3;&#x5316;&#x3057; BCL 2 &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x524A;&#x6E1B;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x306F;&#x3001;ER &#x3067;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x305F;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;PP2A &#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x6A19;&#x9AD8;&#x5185;&#x56E0;&#x6027; BCL 2 &#x3067;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x3082;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306F;&#x3001;PP2A &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x611F;&#x4F5C;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x523A;&#x6FC0; (&#x542B;&#x3080;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#xFF09; &#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306B;&#x975E; phosphorylatable BCL 2 &#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x5099;&#x3048;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x80CC;&#x666F;&#x3067;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x7814;&#x7A76;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8; PP2A &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x8131;&#x71D0;&#x9178;&#x5316; bcl-2 &#x3067;&#x3059;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x306F; BCL 2 &#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x52A3;&#x5316;&#x304B;&#x3089;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3002;

PP2A &#x306F; BCL 2 &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x89E3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

BCL-2&#xC758; &#xC548;&#xD2F0;-apoptotic &#xD65C;&#xB3D9; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C;&#xC774; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB294; apoptosis &#xC870;&#xC808; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xB9C8;&#xB354;&#xBCF4;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; BCL-2&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xC815;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; BCL-2 &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;/&#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;, pp2a&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; co-purified &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC5D0;&#xC11C; BCL-2 &#xC0DD; PP2A &#xD611;&#xD68C; &#xACF5;&#xB3D9; immunoprecipitation &#xBC0F; microcystin &#xCE5C; &#xD654;&#xB825; &#xC815;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD5C8;&#xBB3C;&#xACE0; &#xB610;&#xB294; pp2a&#xC758; &#xC57D;&#xB9AC; &#xC800;&#xD574; phosphorylated BCL-2&#xC758; &#xC131;&#xB2A5; &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xBC0F; BCL-2 &#xB808;&#xBCA8;&#xC758; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xC8FC;&#xB3C4;. &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.&#xC774; &#xC800;&#xD558; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD560; &#xC608;&#xC815; &#xC774;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xB300;&#xB85C;, pp2a&#xC758; overexpression &#xC0DD; BCL-2&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xBC1C; &#xACE0;&#xB3C4; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC00;&#xC7A5; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC; &#xC8FD;&#xC74C; &#xC790;&#xADF9; (ER &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xD3EC;&#xD568;)&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xB9CC;&#xC774; &#xD6A8;&#xACFC;&#xB97C; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD558;&#xAC8C; &#xC140; &#xC544;&#xB798;&#xB85C; PP2A &#xB178;&#xD06C; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC73C;&#xB85C; &#xB178;&#xD06C;&#xC5D0; &#xBE44; phosphorylatable BCL-2 &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC801; &#xBC30;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC9C0;&#xC6D0; BCL-2 dephosphorylation PP2A &#xC911;&#xC7AC;&#xB294; &#xAC00;&#xC124; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xC885;&#xC18D; &#xC800;&#xD558;, ER &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC800;&#xD56D;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294;&#xC5D0;&#xC11C; BCL-2&#xB97C; &#xBCF4;&#xD638; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;.

PP2A &#xADDC;&#xC81C; BCL-2 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC640; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xC911;&#xC7AC; &#xC800;&#xD558;.

Actividad anti-apopt&oacute;tica BCL-2 est&aacute; mediada por la fosforilaci&oacute;n en el ret&iacute;culo endopl&aacute;smico (ER), pero c&oacute;mo se regula esta fosforilaci&oacute;n y desconocen los mecanismos por el que regula la apoptosis. Nosotros purificada complejos macromoleculares que contienen BCL-2 de membranas de ER y encontramos que BCL-2 co-purified con las principales dos subunidades de la fosfatasa de la serina/treonina, PP2A. La Asociaci&oacute;n de PP2A end&oacute;geno y BCL-2 en la sala de emergencias fue verificada por co-inmunoprecipitaci&oacute;n y microcistina purificaci&oacute;n de afinidad. Derribar o inhibici&oacute;n farmacol&oacute;gica de PP2A causado degradaci&oacute;n de BCL-2 fosforilado y condujo a una reducci&oacute;n general de los niveles de BCL-2. Encontramos que esta degradaci&oacute;n era debido a la acci&oacute;n del proteasoma act&uacute;an selectivamente en la sala de emergencia. Por el contrario, la sobreexpresi&oacute;n de PP2A caus&oacute; elevaci&oacute;n en end&oacute;geno BCL-2. Lo m&aacute;s importante, hemos encontrado que PP2A derribar las c&eacute;lulas sensibilizadas a varias clases de est&iacute;mulos de la muerte (incluyendo estr&eacute;s de ER), pero este efecto fue suprimido en un fondo gen&eacute;tico con knock-in de un alelo de BCL-2 no-phosphorylatable. Estos estudios apoyan la hip&oacute;tesis de que es mediada por PP2A desfosforilaci&oacute;n de BCL-2 se requiere para proteger la BCL-2 de la degradaci&oacute;n de la proteasoma dependiente, que afectan a la resistencia al estr&eacute;s de ER.

PP2A regula la fosforilaci&oacute;n de BCL-2 y la degradaci&oacute;n mediada por el proteasoma en el ret&iacute;culo endopl&aacute;smico.

&#x591A;&#x6F5C;&#x80FD;&#x53EF;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D; Oct4&#x3001; Sox2&#x3001; Klf4 &#x548C; C-myc &#x7684;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x5236;&#x8BA2;&#x4E86;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x56DB;&#x4E2A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x8868;&#x793A;&#x4ECE;&#x591A;&#x897F;&#x73AF;&#x7D20; &#xFF08;&#x6CA1;&#x6709;&#xFF09;-&#x8BF1;&#x5BFC;&#x578B;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x578B;&#x6784;&#x9020;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (iPS) &#x6765;&#x81EA;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE; (MEFs)&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x662F;&#x6B63;&#x5E38;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x5148;&#x51B3;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x8BC4;&#x9009;&#x6807;&#x8BB0;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x9F20;&#x6807; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x63A8;&#x5BFC;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x548C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x78B1;&#x6027;&#x78F7;&#x9178;&#x9176; (AP) &#x7B2C;&#x4E00;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x8DDF;&#x7279;&#x5B9A;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x6297;&#x539F; 1 (SSEA1)&#x3002;&#x5728;&#x6D41;&#x7A0B;&#x7684;&#x665A;&#x671F;&#x53EA;&#x89C2;&#x5BDF; Nanog &#x4E0E;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; Oct4 &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x6807;&#x5FD7;&#x7740;&#x5B8C;&#x5168;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5F0F;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x6269;&#x589E;&#x6240;&#x9700;&#x5C06;&#x81F3;&#x5C11; 12 &#x5929;&#x8868;&#x793A;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x751F;&#x6210; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x662F;&#x4E00;&#x6B65;&#x4E86;&#x89E3;&#x4E00;&#x4E9B;&#x5173;&#x4E8E;&#x8868;&#x89C2;&#x9057;&#x4F20;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;

&#x8BC4;&#x9009;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F4;&#x63A5;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x65F6;&#x5E8F;&#x6027;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

Pluripotency can be induced in differentiated murine and human cells by retroviral transduction of Oct4, Sox2, Klf4, and c-Myc. We have devised a reprogramming strategy in which these four transcription factors are expressed from doxycycline (dox)-inducible lentiviral vectors. Using these inducible constructs, we derived induced pluripotent stem (iPS) cells from mouse embryonic fibroblasts (MEFs) and found that transgene silencing is a prerequisite for normal cell differentiation. We have analyzed the timing of known pluripotency marker activation during mouse iPS cell derivation and observed that alkaline phosphatase (AP) was activated first, followed by stage-specific embryonic antigen 1 (SSEA1). Expression of Nanog and the endogenous Oct4 gene, marking fully reprogrammed cells, was only observed late in the process. Importantly, the virally transduced cDNAs needed to be expressed for at least 12 days in order to generate iPS cells. Our results are a step toward understanding some of the molecular events governing epigenetic reprogramming.

Sequential expression of pluripotency markers during direct reprogramming of mouse somatic cells.

Pluripotence peut &#xEA;tre induite dans les cellules diff&#xE9;renci&#xE9;es murines et humaines par transduction r&#xE9;trovirale de Oct4, Sox2, Klf4, et c-Myc. Nous avons &#xE9;labor&#xE9; une strat&#xE9;gie de reprogrammation dans laquelle ces quatre facteurs de transcription sont exprim&#xE9;s &#xE0; partir de la doxycycline (Dox)-inductible vecteurs lentiviraux. L&#x26;#39;utilisation de ces constructions inductibles, nous avons d&#xE9;riv&#xE9; de cellules souches pluripotentes induites (iPS) &#xE0; partir de fibroblastes embryonnaires de souris (MEF) et j&#x26;#39;ai trouv&#xE9; que l&#x26;#39;inhibition de transg&#xE8;ne est une condition pr&#xE9;alable &#xE0; la diff&#xE9;renciation cellulaire normale. Nous avons analys&#xE9; le moment de l&#x26;#39;activation marqueur connu pluripotence cellulaire au cours de la souris d&#xE9;rivation iPS et a observ&#xE9; que la phosphatase alcaline (AP) a &#xE9;t&#xE9; activ&#xE9;e en premier, suivie de l&#x26;#39;&#xE9;tape de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne sp&#xE9;cifique embryonnaire 1 (SSEA1). L&#x26;#39;expression de Nanog et le g&#xE8;ne endog&#xE8;ne Oct4, marquage de cellules enti&#xE8;rement reprogramm&#xE9;, n&#x26;#39;a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e que tardivement dans le processus. Surtout, les ADNc Virally transduites besoin d&#x26;#39;&#xEA;tre exprim&#xE9; pendant au moins 12 jours afin de g&#xE9;n&#xE9;rer des cellules iPS. Nos r&#xE9;sultats sont une &#xE9;tape vers la compr&#xE9;hension de certains des &#xE9;v&#xE9;nements mol&#xE9;culaires qui r&#xE9;gissent la reprogrammation &#xE9;pig&#xE9;n&#xE9;tique.

Expression s&#xE9;quentielle de marqueurs de pluripotence lors de la reprogrammation directe de cellules somatiques de souris

Pluripotenz kann durch retrovirale Transduktion von Oct4, Sox2, Klf4 und c-Myc in differenzierten murinen und menschlichen Zellen induziert werden. Wir haben geplant, eine Neuprogrammierung Strategie, in der diese vier Transkriptionsfaktoren von Doxycyclin (Dox) ausgedr&uuml;ckt werden-durch Induktion erh&auml;ltlichen Lentiviralen Vektoren. Verwenden diese durch Induktion Konstrukte, wir M&auml;useembryonalen (MEFs) induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS) abgeleitet und festgestellt, dass Transgene Unterdr&uuml;ckender Voraussetzung f&uuml;r normale Zelldifferenzierung. Wir haben das Timing der bekannten Pluripotenz Markierung Aktivierung w&auml;hrend Maus IPS-Zelle Ableitung analysiert und beobachtet, dass alkalische Phosphatase (AP) zuerst aktiviert wurde, gefolgt von embryonalen Stadium-spezifische-Antigen 1 (SSEA1). Ausdruck von Nanog und endogenen gen Oct4, Kennzeichnung vollst&auml;ndig umprogrammiert Zellen, wurde nur sp&auml;t im Prozess beobachtet. Wichtig ist, die Viral transduzierten cDNAs musste mindestens 12 Tage ausgedr&uuml;ckt werden, um iPS-Zellen zu generieren. Unsere Ergebnisse sind ein Schritt in Richtung Verst&auml;ndnis einiger der EZB epigenetischen Reprogrammierung molekularen Ereignisse.

Sequenzielle Ausdruck der Pluripotenz Marker w&auml;hrend direkte Neuprogrammierung der Maus somatischen Zellen.

Pluripotenza pu&ograve; essere indotta in cellule differenziate murine ed umane di trasduzione retrovirale di Oct4, Sox2, Klf4 e c-Myc. Noi abbiamo messo a punto una strategia di riprogrammazione in cui sono espressi questi fattori di quattro trascrizione da doxiciclina (dox)-inducible vettori lentivirali. Utilizzando questi costrutti inducibili, abbiamo derivato le cellule formative (iPS) pluripotenti indotte da fibroblasti embrionali (MEFs) e ha trovato che tacere transgene &egrave; un prerequisito per la differenziazione delle cellule normali. Abbiamo analizzato i tempi di attivazione marcatore noto pluripotenza durante la derivazione di cellule iPS mouse e osserva che della fosfatasi alcalina (AP) &egrave; stata attivata prima, seguita dalla fase specifica dell&#39;antigene embrionale 1 (SSEA1). Espressione di Nanog e il gene endogeno di Oct4, marcatura completamente riprogrammate cellule, &egrave; stata osservata solo alla fine del processo. Soprattutto, i cDNAs viralmente trasdotte doveva essere espresso per almeno 12 giorni al fine di generare le cellule iPS. I nostri risultati sono un passo verso la comprensione di alcuni degli eventi molecolari che regolano la riprogrammazione epigenetica.

Espressione sequenza dei marcatori di pluripotenza durante la diretta riprogrammazione di cellule somatiche del mouse.

&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x306F;&#x3001;Oct4&#x306E;&#x3001;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3001;KLF4&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;c-Myc&#x306E;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5F62;&#x8CEA;&#x5C0E;&#x5165;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5DEE;&#x5225;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;4&#x3064;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;DOX&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x8003;&#x6848;&#x3057;&#x305F;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x6027;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;MEF&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#xFF08;iPS&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x524D;&#x63D0;&#x6761;&#x4EF6;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;iPS&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4E2D;&#x306B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30EA;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;AP&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x80CE;&#x5150;&#x6027;&#x6297;&#x539F;1&#xFF08;SSEA1&#xFF09;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6700;&#x521D;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Nanog&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;Oct4&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x518D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x307F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x9045;&#x3044;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;iPS&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;12&#x65E5;&#x9593;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;cDNA&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x4E8B;&#x8C61;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B69;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x4E2D;&#x306B;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E3;&#x30EB;&#x5F0F;

Pluripotency &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; murine &#xBC0F; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; Oct4, Sox2, Klf4, &#xBC0F; c-Myc&#xC758; retroviral &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; doxycycline (dox)&#xC5D0;&#xC11C; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC774;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xACE0;&#xC548;-&#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; lentiviral &#xBCA1;&#xD130;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; (iPS) &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBBF8; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC; (MEFs)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xBC0F; transgene &#xC785;&#xC744; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC804;&#xC81C; &#xC870;&#xAC74; &#xC784;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; iPS &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xB798; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; pluripotency &#xB9C8;&#xCEE4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD0C0;&#xC774;&#xBC0D;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; &#xC54C;&#xCE7C;&#xB9AC; &#xC131; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; (AP) &#xBA3C;&#xC800;, &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB2E8;&#xACC4; &#xD2B9;&#xC815; &#xBC30;&#xC544; &#xD56D; &#xC6D0; 1 (SSEA1) &#xB4A4;&#xC5D0; &#xAD00;&#xCC30;. Nanog&#xC640; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xC7AC;&#xC124;&#xC815;&#xB41C; &#xC140; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC0DD; Oct4 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xACFC;&#xC815; &#xD6C4;&#xBC18;&#xC5D0; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, virally transduced cDNAs iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574;&#xC11C;&#xB294; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 12 &#xC77C; &#xD45C;&#xD604; &#xB420; &#xD544;&#xC694;&#xAC00; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; epigenetic &#xC7AC;&#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; &#xD1B5;&#xCE58; &#xBD84;&#xC790; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xC911; &#xC77C;&#xBD80;&#xB97C; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xD5A5;&#xD574; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC21C;&#xCC28; &#xC2DD; pluripotency &#xB9C8;&#xCEE4;&#xC758; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC9C1;&#xC811; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;.

