Primary Cell Cultures from <em>Drosophila</em> Gastrula Embryos

Here we describe a method for preparing and culturing primary cells dissociated from Drosophila gastrula embryos.   In brief, a large amount of staged ...

Harvard Medical School

&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#x5375;&#x5B50;&#x53D1;&#x751F;&#xFF0C;&#x6574;&#x4E2A;&#x4E13;&#x95E8;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BDB;&#x56CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6267;&#x884C;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5728;&#x86CB;&#x8154;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x8F93;&#x548C;&#x751F;&#x6B96;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x5F53;&#x86CB;&#x5BA4;&#x82BD;&#x53EF;&#x4EE5;&#x533A;&#x5206;&#x5728;&#x5375;&#x5DE2;&#xFF0C;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E09;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BDB;&#x56CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x6781;&#x5730;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x830E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x4E3B;&#x4F53;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7684;&#x6BDB;&#x56CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4ECE; germarium&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x8FD9;&#x4E09;&#x79CD;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x89C4;&#x8303;&#xFF0C;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x5375;&#x5B50;&#x548C;&#x80DA;&#x80CE;&#x968F;&#x540E;&#x53D1;&#x751F;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x4E86;&#x89E3;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x547D;&#x8FD0;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x63ED;&#x793A;&#x57FA;&#x56E0;&#x773C;&#x7F3A;&#x5E2D; (&#x57C3;&#x4E9A;&#xFF09; &#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x7684;&#x6781;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x547D;&#x8FD0;&#x3002;&#x57C3;&#x4E9A;&#x662F;&#x6838;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x6392;&#x9664;&#x6781;&#x5730;&#x548C;&#x79F8;&#x79C6;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x548C;&#x57C3;&#x4E9A;&#x6CA1;&#x6709;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6BDB;&#x56CA;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6781;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x57C3;&#x4E9A;&#x5F02;&#x4F4D;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x6291;&#x5236;&#x6B63;&#x5E38;&#x6781;&#x5730;&#x7EC6;&#x80DE;&#x547D;&#x8FD0;&#x548C;&#x635F;&#x5BB3;&#x7684;&#x6781;&#x5730;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x8FB9;&#x5883;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x5F02;&#x4F4D;&#x523A;&#x732C;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5DF2;&#x77E5;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5F02;&#x4F4D;&#x6781;&#x5730;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x6837;&#x505A;&#x7684;&#x9547;&#x538B;&#x57C3;&#x4E9A;&#x6BDB;&#x56CA;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

&#x7F3A;&#x5E2D;&#x7684;&#x679C;&#x8747;&#x5375;&#x5B50;&#x53D1;&#x751F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x6781;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x547D;&#x8FD0;&#x5173;&#x952E;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x7684;&#x773C;&#x775B;&#x3002;

Throughout Drosophila oogenesis, specialized somatic follicle cells perform crucial functions in egg chamber formation and in signaling between somatic and germline cells. In the ovary, at least three types of somatic follicle cells, polar cells, stalk cells and main body epithelial follicle cells, can be distinguished when egg chambers bud from the germarium. Although specification of these three somatic cell types is important for normal oogenesis and subsequent embryogenesis, the molecular basis for establishment of their cell fates is not completely understood. Our studies reveal the gene eyes absent (eya) to be a key repressor of polar cell fate. EYA is a nuclear protein that is normally excluded from polar and stalk cells, and the absence of EYA is sufficient to cause epithelial follicle cells to develop as polar cells. Furthermore, ectopic expression of EYA is capable of suppressing normal polar cell fate and compromising the normal functions of polar cells, such as promotion of border cell migration. Finally, we show that ectopic Hedgehog signaling, which is known to cause ectopic polar cell formation, does so by repressing eya expression in epithelial follicle cells.

Eyes absent, a key repressor of polar cell fate during Drosophila oogenesis.