Pluripotencia puede ser inducida en c&#xE9;lulas diferenciadas de murinos y humanos por la transducci&#xF3;n retroviral de Oct4, Sox2, Klf4 y c-Myc. Hemos dise&#xF1;ado una estrategia de reprogramaci&#xF3;n en la que estos cuatro factores de transcripci&#xF3;n se expresan a partir de doxiciclina (DOX)-inducible lentiviral vectores. El uso de estas construcciones inducible, hemos derivado madre pluripotentes inducidas (iPS) a partir de fibroblastos embrionarios de rat&#xF3;n (MEFs) y descubrieron que el silenciamiento del transg&#xE9;n es un requisito previo para la diferenciaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas normales. Hemos analizado la temporizaci&#xF3;n de la activaci&#xF3;n conocido marcador pluripotencia durante derivaci&#xF3;n rat&#xF3;n c&#xE9;lula iPS y observ&#xF3; que la fosfatasa alcalina (AP) se activ&#xF3; primero, seguido por la etapa espec&#xED;fica de ant&#xED;geno embrionario 1 (SSEA1). Expresi&#xF3;n de Nanog y el gen end&#xF3;geno Oct4, marcando c&#xE9;lulas totalmente reprogramadas, s&#xF3;lo se observ&#xF3; tarde en el proceso. Es importante destacar que los cDNAs de manera viral por transducidas necesaria para ser expresado por lo menos durante 12 d&#xED;as con el fin de generar c&#xE9;lulas iPS. Nuestros resultados son un paso hacia la comprensi&#xF3;n de algunos de los eventos moleculares que regulan la reprogramaci&#xF3;n epigen&#xE9;tica.

La expresi&#xF3;n secuencial de los marcadores de pluripotencia durante la reprogramaci&#xF3;n directa de c&#xE9;lulas de rat&#xF3;n som&#xE1;ticos

&#x7EC6;&#x80DE;&#x878D;&#x5408;&#x5DF2;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x8BB8;&#x591A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7528;&#x9014;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4EE3;&#x7684;&#x6742;&#x4EA4;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x548C;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#x3002;&#x878D;&#x5408;&#x4E00;&#x6B65;&#x662F;&#x542F;&#x52A8;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E2D;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;&#x6807;&#x51C6;&#x878D;&#x5408;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7A77;&#x4EBA;&#x548C;&#x968F;&#x673A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x63A5;&#x89E6;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6536;&#x76CA;&#x7387;&#x8F83;&#x4F4E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x5EA7;&#x7684;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8BBE;&#x5907;&#x4EE5;&#x6355;&#x83B7;&#x5E76;&#x6B63;&#x786E;&#x914D;&#x5BF9;&#x6210;&#x5343;&#x4E0A;&#x4E07;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x8BBE;&#x5907;&#xFF0C;&#x914D;&#x5BF9;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5B9E;&#x73B0;&#x914D;&#x5BF9;&#x6548;&#x7387;&#x8FBE; 70%&#x3002;&#x8BE5;&#x8BBE;&#x5907;&#x662F;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5316;&#x5B66;&#x548C;&#x7535;&#x878D;&#x5408;&#x534F;&#x8BAE;&#x517C;&#x5BB9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x7535;&#x878D;&#x5408;&#x6BD4;&#x5316;&#x5B66;&#x878D;&#x5408;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x819C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x6548;&#x7387;&#x8FBE; 89%&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x66F4;&#x9AD8;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D6;&#x5F97;&#x4E86;&#x5927;&#x4E8E; 50%&#x6B63;&#x786E;&#x914D;&#x5BF9;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x878D;&#x5408;&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x8BBE;&#x5907;&#xFF0C;5 &#x500D;&#x5927;&#x4E8E;&#x5546;&#x4E1A;&#x7535;&#x878D;&#x5408;&#x5BA4;&#x548C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6742;&#x79CD;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#x3002;

&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x914D;&#x5BF9;&#x548C;&#x878D;&#x5408;&#x3002;

Cell fusion has been used for many different purposes, including generation of hybridomas and reprogramming of somatic cells. The fusion step is the key event in initiation of these procedures. Standard fusion techniques, however, provide poor and random cell contact, leading to low yields. We present here a microfluidic device to trap and properly pair thousands of cells. Using this device, we paired different cell types, including fibroblasts, mouse embryonic stem cells and myeloma cells, achieving pairing efficiencies up to 70%. The device is compatible with both chemical and electrical fusion protocols. We observed that electrical fusion was more efficient than chemical fusion, with membrane reorganization efficiencies of up to 89%. We achieved greater than 50% properly paired and fused cells over the entire device, fivefold greater than with a commercial electrofusion chamber and observed reprogramming in hybrids between mouse embryonic stem cells and mouse embryonic fibroblasts.

Microfluidic control of cell pairing and fusion.

La fusion cellulaire a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; &#xE0; de nombreuses fins diff&#xE9;rentes, notamment la production d&#x26;#39;hybridomes et la reprogrammation des cellules somatiques. L&#x26;#39;&#xE9;tape de fusion est l&#x26;#39;&#xE9;v&#xE9;nement cl&#xE9; dans l&#x26;#39;initiation de ces proc&#xE9;dures. Techniques de fusion standard, cependant, fournir un contact pauvre cellule et al&#xE9;atoire, conduisant &#xE0; des rendements faibles. Nous pr&#xE9;sentons ici un dispositif microfluidique pour pi&#xE9;ger et bien des milliers de paires de cellules. L&#x26;#39;utilisation de ce dispositif, nous jumel&#xE9; diff&#xE9;rents types cellulaires, y compris les fibroblastes, les cellules souches embryonnaires de souris et des cellules de my&#xE9;lome, accro&#xEE;tre l&#x26;#39;efficacit&#xE9; d&#x26;#39;appariement jusqu&#x26;#39;&#xE0; 70%. Le dispositif est compatible avec les produits chimiques et des protocoles de fusion &#xE9;lectriques. Nous avons observ&#xE9; que la fusion &#xE9;lectrique &#xE9;tait plus efficace que la fusion chimique, avec des rendements de r&#xE9;organisation de la membrane jusqu&#x26;#39;&#xE0; 89%. Nous avons r&#xE9;alis&#xE9; plus de 50% de cellules correctement appari&#xE9;s et fusionn&#xE9;es sur l&#x26;#39;ensemble du dispositif, cinq fois plus &#xE9;lev&#xE9; qu&#x26;#39;avec une chambre &#xE9;lectrofusion commercial et observ&#xE9; une reprogrammation chez les hybrides entre les cellules souches embryonnaires de souris et de fibroblastes embryonnaires de souris.

Contr&#xF4;le de la microfluidique couplage cellulaire et Fusion

Zellfusion wurde f&uuml;r viele verschiedene Zwecke, einschlie&szlig;lich der Erzeugung von Hybridomen und Neuprogrammierung der somatischen Zellen verwendet. Der Fusion-Schritt ist das Schl&uuml;sselereignis in der Einleitung dieser Verfahren. Norm Fusion-Verfahren, bieten jedoch Arm und zuf&auml;llige Zelle Kontakt, was zu niedrigen Ertr&auml;gen. Wir stellen Ihnen hier ein Microfluidic-Ger&auml;t zum Trapping und richtig paar Tausende von Zellen. Mit diesem Ger&auml;t, gepaart wir verschiedene Zelltypen, einschlie&szlig;lich Fibroblasten, M&auml;useder embryonalen Stammzellen und Myelomazellen, koppeln Wirkungsgrade bis zu 70 % zu erreichen. Das Ger&auml;t ist kompatibel mit beiden chemischen und elektrischen Fusion-Protokolle. Wir beobachteten, dass elektrische Fusion effizienter als chemische Fusion mit Membran Reorganisation Wirkungsgrade von bis zu 89 ist %. Wir erreicht mehr als 50 % richtig gepaart und Zellen &uuml;ber das gesamte Ger&auml;t, verf&uuml;nffacht gr&ouml;&szlig;er als mit einer kommerziellen Elektroschweiss-Kammer und beobachteten Umprogrammierung in Hybriden zwischen M&auml;useder embryonalen Stammzellen und M&auml;useembryonalen verschmolzen.

Mikrofluidische Kontrolle der Zelle Paarung und Fusion.

Fusione cellulare &egrave; stata usata per molti scopi diversi, tra cui la generazione di ibridomi e riprogrammazione di cellule somatiche. Il punto di fusione &egrave; l&#39;evento chiave nell&#39;iniziazione di queste procedure. Tecniche di fusione standard, tuttavia, forniscono contatto cell poveri e casuale, che conduce a basse rese. Vi presentiamo qui un dispositivo microfluidico per intrappolare e abbinare correttamente migliaia di cellule. Utilizzando questo dispositivo, abbiamo abbinato diversi tipi di cellule, tra cui i fibroblasti, cellule staminali embrionali di topo e cellule di mieloma, raggiungere efficienze accoppiamento fino al 70%. Il dispositivo &egrave; compatibile con entrambi i protocolli fusione chimiche ed elettriche. Abbiamo osservato che la fusione elettrica era pi&ugrave; efficiente fusione chimica, con efficienze riorganizzazione membrana fino all&#39;89%. Abbiamo ottenuto maggiore di 50% correttamente accoppiato e fuse cellule sopra l&#39;intero dispositivo, cinque volte maggiore con una camera commerciale Elettrosaldabile e osservato riprogrammazione in ibridi tra cellule staminali embrionali di topo e fibroblasti embrionali del mouse.

Controllo microfluidico cella abbinamento e fusion.

&#x7D30;&#x80DE;&#x878D;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C9;&#x30FC;&#x30DE;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x3068;&#x518D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x76EE;&#x7684;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6A19;&#x6E96;&#x7684;&#x306A;&#x878D;&#x5408;&#x624B;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x4F4E;&#x53CE;&#x7387;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3001;&#x8CA7;&#x3057;&#x3044;&#x4EBA;&#x3005;&#x3084;&#x3001;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x89E6;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3057;&#x3001;&#x9069;&#x5207;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x6570;&#x5343;&#x4EBA;&#x3092;&#x30DA;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x30DF;&#x30A8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x3001;70&#xFF05;&#x307E;&#x3067;&#x30DA;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x3001;&#x30DA;&#x30A2;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3068;&#x4E92;&#x63DB;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x878D;&#x5408;&#x304C;&#x6700;&#x5927;89&#xFF05;&#x306E;&#x819C;&#x7D44;&#x7E54;&#x518D;&#x7DE8;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x5316;&#x3068;&#x5316;&#x5B66;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x5168;&#x4F53;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x9069;&#x5207;&#x306B;&#x30DA;&#x30A2;&#x3068;&#x878D;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;50&#xFF05;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x5546;&#x7528;&#x96FB;&#x6C17;&#x878D;&#x5408;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x4E94;&#x500D;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x96D1;&#x7A2E;&#x3067;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x3068;Fusion&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x5236;&#x5FA1;

&#xC140; &#xD4E8;&#xC804; &#xBC0F; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC7AC;&#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; hybridomas&#xC758; &#xC138;&#xB300;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9CE;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xBAA9;&#xC801;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB294;&#xC774; &#xC808;&#xCC28;&#xC758; &#xAC1C;&#xC2DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD0A4; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xD45C;&#xC900; &#xD4E8;&#xC804; &#xAE30;&#xBC95;, &#xB0AE;&#xC740; &#xC218;&#xC775;&#xB960;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; &#xAC00;&#xB09C; &#xD558; &#xACE0; &#xC784;&#xC758;&#xC758; &#xC140; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xC81C;&#xACF5;. &#xC120;&#xBB3C;&#xC774; &#xC5EC;&#xAE30; &#xD568;&#xC815; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC218;&#xCC9C; &#xAC1C;&#xC758; &#xC140; &#xC30D;&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xC7A5;&#xCE58;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC30D; &#xD6A8;&#xC728;&#xC744; &#xCD5C;&#xB300; 70%&#xAE4C;&#xC9C0; &#xB2EC;&#xC131; &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xD615;, &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;, &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; myeloma &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC30D;&#xC774; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xC7A5;&#xCE58;&#xB294; &#xBAA8;&#xB450; &#xD654;&#xD559; &#xBC0F; &#xC804;&#xAE30; &#xC735;&#xD569; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xD638;&#xD658;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC804;&#xAE30; &#xD4E8;&#xC804; &#xB9C9; &#xAC1C;&#xD3B8; &#xCD5C;&#xB300; 89% &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xD654;&#xD559; &#xC735;&#xD569; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 50% &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC9DD; &#xD558; &#xACE0; &#xC804;&#xCCB4; &#xC7A5;&#xCE58; &#xC694;&#xC18C;&#xAC00; &#xC0C1;&#xC5C5; electrofusion &#xCC54;&#xBC84;&#xC640; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD070; &#xBC0F; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC744; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBBF8; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0AC;&#xC774;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC735;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD070; &#xB2EC;&#xC131;.

&#xC140; &#xC30D; &#xBC0F; &#xC735;&#xD569;&#xC758; &#xBBF8;&#xC138; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La fusi&#xF3;n celular se ha utilizado para muchos fines diferentes, incluyendo la generaci&#xF3;n de hibridomas y reprogramaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas som&#xE1;ticas. El paso de la fusi&#xF3;n es el evento clave en la iniciaci&#xF3;n de estos procedimientos. Las t&#xE9;cnicas est&#xE1;ndar de fusi&#xF3;n, sin embargo, proporcionar un contacto pobre celda y al azar, dando lugar a rendimientos bajos. Presentamos aqu&#xED; un dispositivo de microfluidos para atrapar y adecuadamente miles de pares de c&#xE9;lulas. El uso de este dispositivo, emparejado diferentes tipos celulares, incluyendo fibroblastos, c&#xE9;lulas madre embrionarias de rat&#xF3;n y c&#xE9;lulas de mieloma, logrando eficiencias emparejamiento hasta el 70%. El dispositivo es compatible con los productos qu&#xED;micos y el&#xE9;ctricos protocolos de fusi&#xF3;n. Hemos observado que la fusi&#xF3;n el&#xE9;ctrica fue m&#xE1;s eficiente que la fusi&#xF3;n qu&#xED;mica, con eficiencias de reorganizaci&#xF3;n de la membrana de hasta un 89%. Hemos alcanzado mayor que 50% de c&#xE9;lulas correctamente emparejados y se fusionan sobre la totalidad del dispositivo, cinco veces mayor que con una c&#xE1;mara de electrofusi&#xF3;n comercial y observ&#xF3; la reprogramaci&#xF3;n de h&#xED;bridos entre las c&#xE9;lulas madre embrionarias de rat&#xF3;n y fibroblastos de embriones de rat&#xF3;n.

De control de microfluidos del emparejamiento de la c&#xE9;lula y la fusi&#xF3;n

&#x662F;&#x91CD;&#x65B0;&#x6392;&#x5217; &#xFF08;&#x901A;&#x4EA7;&#x6DA6;&#x76DB;) &#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x662F;&#x7814;&#x7A76; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x80B2;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x901A;&#x4EA7;&#x6DA6;&#x76DB;&#x88AB;&#x901A;&#x5E38;&#x9694;&#x79BB;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x76F8;&#x5173;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x957F;&#x671F;&#x57F9;&#x517B;&#x540E;&#x5F80;&#x5F80;&#x540E;&#x91CD;&#x590D;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x523A;&#x6FC0;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x65E0;&#x53EF;&#x907F;&#x514D;&#x5730;&#x503E;&#x659C; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4EBA;&#x53E3;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x968F;&#x673A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6574;&#x5408; TCR &#x963F;&#x5C14;&#x6CD5;&#x548C;&#x8D1D;&#x5854;&#x94FE;&#x548C;&#x4ECE; nonendogenous &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x8868;&#x793A;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x7F3A;&#x70B9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x8868;&#x89C2;&#x9057;&#x4F20;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x8F6C;&#x79FB;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x4E0E;&#x9884;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x60C5;&#x51B5;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x751F;&#x6210;&#x8868;&#x8FBE; TCR &#x4ECE;&#x5176;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x7684;&#x8F68;&#x8FF9;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5F15;&#x5165;&#x57FA;&#x56E0;&#x6539;&#x9020;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x76F8;&#x5BF9;&#x7684;&#x6613;&#x7528;&#x6027;&#x548C;&#x901F;&#x5EA6;&#x4E0E;&#x54EA;&#x79CD; transnuclear &#x6A21;&#x578B;&#x53EF;&#x4EE5;&#x83B7;&#x5F97;&#x5176;&#x4ED6;&#x75BE;&#x75C5;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x6784;&#x5EFA;&#x4E3A;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x3002;

Transnuclear &#x5C0F;&#x9F20;&#x4E0E;&#x9884;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x7279;&#x70B9;&#x5BF9;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x901A;&#x8FC7; SCNT &#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x3002;

Mice that are transgenic for rearranged antigen-specific T cell receptors (TCRs) are essential tools to study T cell development and function. Such TCRs are usually isolated from the relevant T cells after long-term culture, often after repeated antigen stimulation, which unavoidably skews the T cell population used. Random genomic integration of the TCR alpha and beta chain and expression from nonendogenous promoters represent additional drawbacks of transgenics. Using epigenetic reprogramming via somatic cell nuclear transfer, we demonstrated that T cells with predefined specificities against Toxoplasma gondii can be used to generate mouse models that express the TCR from their endogenous loci, without experimentally introduced genetic modification. The relative ease and speed with which such transnuclear models can be obtained holds promise for the construction of other disease models.

Transnuclear mice with predefined T cell receptor specificities against Toxoplasma gondii obtained via SCNT.

Les souris qui sont transg&#xE9;niques pour r&#xE9;arrang&#xE9;s sp&#xE9;cifiques de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne r&#xE9;cepteurs des cellules T (TCR) sont des outils essentiels pour &#xE9;tudier le d&#xE9;veloppement des cellules T et la fonction. TCR Ces sont g&#xE9;n&#xE9;ralement isol&#xE9;s &#xE0; partir des cellules T pertinentes apr&#xE8;s culture &#xE0; long terme, souvent apr&#xE8;s une stimulation antig&#xE9;nique r&#xE9;p&#xE9;t&#xE9;e, ce qui fausse in&#xE9;vitablement la population de cellules T utilis&#xE9;. Al&#xE9;atoire int&#xE9;gration g&#xE9;nomique de l&#x26;#39;alpha du TCR et de la cha&#xEE;ne b&#xEA;ta et d&#x26;#39;expression des promoteurs nonendogenous repr&#xE9;sentent des inconv&#xE9;nients suppl&#xE9;mentaires de produits transg&#xE9;niques. Utilisation de la reprogrammation &#xE9;pig&#xE9;n&#xE9;tique par transfert nucl&#xE9;aire de cellule somatique, nous avons d&#xE9;montr&#xE9; que les cellules T avec des sp&#xE9;cificit&#xE9;s pr&#xE9;d&#xE9;finies contre Toxoplasma gondii peut &#xEA;tre utilis&#xE9; pour g&#xE9;n&#xE9;rer des mod&#xE8;les de souris qui expriment le TCR de leurs loci endog&#xE8;nes, sans modification g&#xE9;n&#xE9;tique introduite exp&#xE9;rimentalement. La relative facilit&#xE9; et la rapidit&#xE9; avec laquelle ces mod&#xE8;les peuvent &#xEA;tre obtenus Transnuclear est prometteur pour la construction de mod&#xE8;les &#xE0; d&#x26;#39;autres maladies.

Souris Transnuclear avec des sp&#xE9;cificit&#xE9;s T pr&#xE9;d&#xE9;finis r&#xE9;cepteurs cellulaires contre Toxoplasma gondii obtenu par TNCS

M&auml;use, die transgenen f&uuml;r Antigen-spezifische T-Zell-Rezeptoren (TCRs) neu angeordnet werden sind wichtige Instrumente, T-Zell-Entwicklung und Funktion zu studieren. Solche TCRs sind in der Regel isoliert aus den relevanten T-Zellen nach Langzeitkultur, oft nach wiederholten Antigen Stimulation, die unweigerlich der T-Zellpopulation verwendet neigt. Zuf&auml;llige genomischen Integration der TCR-Alpha und Beta-Kette und Ausdruck von nonendogenous Veranstalter stellen zus&auml;tzliche Nachteile von gentechnisch ver&auml;nderten Pflanzen. Mit epigenetischen Reprogrammierung &uuml;ber somatischen, zeigten wir, dass T-Zellen mit vordefinierten Besonderheiten gegen Toxoplasma Gondii Mausmodelle generieren, die die TCR aus ihrer endogenen Loci, ohne versuchsweise eingef&uuml;hrte genetische Ver&auml;nderungen Ausdr&uuml;cken verwendet werden k&ouml;nnen. Die relative Leichtigkeit und Geschwindigkeit, mit welcher solche Transnuclear Modelle bezogen werden k&ouml;nnen, vielversprechend f&uuml;r den Bau von anderen Krankheitsmodelle.

Transnuclear M&auml;use mit vordefinierten T-Zell-Rezeptor Besonderheiten gegen Toxoplasma Gondii &uuml;ber SCNT gewonnen.

Topi transgenici per la ridisposizione delle cellule T antigene-specifici recettori (TCRs) che sono strumenti indispensabili per studiare la funzione e lo sviluppo delle cellule T. Tali TCRs sono solitamente isolate dalle cellule T rilevanti dopo coltura a lungo termine, spesso dopo stimolazione ripetuta dell&#39;antigene, che inevitabilmente inclina la popolazione di cellule T utilizzata. Integrazione genomic casuale della catena alfa e beta TCR ed espressione da nonendogenous promotori rappresentano ulteriori svantaggi di transgenica. Utilizzo di riprogrammazione epigenetica tramite trasferimento nucleare di cellule somatiche, abbiamo dimostrato che le cellule T con specificit&agrave; predefinite contro Toxoplasma gondii possono essere utilizzate per generare modelli di mouse che esprimono TCR da loro loci endogeni, senza modificazione genetica introdotta sperimentalmente. La relativa facilit&agrave; e la velocit&agrave; con cui tale transnuclear possono essere ottenuti modelli mantiene la promessa per la costruzione di altri modelli di malattia.

Transnuclear topi con specificit&agrave; del recettore predefiniti delle cellule T contro Toxoplasma gondii ottenuto tramite SCNT.

&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684;T&#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;TCR&#xFF09;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6B20;&#x304B;&#x305B;&#x306A;&#x3044;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;TCR&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306F;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x907F;&#x7684;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x3092;&#x6B6A;&#x3081;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x6297;&#x539F;&#x523A;&#x6FC0;&#x5F8C;&#x3001;&#x9577;&#x671F;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; nonendogenous&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x306E;TCR&#x306E;&#x3B1;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3B2;&#x9396;&#x3068;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x6B20;&#x70B9;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x539F;&#x866B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x4E8B;&#x524D;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x306B;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6539;&#x5909;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x304B;&#x3089;&#x306E;TCR&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3068;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x5BB9;&#x6613;&#x3055;&#x3068;&#x901F;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x69CB;&#x7BC9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x79D8;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

SCNT&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x539F;&#x866B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x4E8B;&#x524D;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;

&#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (TCRs)&#xB97C; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC815;&#xB82C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xB294; T &#xC804;&#xC9C0; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD544;&#xC218; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; Tcrs&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xAD00;&#xB828; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7A5;&#xAE30; &#xBB38;&#xD654; &#xD6C4; &#xC790;&#xC8FC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD53C;&#xD560; &#xAE30;&#xC6B8;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC18;&#xBCF5; &#xB41C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC790;&#xADF9; &#xD6C4;. TCR &#xC54C;&#xD30C;&#xC640; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xCCB4;&#xC778; &#xBC0F; nonendogenous &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC784;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; &#xD1B5;&#xD569; &#xC81C; &#xB2C9;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xB2E8;&#xC810;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; &#xD1B5;&#xD574; epigenetic &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Toxoplasma gondii&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBBF8;&#xB9AC; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; T &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3C4;&#xC785;&#xB41C; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791; &#xC5C6;&#xC774; &#xC0DD; loci&#xC758; TCR &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xB300;&#xC801; &#xC6A9;&#xC774;&#xC131;&#xACFC; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; transnuclear &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB2E4;&#xB978; &#xC9C8;&#xD658; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xAC74;&#xC124;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC57D;&#xC18D;&#xC744; &#xBCF4;&#xC720; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;.

Transnuclear &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; Toxoplasma gondii SCNT &#xD1B5;&#xD574; &#xC5BB;&#xC744; &#xB300; &#xD55C; &#xBBF8;&#xB9AC; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;.

Los ratones transg&#xE9;nicos que son de reordenamiento de ant&#xED;genos espec&#xED;ficos de receptores de c&#xE9;lulas T (TCR) es una herramienta esencial para estudiar el desarrollo de c&#xE9;lulas T y la funci&#xF3;n. Tales TCRs suelen aislarse de las c&#xE9;lulas T pertinentes despu&#xE9;s de cultivo prolongado, a menudo despu&#xE9;s de la estimulaci&#xF3;n repetida ant&#xED;geno, que inevitablemente sesga la poblaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T utilizado. Integraci&#xF3;n al azar gen&#xF3;mico de la alfa del TCR y la cadena beta y la expresi&#xF3;n de los promotores nonendogenous representan inconvenientes adicionales de los transg&#xE9;nicos. Usando reprogramaci&#xF3;n epigen&#xE9;tica mediante transferencia nuclear de c&#xE9;lulas som&#xE1;ticas, hemos demostrado que las c&#xE9;lulas T con especificidades predefinidos contra Toxoplasma gondii puede ser utilizado para generar modelos de rat&#xF3;n que expresan el TCR de sus loci end&#xF3;genos, sin modificaci&#xF3;n gen&#xE9;tica introducida experimentalmente. La relativa facilidad y rapidez con que estos modelos transnuclear se puede obtener es una promesa para la construcci&#xF3;n de modelos de otras enfermedades.

Los ratones con las caracter&#xED;sticas predefinidas Transnuclear c&#xE9;lulas T del receptor contra el Toxoplasma gondii obtenido a trav&#xE9;s de la SCNT

&#x57FA;&#x4E8E;&#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x75AB;&#x82D7;&#x907F;&#x514D;&#x4E0E;&#x6D3B;&#x75AB;&#x82D7; &#xFF08;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;&#x75C5;&#x6BD2;&#xFF09; &#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x6BD2;&#x6027;&#x548C; antivector &#x514D;&#x75AB;&#x8F7D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5176;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x8F83;&#x5DEE;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x5BF9;&#x4E8E; CD8(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x5408;&#x6210;&#x7C92;&#x5B50;&#x643A;&#x5E26;&#x6297;&#x539F;&#x548C;&#x4F50;&#x5242;&#x5206;&#x5B50;&#x5DF2;&#x52A0;&#x5F3A;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x75AB;&#x82D7;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E00;&#x822C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6750;&#x6599;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F81;&#x6C42; CD8(+) T-&#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x5AB2;&#x7F8E;&#x6D3B;&#x8F7D;&#x4F53;&#x5728;&#x4E34;&#x5E8A;&#x524D;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x4ECB;&#x7ECD; interbilayer &#x4EA4;&#x8054; multilamellar &#x56CA;&#x6CE1;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x4EA4;&#x8054; headgroups multilamellar &#x56CA;&#x6CE1;&#x5185;&#x76F8;&#x90BB;&#x8102;&#x53CC;&#x5C42;&#x3002;Interbilayer &#x4EA4;&#x8054;&#x56CA;&#x6CE1;&#x7A33;&#x5B9A;&#x5305;&#x57CB;&#x5728;&#x56CA;&#x6CE1;&#x6838;&#x5FC3;&#x86CB;&#x767D;&#x6297;&#x539F;&#x548C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8102;&#x8D28;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x523A;&#x6FC0;&#x5206;&#x5B50;&#x56CA;&#x6CE1;&#x80DE;&#x5916;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5899;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5C55;&#x793A;&#x4E0B; endolysosomal &#x8102;&#x80AA;&#x9176;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6297;&#x539F;&#x4F50;&#x5242;&#x643A;&#x5E26;&#x5C0F;&#x6CE1;&#x5F62;&#x6210;&#x5A01;&#x529B;&#x6781;&#x5927;&#x7684;&#x6574;&#x4E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x75AB;&#x82D7;&#xFF0C;&#x5F81;&#x6C42;&#x5AB2;&#x7F8E;&#x6700;&#x5F3A;&#x70C8;&#x7684;&#x75AB;&#x82D7;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6297;&#x4F53;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6750;&#x6599;&#x5E94;&#x4F7F;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x75AB;&#x82D7;&#x548C;&#x6CBB;&#x7597;&#x86CB;&#x767D;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x63D0;&#x4F9B;&#x65B0;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;

Interbilayer &#x4EA4;&#x8054; multilamellar &#x56CA;&#x6CE1;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5408;&#x6210;&#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x70C8;&#x6027;&#x7684;&#x4F53;&#x6DB2;&#x53CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

Vaccines based on recombinant proteins avoid the toxicity and antivector immunity associated with live vaccine (for example, viral) vectors, but their immunogenicity is poor, particularly for CD8(+) T-cell responses. Synthetic particles carrying antigens and adjuvant molecules have been developed to enhance subunit vaccines, but in general these materials have failed to elicit CD8(+) T-cell responses comparable to those for live vectors in preclinical animal models. Here, we describe interbilayer-crosslinked multilamellar vesicles formed by crosslinking headgroups of adjacent lipid bilayers within multilamellar vesicles. Interbilayer-crosslinked vesicles stably entrapped protein antigens in the vesicle core and lipid-based immunostimulatory molecules in the vesicle walls under extracellular conditions, but exhibited rapid release in the presence of endolysosomal lipases. We found that these antigen/adjuvant-carrying vesicles form an extremely potent whole-protein vaccine, eliciting endogenous T-cell and antibody responses comparable to those for the strongest vaccine vectors. These materials should enable a range of subunit vaccines and provide new possibilities for therapeutic protein delivery.

Interbilayer-crosslinked multilamellar vesicles as synthetic vaccines for potent humoral and cellular immune responses.

Vaccins &agrave; base de prot&eacute;ines recombinantes &eacute;viter l&#39;immunit&eacute; toxicit&eacute; et antivector associ&eacute;e &agrave; un vaccin vivant (par exemple, virale), vecteurs, mais leur immunog&eacute;nicit&eacute; est m&eacute;diocre, en particulier pour les r&eacute;ponses de cellules T CD8. Particules synth&eacute;tiques portant les antig&egrave;nes et les mol&eacute;cules de l&#39;adjuvant ont &eacute;t&eacute; d&eacute;velopp&eacute;es pour am&eacute;liorer les vaccins sous-unitaires, mais en g&eacute;n&eacute;ral ces mat&eacute;riaux n&#39;ont pas r&eacute;ussi &agrave; obtenir des r&eacute;ponses de cellules T CD8 comparables &agrave; ceux des vecteurs vivants dans des mod&egrave;les animaux pr&eacute;cliniques. Nous d&eacute;crivons ici les v&eacute;sicules multilamellaires r&eacute;ticul&eacute; bicouches form&eacute;s par r&eacute;ticulation m&eacute;nag&eacute;e des bicouches lipidiques adjacents dans les v&eacute;sicules multilamellaires. V&eacute;sicules bicouches r&eacute;ticul&eacute; stablement pi&eacute;g&eacute; les antig&egrave;nes de prot&eacute;ines dans le noyau de la v&eacute;sicule et immunostimulantes de lipides &agrave; base de mol&eacute;cules dans les parois de la v&eacute;sicule sous conditions extracellulaires, mais pr&eacute;sentaient une lib&eacute;ration rapide en pr&eacute;sence de lipases d&#39;endolysosomal. Nous avons constat&eacute; que ces v&eacute;sicules transportant antig&egrave;ne/adjuvant forment un vaccin prot&eacute;ique ensemble extr&ecirc;mement puissant, des r&eacute;actions de lymphocytes T et des anticorps endog&egrave;ne comparables &agrave; celles pour les plus forts vecteurs de vaccins. Ces mat&eacute;riaux doit permettre une gamme de vaccins sous-unitaires et offrent des possibilit&eacute;s nouvelles pour la livraison de prot&eacute;ines th&eacute;rapeutiques.