Tout au long de la drosophile ovogen&#xE8;se, les cellules sp&#xE9;cialis&#xE9;es du follicule somatiques des fonctions cruciales dans la formation de chambre de l&#x26;#39;&#x153;uf et dans la signalisation entre les cellules somatiques et germinales. Dans l&#x26;#39;ovaire, au moins trois types de cellules somatiques, les cellules folliculaires polaires, la tige et les cellules principales cellules de l&#x26;#39;organisme follicule &#xE9;pith&#xE9;liales, on peut distinguer lorsque les oeufs chambres bourgeon de la germarium. Bien que les sp&#xE9;cifications de ces trois types de cellules somatiques est important pour l&#x26;#39;ovogen&#xE8;se et l&#x26;#39;embryogen&#xE8;se normale ult&#xE9;rieure, la base mol&#xE9;culaire pour l&#x26;#39;&#xE9;tablissement de leurs destins cellulaires n&#x26;#39;est pas compl&#xE8;tement &#xE9;lucid&#xE9;. Nos &#xE9;tudes r&#xE9;v&#xE8;lent aux yeux des g&#xE8;nes absents (eya) d&#x26;#39;&#xEA;tre un r&#xE9;presseur cl&#xE9; du destin cellule polaire. EYA est une prot&#xE9;ine nucl&#xE9;aire qui est normalement exclu de cellules polaires et de la tige, et l&#x26;#39;absence de EYA est suffisante pour causer des cellules folliculaires &#xE9;pith&#xE9;liales de se d&#xE9;velopper comme les cellules polaires. En outre, l&#x26;#39;expression ectopique de EYA est capable de supprimer le destin des cellules normales polaires et de compromettre les fonctions normales des cellules polaires, tels que la promotion de la migration cellulaire fronti&#xE8;re. Enfin, nous montrons que ectopique de signalisation Hedgehog, qui est connu pour causer la formation de cellules extra-ut&#xE9;rine polaire, fait en r&#xE9;primant l&#x26;#39;expression dans des cellules folliculaires eya &#xE9;pith&#xE9;liales.

Yeux absents, un r&#xE9;presseur Key of Fate cellule polaire Pendant la drosophile Ovogen&#xE8;se

Augen fehlen, ein wichtiger Repressor von polaren das Schicksal der Zelle w&#xE4;hrend der Drosophila Oogenese.

Tutta ovogenesi drosofila, cellule del follicolo somatiche specializzate svolgono funzioni cruciali nella formazione della camera di uovo e nella segnalazione tra somatico e le cellule germinali. Nell&#39;ovaio, pu&ograve; essere distinta almeno tre tipi di cellule del follicolo somatico, cellule polari, gambo e cellule epiteliali di follicolo corpo principale, quando uovo chambers bud dai germarium. Sebbene specifiche di questi tre tipi di cellule somatiche &egrave; importante per la normale ovogenesi e successiva embriogenesi, la base molecolare per l&#39;istituzione dei loro destini cellulari completamente non &egrave; capita. I nostri studi rivelano gli occhi gene assente (eya) per essere un repressore chiave del destino di cella polare. EYA &egrave; una proteina nucleare che normalmente &egrave; escluso dalla polare e gambo di cellule e l&#39;assenza di EYA &egrave; sufficiente a causare le cellule epiteliali del follicolo a svilupparsi come cellule polari. Espressione ectopica di EYA &egrave; inoltre in grado di sopprimere il destino normale cella polare e compromettere le normali funzioni delle cellule polari, come promozione della migrazione cellulare di bordo. Infine, vi mostriamo quella ectopica Hedgehog signaling, che &egrave; noto per provocare formazione ectopica cella polare, fa da reprimere eya espressione nelle cellule epiteliali del follicolo.

Occhi assenti, un repressore chiave del destino di cella polare durante l&#39;ovogenesi della drosofila.