Bicouches r&eacute;ticul&eacute; v&eacute;sicules multilamellaires comme vaccins synth&eacute;tiques pour des r&eacute;ponses immunitaires humorales et cellulaires puissantes.

Impfstoffe basierend auf rekombinante Proteine zu vermeiden, die Toxizit&auml;t und Antivector Immunit&auml;t zugeordnete Lebendimpfstoff (z. B. virale) Vektoren, aber ihre Immunogenit&auml;t ist schlecht, besonders f&uuml;r CD8(+) T-Zell-Antworten. Synthetische Partikel Antigene und Adjuvans-Molek&uuml;le wurden entwickelt, um die Untereinheit Impfstoffe zu verbessern, aber im Allgemeinen haben diese Materialien nicht vergleichbar mit denen f&uuml;r live Vektoren in pr&auml;klinischen Tiermodellen CD8(+) T-Zell-Antworten zu entlocken. Hier beschreiben wir Interbilayer-vernetzte multilamellar Bl&auml;schen durch Vernetzung Headgroups der angrenzenden Lipid-Doppelschichten innerhalb multilamellar Bl&auml;schen gebildet. Interbilayer-vernetzte Bl&auml;schen stabil eingeschlossene Protein-Antigene in den Vesikel-Kern und Lipid-basierte immunstimulierendes Molek&uuml;le in den W&auml;nden Vesikel extrazellul&auml;re Bedingungen, aber schnelle Freisetzung in Anwesenheit von Endolysosomal Lipasen ausgestellt. Wir fanden, dass diese Antigen/Adjuvans-tragenden Bl&auml;schen bilden einen extrem starken ganzen-Protein-Impfstoff, technologieorientierter endogene Antik&ouml;rper und T-Zell Reaktionen, die vergleichbar mit denen f&uuml;r die st&auml;rksten Impfstoff-Vektoren. Diese Materialien sollten erm&ouml;glichen zahlreiche Untereinheit Impfstoffe und bieten neue M&ouml;glichkeiten f&uuml;r therapeutische Protein-Lieferung.

Interbilayer-vernetzte multilamellar Bl&auml;schen als synthetische Impfstoffe f&uuml;r potente humorale und zellul&auml;re Immunantworten.

I vaccini basati su proteine ricombinanti evitare l&#39;immunit&agrave; di tossicit&agrave; e antivector associato con vaccino vivo (ad esempio, virale) vettori, ma loro immunogenicit&agrave; &egrave; scarsa, soprattutto per le risposte di cellule T-cell. Particelle sintetiche che trasportano gli antigeni e molecole di adiuvante sono stati sviluppati per migliorare i vaccini subunit&agrave;, ma in generale questi materiali non sono riusciti a suscitare risposte di cellule T-cell comparabili a quelli per i vettori dal vivo in modelli animali preclinici. Qui, descriviamo le vescicole multilamellari interbilayer-reticolato formate da headgroups di reticolazione di lipidici adiacenti all&#39;interno di vescicole multilamellari. Le vescicole interbilayer-reticolato stabilmente intrappolate antigeni della proteina nel nucleo della vescicola e immunostimolante a base lipidica molecole nelle pareti della vescicola sotto condizioni extracellulari, ma esposto a sgancio rapido in presenza di lipasi endolisosomiale. Abbiamo trovato che queste vescicole antigene/adiuvante-trasporto formano un vaccino intero-proteina estremamente potente, suscitando endogene risposte delle cellule T e anticorpo comparabili a quelli per i vettori di vaccino pi&ugrave; forti. Questi materiali dovrebbero consentire una vasta gamma di vaccini di subunit&agrave; e offrono nuove possibilit&agrave; per la consegna della proteina terapeutica.

Interbilayer-reticolato vescicole multilamellari come vaccini sintetici per potenti risposte immunitarie umorali e cellulari.

&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x907F;&#x3051;&#x308B;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6; &#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; (&#x305F;&#x3068;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;) &#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x6BD2;&#x6027;&#x3068; antivector &#x514D;&#x75AB;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;, &#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x305D;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x306F;&#x7279;&#x306B;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x8CA7;&#x3057;&#x3044;&#x3002;&#x6297;&#x539F;&#x3068;&#x30A2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x5408;&#x6210;&#x7C92;&#x5B50;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6750;&#x6599;&#x306E;&#x524D;&#x81E8;&#x5E8A;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3059;&#x308B;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x51FA;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x96A3;&#x63A5;&#x3059;&#x308B;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E8C;&#x91CD;&#x819C;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x67B6;&#x6A4B; headgroups &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x67B6;&#x6A4B;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x67B6;&#x6A4B;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x5B89;&#x5B9A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6297;&#x539F;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2; &#x30FB;&#x8102;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5206;&#x5B50;&#x5C0F;&#x80DE;&#x58C1;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x6355;&#x6349;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;endolysosomal &#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6700;&#x5F37;&#x306E;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3059;&#x308B;&#x5185;&#x56E0;&#x6027; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x6297;&#x4F53;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x51FA;&#x3059;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x6297;&#x539F;/&#x30A2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x5168;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6750;&#x6599;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x6CBB;&#x7642;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xBC18; &#xBC31;&#xC2E0; &#xBC29;&#xC9C0; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xBC31;&#xC2E0; (&#xC608;: &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;)&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB3C5;&#xC131; &#xBC0F; antivector &#xBA74;&#xC5ED; &#xBCA1;&#xD130;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; immunogenicity &#xD2B9;&#xD788; CD8(+) T-&#xC138;&#xD3EC; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB09C;&#xD55C; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD56D; &#xC6D0; &#xBC0F; &#xBCF4;&#xC870; &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xC6B4;&#xBC18; &#xD558;&#xB294; &#xD569;&#xC131; &#xC785;&#xC790; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC790;&#xB8CC; CD8(+) T-&#xC140; &#xC751;&#xB2F5; &#xC804; &#xC784;&#xC0C1; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xBCA1;&#xD130;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBE44;&#xAD50;&#xB97C; &#xC774;&#xB04C;&#xC5B4;&#xB0B4;&#xB294; &#xC2E4;&#xD328; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; interbilayer crosslinked multilamellar vesicles multilamellar &#xC18C;&#xD3EC; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xC9C0;&#xC9C8; bilayers&#xC758; headgroups &#xAC00;&#xAD50;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Interbilayer crosslinked vesicles &#xC548;&#xC815;&#xC801; &#xAE30; &#xCF54;&#xC5B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30; &#xBCBD;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xAE30;&#xBC18; immunostimulatory &#xBD84;&#xC790; &#xC18D; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBE60;&#xB978; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; endolysosomal lipases&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD56D; &#xC6D0;/&#xBCF4;&#xC870; &#xC6B4;&#xBC18; &#xC18C;&#xD3EC; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC804;&#xCCB4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC31;&#xC2E0; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xB3C4;&#xCD9C; &#xB0B4; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC751;&#xB2F5; &#xAC15;&#xD55C; &#xBC31;&#xC2E0; &#xBCA1;&#xD130;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBE44;&#xAD50; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC774; &#xC790;&#xB8CC;&#xB294; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC758; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC124;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC30;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Interbilayer crosslinked &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xCCB4;&#xC561;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD569;&#xC131; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC73C;&#xB85C; multilamellar &#xC18C;&#xD3EC;.

Vacunas basadas en prote&iacute;nas recombinantes evitar la inmunidad de toxicidad y antivector asociada con la vacuna de virus vivo (por ejemplo, viral) vectores, pero su inmunogenicidad es pobre, particularmente para las respuestas de c&eacute;lulas T CD8. Part&iacute;culas sint&eacute;ticas con ant&iacute;genos y adyuvantes mol&eacute;culas se han desarrollado para mejorar las vacunas de subunidades, pero en general estos materiales han podido provocar respuestas de c&eacute;lulas T CD8 comparables a las de vectores vivos en modelos precl&iacute;nicos de animales. Aqu&iacute;, describimos las ves&iacute;culas multilamellar interbilayer-reticulado formadas por reticulaci&oacute;n contiene de bicapas lip&iacute;dicas adyacentes dentro de ves&iacute;culas multilamellar. Ves&iacute;culas interbilayer-reticulado estable atrapado ant&iacute;genos de la prote&iacute;na en el n&uacute;cleo de la ves&iacute;cula y mol&eacute;culas de inmunoestimulantes base de l&iacute;pidos en las paredes de la ves&iacute;cula en condiciones extracelulares, pero exhibieron una liberaci&oacute;n r&aacute;pida en presencia de lipasas endolysosomal. Encontramos que estas ves&iacute;culas ant&iacute;geno/adyuvante-llevar forman una vacuna entera-prote&iacute;na extremadamente potente, suscitar respuestas T-cell y anticuerpos end&oacute;genas comparables a las de los vectores m&aacute;s fuertes de la vacuna. Estos materiales deben permitir una gama de vacunas de subunidades y ofrecer nuevas posibilidades para la entrega de la prote&iacute;na terap&eacute;utica.

Interbilayer-reticulado multilamellar ves&iacute;culas como vacunas sint&eacute;ticas para potentes inmunorespuestas humorales y celulares.

&#x65B0;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x75AB;&#x82D7;&#x5236;&#x5242;&#x4E0E;&#x63D0;&#x9AD8;&#x6548;&#x80FD;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#xFF0C;&#x63D0;&#x9AD8;&#x5BF9;&#x4F4E;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#xFF0C;&#x907F;&#x514D;&#x5728;&#x5927;&#x6D41;&#x884C;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x75AB;&#x82D7;&#x77ED;&#x7F3A;&#x5E76;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5242;&#x91CF;&#x76D8;&#x53EF;&#x80FD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x65E0;&#x6CD5;&#x63A5;&#x53D7;&#x7684;&#x526F;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x9884;&#x9632;&#x63A5;&#x79CD;&#x4E2D;&#x7684;&#x70C8;&#x6027;&#x4F50;&#x5242;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x5F3A;&#x7C7B;&#x5F00;&#x5173;&#x3001; &#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x4F53;&#x6DB2;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x8BF1;&#x53D1;&#x57FA;&#x7840;&#x4E0A; poly(lactide-co-glycolide) &#x5FAE;-&#x6216;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7C92;&#x5B50;&#x5305;&#x56F4;&#x4E59;&#x4E8C;&#x9187;&#x78F7;&#x8102;&#x53CC;&#x5C42;&#xFF0C;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x8868;&#x9762;&#x951A;&#x5B9A;&#x548C;&#x8102;&#x6EB6;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x75AB;&#x82D7;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x63D2;&#x5165;&#x53CC;&#x5C42;&#x6D82;&#x5C42;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F50;&#x5242;&#x3002;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7C92;&#x5B50;&#x5F15;&#x8D77;&#x9AD8;&#x7AEF;&#x70B9;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; igg &#x6297;&#x4F53;&#x6EF4;&#x5EA6; (&gt; 10(6)) 100days &#x4E24;&#x4E2A;&#x5F88;&#x5C11;&#x7684; 2.5ng &#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x63A5;&#x79CD;&#x540E;&#x7684;&#x6301;&#x7EED;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4F4E;&#x5242;&#x91CF;&#x3001; &#x5E38;&#x89C4;&#x4F50;&#x5242;&#x660E;&#x77FE;&#x6216;&#x5206;&#x5B50;&#x4F50;&#x5242;&#x5355;&#x78F7;&#x9170;&#x8102; A (&#x4EBA;&#x8FD0;) &#x6216; &alpha;-&#x9F50; &#xFF08;&alpha;GC&#xFF09; &#x5931;&#x8D25;&#x4E89;&#x53D6;&#x4F5C;&#x51FA;&#x7B54;&#x590D;&#x3002;&#x4E0E;&#x5B89;&#x4EBA;&#x8FD0;&#x6216;&#x7EB3;&#x5165;&#x75C5;&#x539F;&#x6A21;&#x4EFF;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7C92;&#x5B50;&#x53CC;&#x5C42; &alpha;GC &#x6297;&#x539F;&#x4F50;&#x5242;&#x589E;&#x5F3A;&#x6297;&#x4F53;&#x7684; ~ 12-fold&#x3002;&#x5B89;&#x4EBA;&#x8FD0;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x6700;&#x9AD8;&#x6301;&#x7EED;&#x7684; IgG &#x6548;&#x4EF7;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8D85;&#x4F4E;&#x6297;&#x539F;&#x5242;&#x91CF;&#xFF0C;&#x800C; &alpha;GC &#x4FC3;&#x8FDB;&#x8840;&#x6E05; igg &#x6297;&#x4F53;&#x5FEB;&#x901F;&#x4E0A;&#x5347;&#x540E;&#x4E00;&#x4E2A;&#x514D;&#x75AB;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x5B9D;&#x8D35;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#x5927;&#x6D41;&#x884C;&#x7B49;&#x7D27;&#x6025;&#x60C5;&#x51B5;&#x3002;&Alpha;GC &#x523A;&#x6FC0;&#x6297;&#x4F53;&#x53CD;&#x5E94;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x5242;&#x91CF;&#x4E5F;&#x5E78;&#x514D;&#x7684;&#x5FAE;&#x7C92;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x3002;&#x8102;&#x8D28;&#x7B3C;&#x7F69;&#x53EF;&#x751F;&#x7269;&#x964D;&#x89E3;-&#x548C;&#x7EB3;&#x7C73;&#x5FAE;&#x7C92;&#x4ECE;&#x800C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x75AB;&#x82D7;&#x4EA4;&#x8D27;&#x70C8;&#x6027;&#x7684;&#x5242;&#x91CF;&#x76D8;&#x5E73;&#x53F0;&#x3002;

&#x9C81;&#x68D2; IgG &#x54CD;&#x5E94;&#x4F7F;&#x7528;&#x4EFF;&#x751F;&#x8102;&#x8D28;&#x5305;&#x8986;&#x9897;&#x7C92;&#x75AB;&#x82D7;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x6BEB;&#x5FAE;&#x514B;&#x3002;

New subunit vaccine formulations with increased potency are of interest to improve immune responses against poorly immunogenic antigens, to avoid vaccine shortages in pandemic situations, and to promote dose-sparing of potent adjuvant molecules that can cause unacceptable side effects in prophylactic vaccination. Here we report strong class-switched, high avidity humoral immune responses elicited by a vaccine system based on poly(lactide-co-glycolide) micro- or nano-particles enveloped by PEGylated phospholipid bilayers, with protein antigens covalently anchored to the lipid surface and lipophilic adjuvants inserted in the bilayer coating. Strikingly, these particles elicited high endpoint antigen-specific IgG titers (>10(6)) sustained for over 100days after two immunizations with as little as 2.5ng of antigen. At such low doses, the conventional adjuvant alum or the molecular adjuvants monophosphoryl lipid A (MPLA) or Î±-galactosylceramide (Î±GC) failed to elicit responses. Co-delivery of antigen with MPLA or Î±GC incorporated into the particle bilayers in a pathogen-mimetic fashion further enhanced antibody titers by ~12-fold. MPLA provided the highest sustained IgG titers at these ultra-low antigen doses, while Î±GC promoted a rapid rise in serum IgG after one immunization, which may be valuable in emergencies such as disease pandemics. The dose of Î±GC required to boost the antibody response was also spared by particulate delivery. Lipid-enveloped biodegradable micro- and nano-particles thus provide a potent dose-sparing platform for vaccine delivery.

Robust IgG responses to nanograms of antigen using a biomimetic lipid-coated particle vaccine.

Nouvelles formulations de vaccin sous-unitaire avec puissance accrue sont int&eacute;ressantes pour am&eacute;liorer la r&eacute;ponse immunitaire contre les antig&egrave;nes peu immunog&egrave;nes, pour &eacute;viter les p&eacute;nuries de vaccin en cas de pand&eacute;mie et de promouvoir l&#39;&eacute;pargne dose de mol&eacute;cules adjuvant puissant qui peut provoquer des effets secondaires inacceptables dans la vaccination prophylactique. Nous rapportons ici l&#39;immunit&eacute; humorale forte avidit&eacute; &eacute;lev&eacute;e, commutation de classe induites par un syst&egrave;me de vaccin bas&eacute; sur poly(lactide-co-glycolide) micro ou nano-particules envelopp&eacute; par p&eacute;gyl&eacute;, bicouches phospholipidiques, avec des antig&egrave;nes prot&eacute;iques par covalence ancr&eacute;es &agrave; la surface des lipides et lipophiles adjuvants ins&eacute;r&eacute;es dans le rev&ecirc;tement bicouche. &Eacute;tonnamment, ces particules a suscit&eacute; des titres d&#39;IgG &eacute;lev&eacute; de point de terminaison sp&eacute;cifique de l&#39;antig&egrave;ne (&gt; 10(6)) maintenue pendant plus de 100days apr&egrave;s deux vaccinations avec aussi peu que 2.5ng de l&#39;antig&egrave;ne. &Agrave; ces faibles doses, l&#39;alun adjuvant classique ou monophosphoryl lipide adjuvants mol&eacute;culaire A (MPLA) ou &alpha;-galactosylceramide (&alpha;GC) a &eacute;chou&eacute; &agrave; obtenir des r&eacute;ponses. Prestation conjointe de l&#39;antig&egrave;ne avec le MPLA ou &alpha;GC incorpor&eacute; dans les bicouches de particule de fa&ccedil;on pathog&egrave;ne-mim&eacute;tique davantage renforc&eacute;e des titres d&#39;anticorps par ~ 12-fold. MPLA a fourni les titres d&#39;IgG soutenues plus &eacute;lev&eacute;s &agrave; ces doses d&#39;antig&egrave;ne ultra faible, tandis que &alpha;GC a favoris&eacute; une hausse rapide dans le s&eacute;rum IgG apr&egrave;s une vaccination, qui peut &ecirc;tre utile en cas d&#39;urgence tel qu&#39;une pand&eacute;mie de la maladie. La dose de &alpha;GC n&eacute;cessaire pour stimuler la r&eacute;ponse immunitaire a &eacute;t&eacute; &eacute;galement &eacute;t&eacute; &eacute;pargn&eacute;e par livraison particulaire. Enveloppe lipidique biod&eacute;gradable micro - et nano-particules fournissent ainsi une plate-forme de dose d&#39;&eacute;pargne puissante pour l&#39;administration de vaccins.

Robustes r&eacute;ponses IgG nanogrammes d&#39;antig&egrave;ne par un vaccin de lipides enduit particule biomim&eacute;tique.

Neue Untereinheit Impfstoff Formulierungen mit erh&ouml;hter Potenz sind von Interesse zur Verbesserung der Immunantworten gegen schlecht immunogen-Antigene, Impfstoff-Mangel in Pandemie Situationen zu vermeiden und Dosis-schonende potente Adjuvans-Molek&uuml;le zu f&ouml;rdern, die inakzeptable Nebenwirkungen bei prophylaktische Impfungen verursachen k&ouml;nnen. Hier berichten wir starke Klasse abschaltbar, hohe Avidit&auml;t humorale Immunantwort hervorgerufen durch ein Impfstoff-System basierend auf poly(lactide-co-glycolide) Mikro - oder Nano-Partikel umh&uuml;llt von pegylierte Phospholipid-Doppelschichten, mit Protein-Antigene kovalent an die Lipid-Oberfl&auml;che verankert und lipophile Adjuvantien in der Bilayer-Beschichtung eingef&uuml;gt. Auff&auml;llig ist, l&ouml;ste diese Partikel oberen Endpunkt Antigen-spezifische IgG-Titer (&gt; 10(6)) gleichbleibend &uuml;ber 100days nach zwei Impfungen mit so wenig wie 2.5ng Antigen. Bei solch niedrigen Dosen, die konventionelle adjuvante Alaun oder die molekulare Adjuvantien Monophosphoryl-Lipid gegen A (MPLA) oder &alpha;-Galactosylceramide (&alpha;GC) Antworten zu entlocken. So des Antigens mit MPLA oder &alpha;GC integriert die Partikel-Doppelschichten Pathogen-mimetischen Weise weiter verbesserte Antik&ouml;rper-Titer von ~ Zw&ouml;lffache. MPLA wohingegen die h&ouml;chste nachhaltige IgG-Titer bei diesen extrem niedrigen Antigen-Dosen, &alpha;GC einen rapiden Anstieg der Serum-IgG nach einer Immunisierung, bef&ouml;rdert, die in Notsituationen wie Krankheit Pandemien wertvoll sein k&ouml;nnen. Die Dosis des &alpha;GC ben&ouml;tigt, um die Erh&ouml;hung der Antik&ouml;rper-Reaktion wurde auch durch Partikel Lieferung verschont. Lipid-umh&uuml;llt biologisch abbaubare Mikro - und Nano-Partikel stellen daher eine starke Dosis-schonende Plattform f&uuml;r Impfstoff-Lieferung.

Robuste IgG-Reaktionen auf Nanogramm des Antigens mit einen biomimetischen Lipid-beschichteten Partikel-Impfstoff.

Nuove formulazioni di vaccino di subunit&agrave; con potenza maggiore sono di interesse per migliorare la risposta immunitaria contro antigeni scarsamente immunogenici, per evitare carenze di vaccino in situazioni di pandemiche e a promuovere la dose-risparmiatori di molecole adiuvanti potenti che possono causare effetti collaterali inaccettabili in vaccinazione profilattica. Qui riportiamo la risposta immunitaria umorale forte commutazione di classe, alta avidit&agrave; elicitata da un sistema di vaccino basato su poly(lactide-co-glycolide) micro-nano-particelle o avviluppate da bilayer fosfolipidico pegilato, con antigeni della proteina covalentemente ancorati alla superficie del lipido e lipofilici coadiuvanti inseriti nel rivestimento doppio strato. Sorprendentemente, queste particelle hanno suscitato titoli di IgG antigene-specifici endpoint alta (&amp;gt; 10(6)) sostenuti per sopra 100days dopo due vaccinazioni con il poco quanto 2.5ng dell&#39;antigene. A tali dosi basse, l&#39;allume adiuvante convenzionale o i lipidi monofosforyl molecolare coadiuvanti A (MPLA) o &alpha;-galactosylceramide (&alpha;GC) non &egrave; riuscito a suscitare le risposte. Co-Delivery dell&#39;antigene con MPLA o &alpha;GC incorporata del bilayer delle particelle in un agente patogeno-mimetico moda ulteriormente rafforzata anticorpali da ~ conduttori. MPLA ha fornito i pi&ugrave; alti titoli di IgG sostenuti a queste dosi ultra-antigene, mentre &alpha;GC ha promosso un rapido aumento nel siero di IgG dopo una vaccinazione, che possa essere utili in situazioni di emergenza come ad esempio le pandemie malattia. La dose di &alpha;GC necessaria per aumentare la risposta anticorpale &egrave; stata risparmiata anche da particolato consegna. Avvolti da lipidi biodegradabile micro - e nano-particelle cos&igrave; fornire una potente piattaforma dose-sparing per la consegna del vaccino.

Robusto IgG responses to nanogrammi di antigene utilizzando un vaccino di particelle rivestito in lipidi biomimetici.

&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x88FD;&#x5264;&#x5897;&#x52A0;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30FC;&#x3067;&#x30D1;&#x30F3;&#x30C7;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x72B6;&#x6CC1;&#x3067;&#x306E;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x3092;&#x907F;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x53D7;&#x3051;&#x5165;&#x308C;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x526F;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x6CD5;&#x306B;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x30A2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x7DDA;&#x91CF;&#x30B9;&#x30DA;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x4E0D;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6CE8;&#x76EE;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x5F37;&#x3044;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9; &#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x3001;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x6DB2;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B; poly(lactide-co-glycolide) &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30CA;&#x30CE;-&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x8102;&#x8CEA;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x8102;&#x6EB6;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x30DA;&#x30B0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3; &#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x3067;&#x5305;&#x307E;&#x5FAE;&#x7C92;&#x5B50;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5831;&#x544A; 2 &#x5C64;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x633F;&#x5165;&#x30A2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x307B;&#x3069;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7C92;&#x5B50;&#x9AD8;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684; IgG &#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x8A98;&#x767A; &#xFF08;&#x76EE;&#x306E;&#x4E0A; 100 days &#x6297;&#x539F;&#x306E; 2.5ng &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5C11;&#x3057;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x63A5;&#x7A2E;&#x5F8C;&#x6301;&#x7D9A; 10(6))&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x4F4E;&#x7528;&#x91CF;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x30A2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8; &#x30DF;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30F3;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5206;&#x5B50;&#x30A2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8; monophosphoryl &#x8102;&#x8CEA; A (MPLA) &#x307E;&#x305F;&#x306F; &alpha;-galactosylceramide (&alpha;GC) &#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x51FA;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Co-delivery &#x6297;&#x539F; MPLA &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x30DF;&#x30E1;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF; &#x30D5;&#x30A1;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7C92;&#x5B50;&#x819C; &alpha;GC &#x306E;&#x5F37;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x4FA1; ~ 12-fold&#x3002;&Alpha;GC &#x75C5;&#x306E;&#x6D41;&#x884C;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x7DCA;&#x6025;&#x4E8B;&#x614B;&#x3067;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x8CB4;&#x91CD;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044; 1 &#x3064;&#x306E;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x5F8C;&#x8840;&#x6E05; IgG &#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x4E0A;&#x6607;&#x3092;&#x63A8;&#x9032;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089; MPLA &#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x8D85;&#x4F4E;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x7528;&#x91CF;&#x3067;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A; IgG &#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6297;&#x4F53;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A; &alpha;GC &#x306E;&#x7DDA;&#x91CF;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x7C92;&#x5B50;&#x72B6;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x514D;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x8102;&#x8CEA;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x751F;&#x5206;&#x89E3;&#x6027; - &#x3068;&#x30CA;&#x30CE;&#x5FAE;&#x7C92;&#x5B50;&#x306F;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x7528;&#x91CF;&#x3092;&#x6E29;&#x5B58;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30CA;&#x30CE;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0; &#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30DF;&#x30E1;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x8102;&#x8CEA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x7C92;&#x5B50;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x5805;&#x7262;&#x306A; IgG &#x30EC;&#x30B9;&#x30DD;&#x30F3;&#x30B9;

&#xC99D;&#xAC00; &#xD798;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xBC31;&#xC2E0; &#xC81C;&#xD615;&#xC758; &#xC720;&#xD589; &#xC131; &#xC0C1;&#xD669;&#xC5D0; &#xBC31;&#xC2E0; &#xBD80;&#xC871; &#xBC29;&#xC9C0; &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885;&#xC5D0; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xBD80;&#xC791;&#xC6A9;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xBCF4;&#xC870; &#xC81C; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC0B4;&#xB824;&#xC8FC;&#xB294; &#xD64D;&#xBCF4; &#xD558; &#xACE0; &#xAC00;&#xB09C; &#xD558; &#xAC8C; immunogenic &#xD56D; &#xC6D0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; poly(lactide-co-glycolide) &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xB610;&#xB294; &#xB098;&#xB178;-&#xC785;&#xC790;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD56D; &#xC6D0; &#x70AD; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xACE0;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xC62E;&#xACA8;&#xC9C0;&#xB294; PEGylated &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; bilayers&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB458;&#xB7EC;&#xC2F8; &#xAE30;&#xBC18; &#xBC31;&#xC2E0; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; elicited &#xAC15;&#xD55C; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; &#xC804;&#xD658;, &#xB192;&#xC740; &#xC695;&#xB9DD; &#xCCB4;&#xC561; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; &#xBCF4;&#xACE0; adjuvants bilayer &#xCF54;&#xD305;&#xC5D0; &#xC0BD;&#xC785; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30; &#xB9C9;&#xD788;&#xAC8C;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC785;&#xC790; elicited &#xC0C1;&#xC704; &#xB05D;&#xC810; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; IgG titers (&amp;gt; 10(6)) &#xD56D; &#xC6D0; &#xC791;&#xC740; 2.5ng &#xB450; &#xC811;&#xC885; &#xD6C4; 100days &#xC774;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C0;&#xC18D;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB0AE;&#xC740; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;, &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xBCF4;&#xC870; &#xC81C; &#xC878;&#xC5C5;&#xC0DD; &#xB610;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; adjuvants monophosphoryl &#xC9C0;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; A (MPLA) &#xB610;&#xB294; &alpha;-galactosylceramide (&alpha;GC)&#xC758; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xC2E4;&#xD328;. MPLA&#xC640; &#xD569;&#xCCB4; &#xD574; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xC704;&#xC7A5; &#xBC29;&#xC2DD; &#xCD94;&#xAC00; &#xC785;&#xC790; bilayers &alpha;GC &#xD56D; &#xC6D0; co-delivery &#xAC15;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; &#xD56D; &#xCCB4; titers ~ 12-fold. MPLA &alpha;GC &#xC9C8;&#xBCD1; &#xC804;&#xC5FC;&#xBCD1; &#xB4F1; &#xBE44;&#xC0C1;&#xC0AC;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xAC00;&#xCE58;&#xAC00; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885; &#xD6C4; &#xD608; &#xCCAD; Igg&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; &#xCD94;&#xC9C4; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCD08; &#xC800; &#xD56D; &#xC6D0; &#xBCF5;&#xC6A9; &#xC2DC; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB192;&#xC740; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; IgG titers &#xC81C;&#xACF5;. &Alpha;GC &#xD56D; &#xCCB4; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xBBF8; &#xB9BD; &#xC790; &#xBC30;&#xB2EC; &#xD558; &#xC5EC; &#xC808;&#xC57D; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC2F8;&#xC5EC; &#xC0DD; &#xBD84;&#xD574;&#xC131; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C;-&#xB098;&#xB178;-&#xC785;&#xC790;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xBC31;&#xC2E0; &#xB0A9;&#xD488;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xB825;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;&#xC744; &#xC0B4;&#xB824;&#xC8FC;&#xB294; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0DD;&#xCCB4; &#xBAA8;&#xBC29; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xCF54;&#xD305; &#xC785;&#xC790; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC758; nanograms &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; IgG &#xC751;&#xB2F5;.