&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x5375;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x5C02;&#x9580;&#x7684;&#x306A;&#x4F53;&#x6FFE;&#x80DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x5375;&#x5BA4;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x751F;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x80DA;&#x817A;&#x304B;&#x3089;&#x3068;&#x304D;&#x5375;&#x5BA4;&#x857E;&#x5B50;&#x623F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4F53;&#x6FFE;&#x80DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x6975;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x830E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x672C;&#x4F53;&#x4E0A;&#x76AE;&#x5375;&#x80DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;3&#x7A2E;&#x985E;&#x306F;&#x3001;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x4ED5;&#x69D8;&#x304C;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x5375;&#x5F62;&#x6210;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x80DA;&#x767A;&#x751F;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x904B;&#x547D;&#x306E;&#x78BA;&#x7ACB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x76E4;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x306F;&#x89E3;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x6975;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x306E;&#x9375;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#xFF08;EYA&#xFF09;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x76EE;&#x304C;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; EYA&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;&#x6975;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x830E;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x9664;&#x5916;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6838;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x3068;EYA&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x306F;&#x3001;&#x4E0A;&#x76AE;&#x5375;&#x80DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x6975;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x767A;&#x5C55;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;EYA&#x306E;&#x7570;&#x6240;&#x6027;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x6975;&#x6027;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x56FD;&#x5883;&#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;&#x306E;&#x4FC3;&#x9032;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x6975;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3046;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x7570;&#x6975;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7570;&#x6240;&#x6027;&#x306E;&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x3001;&#x4E0A;&#x76AE;&#x6FFE;&#x80DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;EYA&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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Drosophila oogenesis&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xC804;&#xBB38;&#xD654; &#xB41C; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xC5EC; &#xD3EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xACC4;&#xB780; &#xCC54;&#xBC84; &#xD615;&#xC131; &#xBC0F; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xAC04;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558; &#xACE0; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC140;. &#xACC4;&#xB780; &#xCC54;&#xBC84; &#xAF43; &#xBD09; &#xC624;&#xB9AC; &#xB54C; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xBAA8; &#xADFC; &#xC138;&#xD3EC;, &#xADF9; &#xC9C0; &#xC140;, &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xBCF8;&#xCCB4; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC5EC; &#xD3EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xAD6C;&#xBD84;&#xD560; &#xC218;&#xB294; &#xB09C;&#xC18C;&#xC5D0;&#xB294; germarium&#xC5D0;&#xC11C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xC2DD;&#xC758; &#xC0AC;&#xC591; &#xC77C;&#xBC18; oogenesis &#xBC0F; &#xD6C4;&#xC18D; embryogenesis&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC6B4;&#xBA85;&#xC758; &#xC124;&#xB9BD;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC774;&#xD574; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB208; (eya) &#xACB0; &#xC11D; &#xADF9; &#xC138;&#xD3EC; &#xC6B4;&#xBA85;&#xC758; &#xD0A4; &#xC9C4;&#xC555; &#xB420;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C;. EYA &#xADF9; &#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xC678; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD575; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xBA70; &#xC2A4;&#xD1A0;&#xD0B9; &#xC804;&#xC9C0;&#xC640; EYA &#xBD80;&#xC7AC;&#xB294; &#xADF9; &#xC9C0; &#xC140;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558; &#xC5EC; &#xD3EC; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC18C;&#xC131; &#xC2DD; EYA&#xC758; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xADF9; &#xC138;&#xD3EC; &#xC6B4;&#xBA85; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC0F; &#xADF9; &#xC9C0; &#xC140; &#xD14C;&#xB450;&#xB9AC; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xCD94;&#xC9C4; &#xB4F1;&#xC758; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC190;&#xC0C1; &#xC2DC; &#xD0A4; &#xC9C0; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; &#xC18C;&#xC131; &#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638;, &#xD45C;&#xC2DC;&#xB294; &#xC18C;&#xC131; &#xADF9; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC5EC; &#xD3EC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; eya &#xC2DD; &#xC5B5;&#xC555;.

&#xB208; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; oogenesis &#xC911; &#xADF9; &#xC138;&#xD3EC; &#xC6B4;&#xBA85;&#xC758; &#xD0A4; &#xC9C4;&#xC555; &#xACB0; &#xC11D;.