Nuevas formulaciones de vacuna subunidad con mayor potencia son de inter&eacute;s para mejorar la respuesta inmune contra ant&iacute;genos mal inmunog&eacute;nicas, para evitar la escasez de vacunas en situaciones de pandemias y para promover la conservaci&oacute;n de dosis de mol&eacute;culas potente adyuvante que puede causar efectos secundarios inaceptables en la vacunaci&oacute;n profil&aacute;ctica. Aqu&iacute; divulgamos fuerte avidez de conmutaci&oacute;n de clase, alta inmunorespuestas humorales provocadas por un sistema de vacuna basado en poly(lactide-co-glycolide) o nano-micropart&iacute;culas envuelto por pegilado bicapas de fosfol&iacute;pidos, con ant&iacute;genos de la prote&iacute;na covalente anclados a la superficie de l&iacute;pidos y lipof&iacute;licos adyuvantes insertados en la capa de la bicapa. Sorprendentemente, estas part&iacute;culas sacaron t&iacute;tulos de IgG espec&iacute;fica de ant&iacute;geno alto extremo (&gt; 10(6)) sostenido por sobre 100days despu&eacute;s de dos vacunas con tan poco como 2.5ng de ant&iacute;geno. En tales dosis bajas, el alumbre convencional coadyuvante o el l&iacute;pido de la monophosphoryl de adyuvantes moleculares A (MPLA) o &alpha;-galactosilcer&aacute;mida (&alpha;GC) no provocan respuestas. Curso de ant&iacute;geno con MPLA o &alpha;GC incorporados en las bicapas de part&iacute;culas de manera mim&eacute;tica de pat&oacute;geno m&aacute;s mejorada de los t&iacute;tulos de anticuerpos por ~ doce. MPLA proporciona los m&aacute;s altos t&iacute;tulos de IgG sostenidos en estas dosis muy bajas de ant&iacute;geno, mientras que &alpha;GC promovi&oacute; un incremento r&aacute;pido de IgG del suero despu&eacute;s de una inmunizaci&oacute;n, que puede ser valiosa en emergencias como las pandemias de la enfermedad. La dosis de &alpha;GC necesaria para potenciar la respuesta de anticuerpos tambi&eacute;n fue perdonada por entrega de part&iacute;culas. Cubierta lip&iacute;dica biodegradable micro - y nano-part&iacute;culas as&iacute; proporcionar una potente plataforma conservadora de dosis para la entrega de la vacuna.

Robustas IgG respuestas a nanogramos de ant&iacute;geno con una vacuna de part&iacute;culas recubiertos de l&iacute;pidos biomim&eacute;ticos.

&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x75AB;&#x82D7;&#x4F50;&#x5242;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x5F62;&#x6210;&#x514D;&#x75AB;&#x8BB0;&#x5FC6;&#x3002;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7C92;&#x5B50; (NP) &#x8FD0;&#x8F7D;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x548C; &#xFF08;&#x6216;&#xFF09; &#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x5371;&#x9669;&#x4FE1;&#x53F7;&#x662F;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x7684;&#x4F50;&#x5242;&#x80FD;&#x591F;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x4F53;&#x6DB2;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5728;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6750;&#x6599;&#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x673A;&#x5236;&#x4E86;&#x89E3;&#x5F97;&#x5F88;&#x5C11;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x4E86;&#x7531; NPs &#x7684;&#x5305;&#x57CB;&#x5728;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x7684;&#x6838;&#x5FC3;&#x548C;&#x951A;&#x5B9A;&#x5230;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x53CC;&#x5C42;&#x8868;&#x9762;&#x643A;&#x5E26;&#x4E00;&#x79CD;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x95F4;&#x65E5;&#x759F;&#x73AF;&#x5B50;&#x5B62;&#x5B50;&#x6297;&#x539F;&#xFF0C;VMP001&#xFF0C;multilamellar&quot;&#x88C5;&#x8BA2;&quot;&#x8102;&#x56CA;&#x6CE1;&#x7EC4;&#x6210;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7C92;&#x5B50;&#x4E0E;&#x5355;&#x78F7;&#x9170;&#x8102; A (&#x4EBA;&#x8FD0;)&#xFF0C;&#x7F8E;&#x56FD;&#x98DF;&#x54C1;&#x548C;&#x836F;&#x7269;&#x7BA1;&#x7406;&#x5C40;&#x6838;&#x51C6;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x523A;&#x6FC0;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x5728; Toll &#x6837;&#x53D7;&#x4F53;-4&#x3001; &#x514D;&#x75AB;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x9AD8;&#x6EF4;&#x5EA6;&#x3001; &#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x5BF9; VMP001&#xFF0C;&#x6301;&#x4E45;&#x7684;&#x8D85;&#x8FC7; 1 10 &#x500D;&#x5242;&#x91CF;&#x8F83;&#x4F4E;&#x6BD4;&#x5E38;&#x89C4;&#x4F50;&#x5242;&#x5C0F;&#x9F20; y&#x3002;VMP001 NPs &#x4E0E;&#x5B89;&#x4EBA;&#x8FD0;&#x4E0E;&#x6DF7;&#x5408;&#x7684;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; VMP001 &#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x66F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x4F53;&#x6DB2;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x9488;&#x5BF9;&#x591A;&#x4E2A;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x66F4;&#x52A0;&#x5747;&#x8861;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; T &#x7EC6;&#x80DE; Th1/Th2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x3002;&#x9996;&#x5148;&#x8981;&#x4E86;&#x89E3;&#x5176;&#x80CC;&#x540E;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53D1;&#x73B0; NPs &#x4FC3;&#x8FDB;&#x4F4E;&#x5242;&#x91CF;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x9C81;&#x68D2;&#x751F;&#x53D1;&#x4E2D;&#x5FC3; (GC) &#x5F62;&#x6210;&#x6CA1;&#x6709; GC &#x611F;&#x5E94;&#x4E0E;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x514D;&#x75AB;&#x7684;&#x53D1;&#x751F;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x548C; Gc &#x6709;&#x6838;&#x9644;&#x8FD1; NPs &#x968F;&#x7740;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x63A8;&#x79FB;&#x7D2F;&#x79EF;&#x5728;&#x5F15;&#x6D41;&#x533A;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x4E2D;&#x7684;&#x7AD9;&#x3002;&#x540C;&#x65F6;&#xFF0C;NP &#x63A5;&#x79CD;&#x75AB;&#x82D7;&#x52A0;&#x5F3A;&#x6269;&#x5927;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6EE4;&#x6CE1;&#x8F85;&#x52A9; T &#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;T(fh))&#xFF0C;&#x4E0E;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; VMP001 &#x6216;&#x660E;&#x77FE;&#x76F8;&#x6BD4;&#x63A5;&#x79CD;&#x75AB;&#x82D7;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;NP &#x75AB;&#x82D7;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5927;&#x6709;&#x53EF;&#x4E3A;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x52A0;&#x5F3A;&#x8010;&#x4E45;&#x6027;&#x3001; &#x5E7F;&#x5EA6;&#x548C;&#x4F53;&#x6DB2;&#x514D;&#x75AB;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x6548;&#x80FD;&#x63D0;&#x9AD8; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x8981;&#x7D20;&#x3002;

&#x52A0;&#x5F3A;&#x5BF9;&#x759F;&#x75BE;&#x6297;&#x539F;&#x4E0E;&#x6269;&#x5927;&#x4E1C;&#x65B9;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x751F;&#x53D1;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x611F;&#x5E94;&#x7684;&#x7EB3;&#x7C73;&#x9897;&#x7C92;&#x75AB;&#x82D7;&#x4F53;&#x6DB2;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

For subunit vaccines, adjuvants play a key role in shaping immunological memory. Nanoparticle (NP) delivery systems for antigens and/or molecular danger signals are promising adjuvants capable of promoting both cellular and humoral immune responses, but in most cases the mechanisms of action of these materials are poorly understood. Here, we studied the immune response elicited by NPs composed of multilamellar "stapled" lipid vesicles carrying a recombinant Plasmodium vivax circumsporozoite antigen, VMP001, both entrapped in the aqueous core and anchored to the lipid bilayer surfaces. Immunization with these particles and monophosphoryl lipid A (MPLA), a US Food and Drug Administration-approved immunostimulatory agonist for Toll-like receptor-4, promoted high-titer, high-avidity antibody responses against VMP001, lasting more than 1Â y in mice at 10-fold lower doses than conventional adjuvants. Compared to soluble VMP001 mixed with MPLA, VMP001-NPs promoted broader humoral responses, targeting multiple epitopes of the protein and a more balanced Th1/Th2 cytokine profile from antigen-specific T cells. To begin to understand the underlying mechanisms, we examined components of the B-cell response and found that NPs promoted robust germinal center (GC) formation at low doses of antigen where no GC induction occurred with soluble protein immunization, and that GCs nucleated near depots of NPs accumulating in the draining lymph nodes over time. In parallel, NP vaccination enhanced the expansion of antigen-specific follicular helper T cells (T(fh)), compared to vaccinations with soluble VMP001 or alum. Thus, NP vaccines may be a promising strategy to enhance the durability, breadth, and potency of humoral immunity by enhancing key elements of the B-cell response.

Enhancing humoral responses to a malaria antigen with nanoparticle vaccines that expand Tfh cells and promote germinal center induction.

Pour les vaccins sous-unitaires, adjuvants jouent un r&ocirc;le cl&eacute; dans l&#39;&eacute;laboration d&#39;une m&eacute;moire immunologique. Nanoparticules (NP) vecteurs d&#39;antig&egrave;nes et/ou les signaux mol&eacute;culaires de danger sont capables de promouvoir des r&eacute;ponses immunitaires cellulaires et humorales prometteurs adjuvants, mais dans la plupart des cas, les m&eacute;canismes d&#39;action de ces mat&eacute;riaux sont mal compris. Ici, nous avons &eacute;tudi&eacute; la r&eacute;ponse immunitaire provoqu&eacute;e par NPs compos&eacute;s de v&eacute;sicules multilamellaires lipides &laquo; agraf&eacute;s &raquo;, transportant l&#39;un Plasmodium vivax circumsporozo&iuml;te antig&egrave;ne recombinant, VMP001, tous deux pris au pi&egrave;ge dans le noyau aqueux et ancr&eacute; sur les surfaces de bicouche lipidique. Vaccination avec ces particules et monophosphoryl lipide A (MPLA), un agoniste immunostimulantes approuv&eacute; par FDA pour Toll-like receptor-4, la Food and promu r&eacute;ponses haut-titre, haute-avidit&eacute; des anticorps contre VMP001, une dur&eacute;e de plus de 1 y chez les souris &agrave; 10 fois les doses plus faibles que les adjuvants classiques. Par rapport aux VMP001 soluble m&eacute;lang&eacute; avec le MPLA, VMP001-NPs promu plus large humorale, ciblant plusieurs &eacute;pitopes de la prot&eacute;ine et plus &eacute;quilibr&eacute; profil cytokines Th1/Th2 de lymphocytes T sp&eacute;cifiques de l&#39;antig&egrave;ne. Pour commencer &agrave; comprendre les m&eacute;canismes sous-jacents, nous avons examin&eacute; les composantes de la r&eacute;ponse des lymphocytes B et trouv&eacute; que NPs promu formation centre germinatif robuste (GC) &agrave; faibles doses d&#39;antig&egrave;ne o&ugrave; aucune induction de GC est survenu avec la vaccination de prot&eacute;ines solubles, et que les GCs nucl&eacute;&eacute;es pr&egrave;s des d&eacute;p&ocirc;ts de NPs qui s&#39;accumule dans les ganglions lymphatiques de drainage au fil du temps. En parall&egrave;le, la vaccination NP a am&eacute;lior&eacute; l&#39;expansion des cellules T d&#39;helper folliculaires antig&egrave;ne-sp&eacute;cifiques (T(fh)), par rapport aux vaccinations avec solubles VMP001 ou alun. Ainsi, les vaccins NP peuvent &ecirc;tre une strat&eacute;gie prometteuse pour am&eacute;liorer la durabilit&eacute;, la largeur et la puissance de l&#39;immunit&eacute; humorale en renfor&ccedil;ant les &eacute;l&eacute;ments cl&eacute;s de la r&eacute;ponse de B-cellule.

Renforcer les r&eacute;ponses humorales &agrave; un antig&egrave;ne du paludisme aux vaccins de nanoparticules qui d&eacute;veloppez Tfh cellules et favoriser l&#39;induction centre germinatif.

F&uuml;r Untereinheit Impfstoffe spielen Adjuvantien eine Schl&uuml;sselrolle bei der Gestaltung der immunologischen Ged&auml;chtnis. Nanopartikel (NP)-Delivery-Systemen f&uuml;r Antigene und/oder molekulare Gefahr Signale sind vielversprechende Adjuvantien in der Lage sowohl zellul&auml;re als auch humorale Immunantworten zu f&ouml;rdern, aber in den meisten F&auml;llen die Wirkungsmechanismen dieser Materialien sind oft nicht ganz verstanden. Hier studiert wir die Immunantwort hervorgerufen von NPs bestehend aus multilamellar &quot;geheftet&quot; Lipid Bl&auml;schen mit einem rekombinanten Plasmodium Vivax Circumsporozoite Antigen, VMP001, sowohl im w&auml;ssrigen Kern gefangen und an die Lipid-Bilayer-Oberfl&auml;chen verankert. Immunisierung mit diesen Partikeln und Monophosphoryl-Lipid A (MPLA), einem amerikanischen Food and Drug Administration genehmigt immunstimulierendes Agonist f&uuml;r Toll-Like Rezeptor-4, f&ouml;rderte hoch-Titer, hoch-Avidit&auml;t Antik&ouml;rperantworten gegen VMP001, dauerhaft mehr als 1 y bei M&auml;usen bei 10fach verbesserter niedrigere Dosen als konventionelle Adjuvantien. Im Vergleich zu l&ouml;slichen VMP001 gemischt mit MPLA, VMP001-NPs bef&ouml;rdert Ausgedehntere humorale Reaktionen, gezielt mehrere Epitope des Proteins und eine ausgeglichenere Th1/Th2-Zytokin-Profil von Antigen-spezifische T-Zellen. Um zu beginnen, die zugrunde liegenden Mechanismen zu verstehen, wir pr&uuml;fen von Komponenten der B-Zell-Antwort gefunden, dass NPs gef&ouml;rdert robuste germinal Center (GC)-Formation bei niedrigen Dosen des Antigens aufgetreten keine GC-Induktion mit l&ouml;sliches Protein Immunisierung und dass GCs kernhaltigen in der N&auml;he von Magazinr&auml;umen der NPs Drainierende Lymphknoten im Laufe der Zeit ansammeln. Gleichzeitig verst&auml;rkte NP Impfung den Ausbau der Antigen-spezifische follikul&auml;ren Helfer T-Zellen (T(fh)), im Vergleich zu Impfungen mit l&ouml;slichen VMP001 oder Alaun. NP Impfstoffe k&ouml;nnen daher eine vielversprechende Strategie der Dauerhaftigkeit, Breite und St&auml;rke der humoralen Immunit&auml;t zu verbessern, indem die Verbesserung der Schl&uuml;sselelemente der B-Zell-Antwort sein.

Verbesserung der humorale Reaktionen auf eine Malaria-Antigen mit Impfstoffen Nanopartikel, die Tfh Zellen zu erweitern und f&ouml;rdern germinal Center Induktion.

Per i vaccini di subunit&agrave;, coadiuvanti giocano un ruolo fondamentale nel plasmare la memoria immunologica. Sistemi di consegna delle nanoparticelle (NP) per gli antigeni e/o segnali di pericolo molecolare sono coadiuvanti promettente in grado di promuovere risposte immunitarie cellulari e umorali, ma nella maggior parte dei casi il meccanismo di azione di questi materiali &egrave; capito male. Qui, abbiamo studiato la risposta immunitaria provocata dal NPs composta da vescicole multilamellari lipidi &quot;spillati&quot; portando un ricombinante antigene circumsporozoite Plasmodium vivax, VMP001, entrambi intrappolati nel nucleo acquoso e ancorate alle superfici doppio strato lipidico. Immunizzazione con queste particelle e monofosforyl lipide A (MPLA), un US Food and Drug Administration ha approvato immunostimolante agonista per il recettore Toll-like-4, promosso risposte di alto-titolo, alta avidit&agrave; anticorpale contro VMP001, durata pi&ugrave; di 1 y nei topi a dosi 10 volte inferiori rispetto adiuvanti convenzionali. Rispetto al VMP001 solubili mescolato con MPLA, VMP001-NPs promosso pi&ugrave; ampie risposte umorali, targeting pi&ugrave; epitopi della proteina e un pi&ugrave; equilibrato Th1/Th2 cytokine profilo da cellule T antigene-specifiche. Per cominciare a comprendere i meccanismi sottostanti, abbiamo esaminato le componenti della risposta delle cellule B e ha trovato che NPs promosso formazione robusto centro germinale (GC) a basse dosi di antigene dove si &egrave; verificato nessuna induzione GC con immunizzazione proteina solubile, e che GCs nucleate vicino a depositi di NPs accumulando nei linfonodi drenanti nel tempo. In parallelo, vaccinazione NP rafforzata l&#39;espansione delle cellule di T helper follicolare antigene-specifiche (T(fh)), rispetto alle vaccinazioni solubile VMP001 o allume. Cos&igrave;, i vaccini NP possono essere una strategia promettente per migliorare la durabilit&agrave;, l&#39;ampiezza e la potenza dell&#39;immunit&agrave; umorale potenziando gli elementi chiave della risposta delle cellule B.

Migliorare le risposte umorale ad un antigene di malaria con vaccini nanoparticella che espandere le celle Tfh e promuovere induzione centro germinale.

&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x30A2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8;&#x514D;&#x75AB;&#x8A18;&#x61B6;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50; (NP) &#x914D;&#x4FE1;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x6297;&#x539F;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5371;&#x967A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x30A2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x4F53;&#x6DB2;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6750;&#x6599;&#x306E;&#x4F5C;&#x7528;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E; vivax circumsporozoite &#x6297;&#x539F; VMP001&#x3001;&#x904B;&#x3076;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x300C;&#x7DB4;&#x3058;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x300D;&#x8102;&#x8CEA;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x306B;&#x9665;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E8C;&#x91CD;&#x819C;&#x8868;&#x9762;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B; NPs &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x5B66;&#x3093;&#x3060;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7C92;&#x5B50;&#x3068; monophosphoryl &#x8102;&#x8CEA; A (MPLA&#xFF09;&#x3001;&#x7C73;&#x56FD;&#x98DF;&#x54C1;&#x533B;&#x85AC;&#x54C1;&#x5C40;&#x627F;&#x8A8D;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x523A;&#x6FC0;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8; Toll &#x69D8;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; 4 &#x7528;&#x306E;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x6607;&#x683C; 1 &#x4EE5;&#x4E0A;&#x6301;&#x7D9A;&#x3059;&#x308B;&#x9AD8;&#x4FA1;&#x3001;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x6297;&#x4F53; VMP001&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x30A2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8;&#x3088;&#x308A; 10 &#x500D;&#x306E;&#x4F4E;&#x7528;&#x91CF;&#x3067;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E; y&#x3002;MPLA &#x3068;&#x6DF7;&#x5408;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; VMP001 &#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3001;VMP001 NPs &#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x4F53;&#x6DB2;&#x6027;&#x5FDC;&#x7B54;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x6607;&#x683C;&#x3001;Th1 &#x30FB; Th2 &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3; &#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3088;&#x308A;&#x30D0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x53D6;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3057;&#x59CB;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E; B &#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x6210;&#x5206;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3001;GC &#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x3092;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F; NPs &#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x4F4E;&#x7528;&#x91CF;&#x3067;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x80DA;&#x4E2D;&#x5FC3; (GC) &#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x63A8;&#x9032;&#x3057;&#x3001;Gc &#x6838;&#x3068;&#x30C9;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3; &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x306B;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x304B;&#x3051;&#x3066;&#x84C4;&#x7A4D; NPs &#x306E;&#x30C7;&#x30DD;&#x306E;&#x8FD1;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E26;&#x5217;&#x3067; NP &#x63A5;&#x7A2E;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x6FFE;&#x80DE;&#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC; T &#x7D30;&#x80DE; (T(fh)) &#x306E;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x306B;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x306E; VMP001 &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30AB;&#x30EA;&#x660E;&#x792C;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; &#x62E1;&#x5F35;&#x304C;&#x6319;&#x3052;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;NP &#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; B &#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8981;&#x7D20;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8010;&#x4E45;&#x6027;&#x3001;&#x5E45;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4F53;&#x6DB2;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x306E;&#x52B9;&#x529B;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x6226;&#x7565;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x6297;&#x539F; Tfh &#x30BB;&#x30EB;&#x62E1;&#x5927;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x80DA;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x4F53;&#x6DB2;&#x6027;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x5411;&#x4E0A;&#x3002;

&#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; adjuvants &#xBA74;&#xC5ED; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB098;&#xB178; &#xC785;&#xC790; (NP) &#xD56D; &#xC6D0; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC790; &#xC704;&#xD5D8; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; adjuvants &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xCCB4;&#xC561; &#xC131; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; &#xC99D;&#xC9C4; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC7AC;&#xB8CC;&#xC758; &#xD589;&#xB3D9;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC774;&#xD574;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; multilamellar &quot;&#xC798;&#xB77C;&quot; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC18C;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; Plasmodium vivax circumsporozoite &#xC6D0;, VMP001, &#xC6B4;&#xBC18; &#xC218;&#xC131; &#xCF54;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xC18D; &#xACE0; &#xC9C0;&#xC9C8; bilayer &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xACE0;&#xC815;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; Nps&#xB85C; elicited &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC785;&#xC790;&#xC640; monophosphoryl &#xC9C0;&#xC9C8; A (MPLA), &#xBBF8;&#xAD6D; &#xC2DD;&#xD488; &#xBC0F; &#xC758;&#xC57D;&#xD488; &#xC548;&#xC804; &#xCCAD; &#xC2B9;&#xC778; immunostimulatory &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC218;&#xC2E0;&#xC790; &#xAC19;&#xC740; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;-4&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885; &#xCD94;&#xC9C4; &#xB192;&#xC740;, &#xB192;&#xC740; &#xC695;&#xB9DD; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC751;&#xB2F5; VMP001&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; 1 &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; adjuvants &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC0AC;&#xC9C4; &#xB354; &#xB0AE;&#xC740; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;&#xC5D0; &#xC950;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; y. MPLA&#xC640; &#xD63C;&#xD569; &#xC6A9; &#xD574; vmp001&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;, VMP001-NPs &#xC2B9;&#xC9C4; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xCCB4;&#xC561; &#xBC18;&#xC751;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; epitopes&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xB354; &#xADE0;&#xD615; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; Th1/Th2 cytokine &#xD504;&#xB85C;&#xD544;. &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; B-&#xC138;&#xD3EC; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xBC1C;&#xACAC; NPs &#xB0AE;&#xC740; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;&#xC758; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC5D0; &#xD2BC;&#xD2BC;&#xD55C; &#xC0C8;&#xC2F9; &#xC13C;&#xD130; (GC) &#xD615;&#xC131; &#xC2B9;&#xC9C4; GC &#xC720;&#xB3C4; &#xC5C6;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC608;&#xBC29;&#xC811;&#xC885;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558; &#xACE0; Gc nucleated &#xBC30;&#xCD9C; &#xB9BC;&#xD504;&#xC808;&#xC5D0; &#xB204;&#xC801; &#xB418;&#xB294; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; Nps&#xC758; &#xCC3D; &#xACE0; &#xADFC;&#xCC98;. &#xBCD1;&#xB82C;&#xB85C;, NP &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; follicular &#xBCF4;&#xC870; T &#xC138;&#xD3EC; (T(fh)), &#xC6A9; &#xD574; VMP001 &#xB610;&#xB294; &#xC878;&#xC5C5;&#xC0DD; &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD655;&#xC7A5; &#xAC15;&#xD654;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, NP &#xBC31;&#xC2E0; B-&#xC138;&#xD3EC; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xD575;&#xC2EC; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xAC15;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; &#xB0B4;&#xAD6C;&#xC131;, &#xACAC;&#xD574;, &#xBC0F; &#xCCB4;&#xC561; &#xC131; &#xBA74;&#xC5ED;&#xC758; &#xD798;&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xC720;&#xB9DD; &#xC804;&#xB7B5; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAC15;&#xD654; humoral &#xC751;&#xB2F5; Tfh &#xC140;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xC5B4;&#xB9B0; &#xC2F9; &#xC13C;&#xD130; &#xC720;&#xB3C4; &#xD64D;&#xBCF4; &#xD558;&#xB294; &#xB098;&#xB178; &#xC785;&#xC790; &#xBC31;&#xC2E0;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xD56D; &#xC6D0;.

Para vacunas de subunidades, adyuvantes juegan un papel clave en la formaci&oacute;n de la memoria inmunol&oacute;gica. Sistemas de administraci&oacute;n de nanopart&iacute;culas (NP) de ant&iacute;genos o se&ntilde;ales de peligro molecular son prometedores adyuvantes capaces de promover la respuesta inmune tanto celular como humoral, pero en la mayor&iacute;a de los casos, los mecanismos de acci&oacute;n de estos materiales son poco conocidos. Aqu&iacute;, estudiamos la respuesta inmune inducida por NPs compuestas por ves&iacute;culas de l&iacute;pidos &quot;con&quot; multilamellar llevando un recombinante ant&iacute;geno Plasmodium vivax circumsporozoite, VMP001, atrapados en la base acuosa y ancladas a las superficies de bicapa lip&iacute;dica. Inmunizaci&oacute;n con estas part&iacute;culas y monophosphoryl l&iacute;pido A (MPLA), un agonista de inmunoestimulantes aprobado por el FDA para Toll-like receptor-4 y alimentos promueve las respuestas de anticuerpos alto-t&iacute;tulo, alta-avidez contra VMP001, durando m&aacute;s de 1 y en ratones en 10 veces dosis m&aacute;s bajas que los adyuvantes convencionales. En comparaci&oacute;n con VMP001 soluble mezclado con el MPLA, VMP001-NPs promovieron m&aacute;s amplia respuesta humoral, dirigida a varios ep&iacute;topes de la prote&iacute;na y una m&aacute;s equilibrada Perfil de citoquinas Th1/Th2 de ant&iacute;genos espec&iacute;ficos de c&eacute;lulas T. Para comenzar a comprender los mecanismos subyacentes, examinamos los componentes de la respuesta de c&eacute;lulas B y encontr&oacute; que NPs promovieron formaci&oacute;n de centro germinal robusto (GC) en dosis bajas de ant&iacute;geno donde no inducci&oacute;n de GC se produjo con la inmunizaci&oacute;n de la prote&iacute;na soluble, y que GCs nucleadas cerca de dep&oacute;sitos de NPs acumula en los ganglios de drenaje con el tiempo. En paralelo, la vacunaci&oacute;n de NP mejorado la expansi&oacute;n de las c&eacute;lulas T espec&iacute;ficas de ant&iacute;geno foliculares auxiliares (T(fh)), en comparaci&oacute;n con las vacunas con solubles VMP001 o alumbre. As&iacute;, las vacunas NP pueden ser una estrategia prometedora para mejorar la durabilidad, la amplitud y la potencia de la inmunidad humoral mejorando los elementos clave de la respuesta de c&eacute;lulas B.

Mejorar la respuesta humoral a un ant&iacute;geno de la malaria con vacunas de nanopart&iacute;culas que ampliar las c&eacute;lulas Tfh y promover inducci&oacute;n centro germinal.

&#x95F4;&#x65E5;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x662F;&#x5728;&#x6492;&#x54C8;&#x62C9;&#x4EE5;&#x5357;&#x975E;&#x6D32;&#x4E4B;&#x5916;&#xFF0C;&#x759F;&#x75BE;&#x7684;&#x6700;&#x5E38;&#x89C1;&#x539F;&#x56E0;&#xFF0C;&#x4F46;&#x52AA;&#x529B;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#x53D1;&#x5C55;&#x95F4;&#x65E5;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x75AB;&#x82D7;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x5236;&#x8BA2;&#x4E86;&#x75C5;&#x539F;&#x6A21;&#x4EFF;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x75AB;&#x82D7;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7C92;&#x5B50;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&quot;&#x7B3C;&#x7F69;&quot;&#x8102;&#x8D28;&#x819C;&#x7684;&#x7F8E;&#x56FD; FDA &#x6279;&#x51C6;&#x7684;&#x53EF;&#x751F;&#x7269;&#x964D;&#x89E3;&#x805A;&#x5408;&#x7269; poly(lactide-co-glycolide) &#x9178; (PLGA)&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BBE;&#x6CD5;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5E94;&#x7528;&#x6B64;&#x75AB;&#x82D7;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x5E73;&#x53F0;&#x52A0;&#x5F3A;&#x5BF9;&#x866B;&#x5B50;&#x95F4;&#x65E5;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x5019;&#x9009;&#x759F;&#x75BE;&#x6297;&#x539F;&#xFF0C;VMP001&#xFF0C;&#x5171;&#x8F6D;&#x5BF9;&#x8102;&#x8D28;&#x819C;&#x7684;&#x9897;&#x7C92;&#xFF0C;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x523A;&#x6FC0;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5355;&#x78F7;&#x9170;&#x8102; A (MPLA) &#x88AB;&#x7EB3;&#x5165;&#x8102;&#x8D28;&#x819C;&#xFF0C;&#x521B;&#x5EFA;&#x75C5;&#x539F;&#x6A21;&#x4EFF;&#x7EB3;&#x7C73;&#x9897;&#x7C92;&#x75AB;&#x82D7; (VMP001-NPs)&#x3002;&#x63A5;&#x79CD; VMP001 NPs &#x4FC3;&#x8FDB;&#x751F;&#x53D1;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x8BF1;&#x751F;&#x6301;&#x4E45;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#x663E;&#x8457;&#x8F83;&#x9AD8;&#x6EF4;&#x5EA6;&#x548C;&#x66F4;&#x5E73;&#x8861;&#x7684; Th1/Th2 &#x53CD;&#x5E94;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x5B89;&#x4EBA;&#x8FD0;&#x6DF7;&#x5408;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x75AB;&#x82D7;&#x3002;&#x7531; NP &#x63A5;&#x79CD;&#x75AB;&#x82D7;&#x5F15;&#x53D1;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x8FD8;&#x5C55;&#x51FA;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x548C;&#x5411;&#x5185;&#x5377;&#x5165;&#x4FDD;&#x62A4;&#x73AF;&#x5B50;&#x5B62;&#x5B50;&#x86CB;&#x767D;&#x57DF;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#xFF0C;&#x80FD;&#x591F;&#x80F6;&#x7C98;&#x5242;&#x7684;&#x76F4;&#x64AD;&#x95F4;&#x65E5;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x866B;&#x5B50;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B; VMP001 NPs &#x662F;&#x5F88;&#x6709;&#x5E0C;&#x671B;&#x80FD;&#x591F;&#x5F15;&#x8D77;&#x5BF9;&#x95F4;&#x65E5;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x866B;&#x5B50;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x7684;&#x75AB;&#x82D7;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x3002;

&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4F20;&#x9012;&#x4EE3;&#x7406;&#x95F4;&#x65E5;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x759F;&#x75BE;&#x75AB;&#x82D7;&#x6297;&#x539F;&#x663E;&#x793A;&#x8102;&#x8D28;&#x7B3C;&#x7F69; PLGA &#x7EB3;&#x7C73;&#x3002;

The parasite Plasmodium vivax is the most frequent cause of malaria outside of sub-Saharan Africa, but efforts to develop viable vaccines against P. vivax so far have been inadequate. We recently developed pathogen-mimicking polymeric vaccine nanoparticles composed of the FDA-approved biodegradable polymer poly(lactide-co-glycolide) acid (PLGA) "enveloped" by a lipid membrane. In this study, we sought to determine whether this vaccine delivery platform could be applied to enhance the immune response against P. vivax sporozoites. A candidate malaria antigen, VMP001, was conjugated to the lipid membrane of the particles, and an immunostimulatory molecule, monophosphoryl lipid A (MPLA), was incorporated into the lipid membranes, creating pathogen-mimicking nanoparticle vaccines (VMP001-NPs). Vaccination with VMP001-NPs promoted germinal center formation and elicited durable antigen-specific antibodies with significantly higher titers and more balanced Th1/Th2 responses in vivo, compared with vaccines composed of soluble protein mixed with MPLA. Antibodies raised by NP vaccinations also exhibited enhanced avidity and affinity toward the domains within the circumsporozoite protein implicated in protection and were able to agglutinate live P. vivax sporozoites. These results demonstrate that these VMP001-NPs are promising vaccines candidates that may elicit protective immunity against P. vivax sporozoites.