A lo largo de la ovog&#xE9;nesis Drosophila, las c&#xE9;lulas del fol&#xED;culo som&#xE1;ticas especializadas desempe&#xF1;an funciones cruciales en la formaci&#xF3;n del huevo de c&#xE1;mara y en la se&#xF1;alizaci&#xF3;n entre las c&#xE9;lulas som&#xE1;ticas y germinales. En el ovario, por lo menos tres tipos de c&#xE9;lulas del fol&#xED;culo, las c&#xE9;lulas som&#xE1;ticas polares, tallo y c&#xE9;lulas epiteliales principales c&#xE9;lulas del cuerpo del fol&#xED;culo, se pueden distinguir cuando el &#xF3;vulo c&#xE1;maras ra&#xED;z de la germario. Aunque la especificaci&#xF3;n de estos tres tipos de c&#xE9;lulas som&#xE1;ticas es importante para la ovog&#xE9;nesis y la embriog&#xE9;nesis normal, posterior, la base molecular para el establecimiento de destino de sus c&#xE9;lulas no se conoce completamente. Nuestros estudios revelan los ojos de genes ausentes (eya) es un represor clave del destino de la c&#xE9;lula polar. EYA es una prote&#xED;na nuclear que normalmente se excluyen de las c&#xE9;lulas polares y tallo, y la ausencia de EYA es suficiente para causar que las c&#xE9;lulas epiteliales del fol&#xED;culo de desarrollarse como c&#xE9;lulas polares. Por otra parte, la expresi&#xF3;n ect&#xF3;pica de EYA es capaz de suprimir el destino normal de las c&#xE9;lulas polares y comprometer las funciones normales de las c&#xE9;lulas polares, como la promoci&#xF3;n de la migraci&#xF3;n de borde de la celda. Finalmente, mostramos que ect&#xF3;pica de se&#xF1;alizaci&#xF3;n Hedgehog, que se sabe que causa la formaci&#xF3;n ect&#xF3;pica de c&#xE9;lulas polar, lo hace mediante la represi&#xF3;n de la expresi&#xF3;n en las c&#xE9;lulas del fol&#xED;culo eya epiteliales.

Ojos ausentes, un represor clave del destino de la c&#xE9;lula Polar Durante Drosophila oog&#xE9;nesis

&#x7845;&#x4E2D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x5E03;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;

Detecting patterns of protein distribution and gene expression in silico.

Patterns D&#xE9;tection de la distribution des prot&#xE9;ines et l&#x26;#39;expression g&#xE9;nique dans Silico

Erkennen von Mustern von Protein Verteilung und Genexpression in silico.

Rilevazione dei pattern di espressione genica e distribuzione della proteina in silico.

in silico&#x3067;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;

Silico&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xAC10;&#xC9C0;.

Patrones de distribuci&#xF3;n de Detecci&#xF3;n de prote&#xED;nas y la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica in silico

&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E1D;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E25;&#x5BC6;&#x7684;&#x808C;&#x8282;&#x7ED3;&#x6784;&#x662F;&#x808C;&#x8089;&#x7684;&#x53D1;&#x80B2;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4E0D;&#x662F;&#x5B8C;&#x5168;&#x7406;&#x89E3;&#x5982;&#x4F55;&#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;/&#x7EC6;&#x4E1D;&#x5B9E;&#x73B0;&#x5B83;&#x4EEC;&#x5B9A;&#x578B;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x3002;&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE; RNAi &#x5C4F;&#x5E55;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x5230;&#x4E00;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x808C;&#x8282;&#x957F;&#x5EA6;&#x77ED; &#xFF08;&#x9500;&#x552E;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5C06;&#x7F16;&#x7801;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x5408;&#xFF0C;WH2 &#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x808C;&#x8282;&#x5927;&#x5C0F;&#x3002;&#x5F53;&#x9500;&#x552E;&#x7531; RNAi &#x649E;&#x5012;&#x65F6;&#xFF0C;&#x4E3B;&#x808C;&#x8089;&#x663E;&#x793A;&#x8584;&#x808C;&#x539F;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7F29;&#x77ED;&#x808C;&#x8282;&#x548C;&#x808C;&#x8282;&#x6570;&#x76EE;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x635F;&#x5931;-&#x548C;&#x589E;&#x76CA;&#x7684;-&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x9500;&#x552E;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x808C;&#x8282;&#x957F;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x8584;&#x4E1D;&#x5EF6;&#x957F;&#x4ECE;&#x516D;&#x8FB9;&#x5F62;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x590D;&#x6742;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x9500;&#x552E;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x5FC3;&#x808C;&#x86CB;&#x767D;&#x808C;&#x539F;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4E2D;&#x7684;&#x63ED;&#x793A;&#x7684;&#x8584;&#x4E1D;&#x5168;&#x957F;&#x53D6;&#x5F97;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E24;&#x6B65;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x548C;&#x9500;&#x552E;&#x5728;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x6B21;&#x7684;&#x4F38;&#x957F;&#x9636;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x6700;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x5B83;&#x654C;&#x89C6;&#x6307;&#x51FA;&#x7ED3;&#x675F;&#x5C01;&#x76D6;&#x86CB;&#x767D; Tropomodulin &#x662F;&#x9700;&#x8981;&#x3002;

&#x9500;&#x552E;&#xFF0C;WH2 &#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E1D;&#x4F38;&#x957F;&#x7387;&#x4ECE;&#x516D;&#x8FB9;&#x5F62;&#x679C;&#x8747;&#x808C;&#x8089;&#x751F;&#x957F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

Organization of actin filaments into a well-organized sarcomere structure is critical for muscle development and function. However, it is not completely understood how sarcomeric actin/thin filaments attain their stereotyped lengths. In an RNAi screen in Drosophila primary muscle cells, we identified a gene, sarcomere length short (sals), which encodes an actin-binding, WH2 domain-containing protein, required for proper sarcomere size. When sals is knocked down by RNAi, primary muscles display thin myofibrils with shortened sarcomeres and increased sarcomere number. Both loss- and gain-of-function analyses indicate that SALS may influence sarcomere lengths by promoting thin-filament lengthening from pointed ends. Furthermore, the complex localization of SALS and other sarcomeric proteins in myofibrils reveals that the full length of thin filaments is achieved in a two-step process, and that SALS is required for the second elongation phase, most likely because it antagonizes the pointed-end capping protein Tropomodulin.

SALS, a WH2-domain-containing protein, promotes sarcomeric actin filament elongation from pointed ends during Drosophila muscle growth.

Organisation des filaments d&#x26;#39;actine dans une structure bien organis&#xE9;e sarcom&#xE8;re est essentiel pour le d&#xE9;veloppement musculaire et la fonction. Toutefois, il n&#x26;#39;est pas compl&#xE8;tement compris comment sarcom&#xE9;rique actine / minces filaments atteindre leurs longueurs st&#xE9;r&#xE9;otyp&#xE9;s. Dans un &#xE9;cran de l&#x26;#39;ARNi dans les cellules de drosophile musculaires primaires, nous avons identifi&#xE9; un g&#xE8;ne, la longueur des sarcom&#xE8;res courte (PAS), qui code pour un liant l&#x26;#39;actine, WH2 de domaine contenant des prot&#xE9;ines, n&#xE9;cessaires pour la taille ad&#xE9;quate sarcom&#xE8;re. Lorsque Sals est renvers&#xE9; par l&#x26;#39;ARNi, les muscles primaires afficher myofibrilles minces avec sarcom&#xE8;res raccourcies et un nombre accru sarcom&#xE8;re. Les deux pertes et le gain de fonction des analyses indiquent que SALS peuvent influer sur la longueur des sarcom&#xE8;res en favorisant mince filament allongement &#xE0; partir des extr&#xE9;mit&#xE9;s pointues. En outre, la localisation complexe de SALS et d&#x26;#39;autres prot&#xE9;ines dans sarcom&#xE9;riques myofibrilles r&#xE9;v&#xE8;le que la longueur de filaments fins est r&#xE9;alis&#xE9; dans un proc&#xE9;d&#xE9; en deux &#xE9;tapes, et que les SALS est n&#xE9;cessaire pour la phase seconde &#xE9;longation, la plus probable, car il antagonise l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; pointue- coiffage Tropomodulin prot&#xE9;ine.

SALS, une prot&#xE9;ine WH2-domaine contenant, favorise sarcom&#xE9;riques Allongement filament d&#x26;#39;actine &#xE0; partir des extr&#xE9;mit&#xE9;s pointues Pendant la croissance musculaire chez la drosophile

Organisation von Aktin-Filamenten in eine gut organisierte Sarkomer-Struktur ist wichtig f&uuml;r Muskelaufbau und Funktion. Es ist jedoch nicht vollst&auml;ndig verstanden wie Sarkomerproteine Aktin/d&uuml;nne Filamente ihre Stereotype L&auml;nge erreichen. Ein Bildschirm RNAi in Drosophila prim&auml;re Muskelzellen haben wir festgestellt, ein Gen, Sarkomer L&auml;nge kurz (Sals), das ein Aktin-Bindung, WH2 Dom&auml;ne-haltige Protein, erforderlich f&uuml;r die ordnungsgem&auml;&szlig;e Sarkomer Gr&ouml;&szlig;e codiert. Wenn Sals ist von RNAi abgerissen, prim&auml;re Muskeln zeigen d&uuml;nne Myofibrillen mit verk&uuml;rzten Sarkomeren und Sarkomer Anzahl erh&ouml;ht. Beide Verlust und Gewinn-of Function-Analysen zeigen, dass SALS Sarkomer L&auml;ngen beeinflussen k&ouml;nnen, durch die F&ouml;rderung von d&uuml;nn-Filament Verl&auml;ngerung von Spitzen enden. Dar&uuml;ber hinaus zeigt die komplexe Lokalisierung von SALS und anderen Sarkomerproteine Proteinen in Myofibrillen, dass die volle L&auml;nge d&uuml;nne Filamente in einem zweistufigen Prozess erreicht wird und SALS ist erforderlich f&uuml;r die zweite Phase Dehnung, wahrscheinlich, weil es das wies-End Abdeckfl&auml;che Protein Tropomodulin antagonizes.

SALS, ein WH2-Dom&auml;ne-haltige Protein f&ouml;rdert Sarkomerproteine Aktin-Filamenten Winkelabstand vom Spitzen enden w&auml;hrend der Drosophila-Muskel-Wachstum.

Organizzazione dei filamenti di actina in una struttura ben organizzata sarcomero &egrave; critico per la funzione e lo sviluppo muscolare. Tuttavia, non &egrave; completamente comprensibile come sarcomero filamenti sottili di actina/raggiungono loro lunghezze stereotipate. In uno schermo di RNAi in cellule muscolari primarie della drosofila, abbiamo identificato un gene, sarcomero lunghezza corta (sals), che codifica un&#39;actina-associazione, WH2 dominio contenenti proteine, richiesta per la dimensione corretta sarcomero. Quando sals viene abbattuto da RNAi, muscoli primari visualizzare sottili miofibrille con sarcomeri ridotti e aumentato numero di sarcomero. Sia analisi di perdita e guadagno-di-funzione indicano che SALS possono influenzare lunghezze di sarcomero promuovendo il filamento sottile allungamento dall&#39;estremit&agrave; appuntita. Inoltre, la localizzazione complessa di SALS e altre proteine del sarcomero in miofibrille rivela che l&#39;intera lunghezza dei filamenti sottili &egrave; realizzata in un processo in due fasi, e che la SALS &egrave; richiesto per la seconda fase di allungamento, probabilmente perch&eacute; esso antagonizza la proteina tappante fine ha sottolineato Tropomodulin.

SALS, una proteina WH2-dominio-contenente, promuove allungamento del filamento sarcomero actina dall&#39;estremit&agrave; appuntita durante la crescita muscolare della drosofila.

&#x3088;&#x304F;&#x7D44;&#x7E54;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306F;&#x3001;&#x7B4B;&#x8089;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;/&#x7D30;&#x3044;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D0B;&#x5207;&#x308A;&#x578B;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;RNAi&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x3001;WH2&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;&#x77ED;&#x3044;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#xFF08;SAL&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; SAL&#x306E;&#x306F;&#x3001;RNAi&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x304C;&#x77ED;&#x7E2E;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x3068;&#x5897;&#x52A0;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x6570;&#x3068;&#x8584;&#x3044;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x640D;&#x5931;&#x3068;&#x5229;&#x5F97;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;SALS&#x306F;&#x5C16;&#x3063;&#x305F;&#x7AEF;&#x304B;&#x3089;&#x9577;&#x304F;&#x7D30;&#x3044;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x5148;&#x306E;&#x5C16;&#x3063;&#x305F;&#x7AEF;&#x3092;&#x62EE;&#x6297;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;SALS&#x3068;&#x7B4B;&#x539F;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x5185;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5C40;&#x5728;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x3044;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x9577;&#x3055;&#x306F;2&#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;SALS&#x306F;&#x3001;&#x7B2C;&#x4F38;&#x9577;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;Tropomodulin&#x3092;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;

SALS&#x3001;WH2-&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x542B;&#x6709;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x5C16;&#x3063;&#x305F;&#x7AEF;&#x304B;&#x3089;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x4F38;&#x9577;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;

&#xC798; &#xC870;&#xC9C1; &#xB41C; sarcomere &#xAD6C;&#xC870;&#xB85C; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xADFC;&#xC721; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC774;&#xD574; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; sarcomeric &#xB9D0;&#xB77C;/&#xC587;&#xC740; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xB2EC;&#xC131; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC9C4;&#xBD80;&#xD55C; &#xAE38;&#xC774; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Drosophila &#xAE30;&#xBCF8; &#xADFC;&#xC721; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; RNAi &#xD654;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; sarcomere &#xAE38;&#xC774;&#xAC00; &#xC9E7;&#xC740; (sals)&#xB294; &#xB9D0;&#xB77C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; WH2 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xC801;&#xC808; &#xD55C; sarcomere &#xD06C;&#xAE30;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Sals Rnai&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBB34; &#xB108; &#xB728;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xAE30;&#xBCF8; &#xADFC;&#xC721; &#xB2E8;&#xCD95;&#xB41C; sarcomeres&#xC640; &#xC587;&#xC740; myofibrils &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418; &#xACE0; sarcomere &#xC218;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB450; &#xC190;&#xC2E4; &#xBC0F; &#xC774;&#xB4DD;-&#xC758;-&#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D; SALS &#xC587;&#xC740; &#xBA58; &#xBFB0;&#xC871;&#xD55C; &#xB05D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE38;&#xC5B4; &#xD64D;&#xBCF4; sarcomere &#xAE38;&#xC774; &#xC601;&#xD5A5; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, SALS myofibrils&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; sarcomeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC587;&#xC740; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; 2 &#xB2E8;&#xACC4; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C0;&#xC801; &#xC5D4;&#xB4DC; &#xC0C1;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Tropomodulin &#xBC18;&#xAC10; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB192;&#xC740; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xB2E8;&#xACC4; SALS &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xD78C;&#xB2E4;.

SALS WH2 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Drosophila &#xADFC;&#xC721; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBFB0;&#xC871;&#xD55C; &#xB05D;&#xC5D0;&#xC11C; sarcomeric &#xB9D0;&#xB77C; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; &#xC5F0;&#xC2E0; &#xC728;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Organizaci&#xF3;n de los filamentos de actina en una estructura del sarc&#xF3;mero bien organizada es fundamental para el desarrollo y la funci&#xF3;n muscular. Sin embargo, no se entiende totalmente c&#xF3;mo sarcom&#xE9;ricas actina / filamentos delgados alcanzar sus longitudes estereotipadas. En una pantalla de ARNi en c&#xE9;lulas Drosophila musculares primarias, hemos identificado un gen, la longitud del sarc&#xF3;mero corto (SAL), que codifica una actina vinculante, WH2 dominio que contienen prote&#xED;nas, necesarios para el tama&#xF1;o adecuado del sarc&#xF3;mero. Cuando SAL es derribado por RNAi, los m&#xFA;sculos principales muestran miofibrillas delgadas con sarc&#xF3;meros m&#xE1;s cortos y el n&#xFA;mero creciente sarc&#xF3;mero. Tanto la p&#xE9;rdida y ganancia de los an&#xE1;lisis de la funci&#xF3;n de indicar que SALS puede influir en longitudes de sarc&#xF3;mera mediante la promoci&#xF3;n de filamento delgado alargamiento de los extremos puntiagudos. Adem&#xE1;s, la localizaci&#xF3;n complejo de SALS y otras prote&#xED;nas sarcom&#xE9;ricas en miofibrillas revela que la longitud total de filamentos finos se logra en un proceso de dos pasos, y que SALS se requiere para la fase de alargamiento segundo, lo m&#xE1;s probable, ya que antagoniza la punta extremo tapado tropomodulina prote&#xED;na.

SALS, una prote&#xED;na WH2 de dominio que contienen, promueve la elongaci&#xF3;n sarcom&#xE9;ricas filamentos de actina de extremos puntiagudos Durante el crecimiento del m&#xFA;sculo de Drosophila

&#x4E3A;&#x4E86;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x808C;&#x8089;&#x88C5;&#x914D;&#x548C;&#x7EF4;&#x4FEE;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x9AD8;&#x6548; RNA &#x5E72;&#x6270; (RNAi) &#x65B9;&#x6CD5;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x53CC;&#x94FE; Rna (dsRNAs) &#