Antigen-Displaying Lipid-Enveloped PLGA Nanoparticles as Delivery Agents for a Plasmodium vivax Malaria Vaccine.

Le Plasmodium vivax de parasite est la cause la plus fr&eacute;quente du paludisme &agrave; l&#39;ext&eacute;rieur de l&#39;Afrique subsaharienne, mais les efforts pour d&eacute;velopper des vaccins viables contre P. vivax jusqu&#39;&agrave; pr&eacute;sent ont &eacute;t&eacute; insuffisants. Nous avons d&eacute;velopp&eacute; r&eacute;cemment imitant pathog&egrave;ne polym&eacute;rique vaccin compos&eacute;s de nanoparticules de l&#39;acide poly(lactide-co-glycolide) de polym&egrave;re biod&eacute;gradable approuv&eacute; par la FDA (PLGA) &laquo; envelopp&eacute; &raquo; par une membrane lipidique. Dans cette &eacute;tude, nous avons cherch&eacute; &agrave; d&eacute;terminer si cette plate-forme de distribution du vaccin pourrait &ecirc;tre appliqu&eacute;e &agrave; renforcer la r&eacute;ponse immunitaire contre les sporozo&iuml;tes P. vivax. Un antig&egrave;ne de candidat contre le paludisme, VMP001, a &eacute;t&eacute; conjugu&eacute; &agrave; la membrane lipidique des particules, et une mol&eacute;cule d&#39;immunostimulation monophosphoryl lipide A (MPLA), a &eacute;t&eacute; incorpor&eacute;e dans les membranes lipidiques, cr&eacute;ant des vaccins de nanoparticules imitant pathog&egrave;ne (VMP001-NPs). Vaccination avec VMP001-NPs a favoris&eacute; formation centre germinatif et ont incit&eacute; les anticorps antig&egrave;ne-sp&eacute;cifiques durables avec des titres beaucoup plus &eacute;lev&eacute;s et plus &eacute;quilibr&eacute;e des r&eacute;ponses Th1/Th2 in vivo, par rapport aux vaccins compos&eacute;s de prot&eacute;ine soluble m&eacute;lang&eacute; avec le MPLA. Anticorps produits par les vaccinations NP aussi pr&eacute;sentaient une avidit&eacute; accrue et affinit&eacute; envers les domaines au sein de la prot&eacute;ine circumsporozo&iuml;te impliqu&eacute;s dans la protection et r&eacute;ussirent &agrave; agglutiner les sporozo&iuml;tes direct P. vivax. Ces r&eacute;sultats d&eacute;montrent que ces VMP001-NPs sont prometteurs candidats vaccins qui peuvent induire une immunit&eacute; protectrice contre les sporozo&iuml;tes P. vivax.

-Affichage d&#39;antig&egrave;ne lipidique PLGA nanoparticules comme Agents d&#39;ex&eacute;cution pour un Plasmodium vivax vaccin contre le paludisme.

Der Parasit Plasmodium Vivax ist die h&auml;ufigste Ursache der Malaria au&szlig;erhalb von Afrika s&uuml;dlich der Sahara, aber Anstrengungen zur Entwicklung von tragf&auml;higen Impfstoffe gegen p. Vivax bisher unzureichend gewesen. Wir haben vor kurzem Pathogen-Nachahmung von Polymeren Impfstoff, die Nanopartikel komponiert von der FDA zugelassene biologisch abbaubares Polymer-poly(lactide-co-glycolide)-S&auml;ure (PLGA) &quot;umh&uuml;llt&quot; von einer Lipidmembran entwickelt. In dieser Studie wollten wir bestimmen, ob dieser Impfstoff-Delivery-Plattform zur Verbesserung der Immunantwort gegen p. Vivax Sporozoites &uuml;bernommen werden konnten. Ein Kandidat-Malaria-Antigen, VMP001, wurde Konjugation mit der Lipidmembran der Teilchen, und ein immunstimulierendes Molek&uuml;l, Monophosphoryl-Lipid A (MPLA), wurde in die Lipidmembranen, Erstellen von Pathogen-Nachahmung von Nanopartikel-Impfstoffe (VMP001-NPs) eingegliedert. Impfung mit VMP001-NPs bef&ouml;rdert germinal Zentrum Bildung und Gender dauerhafte Antigen-spezifische Antik&ouml;rper mit deutlich h&ouml;heren Titer und mehr ausgeglichen Th1/Th2 Antworten in-vivo, verglichen mit Impfstoffen bestehend aus l&ouml;sliches Protein, gemischt mit MPLA. Antik&ouml;rpern von NP-Impfungen auch ausgestellt, verbesserte Avidit&auml;t und Affinit&auml;t in Richtung der Dom&auml;nen innerhalb das Circumsporozoite Protein Schutz in Verbindung gebracht und konnten live p. Vivax Sporozoites agglutinate. Diese Ergebnisse zeigen, dass diese VMP001-NPs vielversprechend sind Impfstoffe-Kandidaten, die sch&uuml;tzende Immunit&auml;t gegen p. Vivax Sporozoites hervorrufen k&ouml;nnten.

Anzeigen von Antigen Lipid-umh&uuml;llt PLGA-Nanopartikeln als Delivery Agents f&uuml;r eine Plasmodium Vivax Malaria-Impfstoff.

Il Plasmodium vivax parassita &egrave; la causa pi&ugrave; frequente di malaria di fuori dell&#39;Africa subsahariana, ma gli sforzi per sviluppare vaccini vitali contro p. vivax finora sono stati inadeguati. Abbiamo recentemente sviluppato vaccino polimerico patogeno-mimando le nanoparticelle composto dell&#39;acido poly(lactide-co-glycolide) polimero biodegradabile approvato dalla FDA (PLGA) &quot;avviluppata&quot; da una membrana lipidica. In questo studio, abbiamo cercato di determinare se questa piattaforma di distribuzione del vaccino potrebbe essere applicata per migliorare la risposta immunitaria contro sporozoiti p. vivax. Un antigene di malaria candidato, VMP001, &egrave; stata coniugata con la membrana lipidica delle particelle, e una molecola di immunostimolante, monofosforyl lipide A (MPLA), fu incorporata la membrane lipidiche, creazione di agente patogeno-mimando nanoparticella vaccini (VMP001-NPs). Vaccinazione con VMP001-NPs promosso formazione centro germinale e raccolse durevoli antigene-specifici anticorpi con titoli significativamente pi&ugrave; alti e pi&ugrave; bilanciata Th1/Th2 risposte in vivo, rispetto ai vaccini composti di proteine solubili mescolata con MPLA. Anticorpi generati da vaccinazioni NP anche esposta una maggiore avidit&agrave; e affinit&agrave; verso i domini all&#39;interno della proteina di circumsporozoite implicati nella protezione e sono stati in grado di agglutinare sporozoiti live p. vivax. Questi risultati dimostrano che questi VMP001-NPs sono promettenti candidati vaccini che possono suscitare immunit&agrave; protettiva contro sporozoiti p. vivax.

Nanoparticelle PLGA avvolti dalla visualizzazione di antigene lipidico come agenti di consegna per un Plasmodium vivax vaccino contro la Malaria.

&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B; vivax &#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306F;&#x30B5;&#x30CF;&#x30E9;&#x4EE5;&#x5357;&#x306E;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x306E;&#x5916;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x983B;&#x7E41;&#x306A;&#x539F;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x3068;&#x3053;&#x308D; p. &#x306E; vivax &#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x52AA;&#x529B;&#x304C;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x6700;&#x8FD1;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3092;&#x6A21;&#x5023;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; FDA &#x627F;&#x8A8D;&#x751F;&#x5206;&#x89E3;&#x6027;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50; poly(lactide-co-glycolide) &#x9178; (PLGA)&#x300C;&#x8102;&#x8CEA;&#x819C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5305;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x300D;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; p. &#x306E; vivax &#x30B9;&#x30DD;&#x30ED;&#x30BE;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x6C42;&#x3081;&#x305F;&#x3002;&#x5019;&#x88DC;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x6297;&#x539F;&#x3001;VMP001&#x3001;&#x7C92;&#x5B50;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x8102;&#x8CEA;&#x819C;&#x5171;&#x5F79;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5206;&#x5B50;&#x306E; monophosphoryl &#x8102;&#x8CEA; A &#xFF08;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B4;&#x30E9;&#xFF09; &#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3092;&#x6A21;&#x5023;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#xFF08;VMP001-NPs) &#x306E;&#x4F5C;&#x6210;&#x3001;&#x8102;&#x8CEA;&#x819C;&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E; VMP001 NPs &#x304C;&#x80DA;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x3001;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; MPLA &#x3068;&#x6DF7;&#x5408;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x6297;&#x4F53;&#x4FA1;&#x3068;&#x8A98;&#x767A;&#x8010;&#x4E45;&#x6027;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x6297;&#x4F53; Th1 &#x30FB; Th2 &#x5FDC;&#x7B54;&#x3092; in vivo &#x3067;&#x30D0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NP &#x306E;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x6297;&#x4F53;&#x3082;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3068;&#x4FDD;&#x8B77;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B; circumsporozoite &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x5185;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6; p. &#x306E; vivax &#x30B9;&#x30DD;&#x30ED;&#x30BE;&#x30A4;&#x30C8; ha-hs &#x304C;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304B;&#x3089;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; VMP001 NPs &#x304C;&#x6709;&#x671B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059; p. &#x306E; vivax &#x30B9;&#x30DD;&#x30ED;&#x30BE;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x9632;&#x5FA1;&#x514D;&#x75AB;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x51FA;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x5019;&#x88DC;&#x3002;

&#x8102;&#x8CEA;&#x6297;&#x539F;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x5305;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x914D;&#x4FE1;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E; vivax &#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2; &#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066; PLGA &#x306E;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;

&#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; Plasmodium vivax&#xB294; &#xC0AC;&#xD558;&#xB77C; &#xC0AC;&#xB9C9; &#xC774;&#xB0A8;&#xC758; &#xC544;&#xD504;&#xB9AC;&#xCE74;&#xC758; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xBE48;&#xBC88;&#xD55C; &#xC6D0;&#xC778;&#xC774; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; P. vivax&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E4;&#xD589; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB178;&#xB825;&#xC774; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD749;&#xB0B4; &#xB0B8; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB098;&#xB178; &#xC785;&#xC790;&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD; &#xBD84;&#xD574;&#xC131; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xBA38; FDA &#xC2B9;&#xC778; poly(lactide-co-glycolide) &#xC0B0; (PLGA) &quot;&quot; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xB36E;&#xC5EC;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xBC31;&#xC2E0; &#xC804;&#xB2EC; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC; P. vivax sporozoites&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC801;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xACE0;&#xC790; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6C4;&#xBCF4; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xD56D; &#xC6D0;, VMP001, &#xC785;&#xC790;&#xC758; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xB9C9; &#xD65C;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; immunostimulatory &#xBD84;&#xC790;, monophosphoryl &#xC9C0;&#xC9C8; A (MPLA), &#xB098;&#xB178; &#xC785;&#xC790; &#xBC31;&#xC2E0; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD749;&#xB0B4; &#xB0B8; (VMP001-NPs)&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xD1B5;&#xD569; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. VMP001-nps &#xC811;&#xC885; &#xCD94;&#xC9C4; &#xC0C8;&#xC2F9; &#xC13C;&#xD130; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xB04C;&#xB824; &#xB0B4;&#xAD6C;&#xC131;&#xC774; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xB192;&#xC740; titers&#xC640; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xD56D; &#xCCB4; &#xADE0;&#xD615; Th1/Th2 &#xC751;&#xB2F5; vivo&#xC5D0;&#xC11C; MPLA&#xC640; &#xD63C;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;. NP &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xAC08;&#xB9DD;&#xACFC; &#xBCF4;&#xD638;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; circumsporozoite &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB0B4;&#xC758; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; P. vivax sporozoites agglutinate &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC785;&#xC99D;&#xC774; VMP001-Nps&#xB294; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xBC31;&#xC2E0; &#xD6C4;&#xBCF4; P. vivax sporozoites&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xD638; &#xBA74;&#xC5ED;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD56D; &#xC6D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC2F8;&#xC5EC; Plasmodium vivax &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC30;&#xB2EC; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xB85C; PLGA &#xB098;&#xB178;.

El Plasmodium vivax del par&aacute;sito es la causa m&aacute;s frecuente de la malaria fuera de &Aacute;frica subsahariana, pero los esfuerzos para desarrollar vacunas viables contra p. vivax hasta ahora han sido insuficientes. Recientemente hemos desarrollado imitan pat&oacute;geno polim&eacute;rica vacuna nanopart&iacute;culas del &aacute;cido poly(lactide-co-glycolide) pol&iacute;mero biodegradable aprobado por la FDA (PLGA) &quot;envuelto&quot; por una membrana lip&iacute;dica. En este estudio, intentamos determinar si esta plataforma de entrega de la vacuna podr&iacute;a aplicarse para mejorar la respuesta inmune contra esporozoitos p. vivax. Un ant&iacute;geno de la malaria de candidato, VMP001, se conjuga a la membrana lip&iacute;dica de las part&iacute;culas, y una mol&eacute;cula de inmunoestimulantes, monophosphoryl l&iacute;pido A (MPLA), se incorpor&oacute; a las membranas lip&iacute;dicas, creaci&oacute;n de vacunas de nanopart&iacute;culas imitan a pat&oacute;geno (VMP001-NPs). Vacunaci&oacute;n con VMP001-NPs promovi&oacute; la formaci&oacute;n del centro germinal y provoc&oacute; los anticuerpos ant&iacute;geno-espec&iacute;ficos durables con t&iacute;tulos significativamente m&aacute;s altos y m&aacute;s equilibrado respuestas Th1/Th2 en vivo, en comparaci&oacute;n con las vacunas compuesto por prote&iacute;na soluble mezclada con MPLA. Anticuerpos planteados por las vacunaciones NP tambi&eacute;n exhibieron mayor avidez y afinidad hacia los dominios de la prote&iacute;na circumsporozoite implicados en la protecci&oacute;n y fueron capaces de aglutinar en p. vivax esporozoitos. Estos resultados demuestran que estos VMP001-NPs son prometedores candidatos de vacunas que podr&iacute;an generar inmunidad protectora contra esporozoitos p. vivax.

Cubierta lip&iacute;dica ant&iacute;geno-mostrando las nanopart&iacute;culas PLGA como agentes de entrega para un Plasmodium vivax vacuna contra la Malaria.

Heikyung Suh

Whitehead Institute for Biomedical Research

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT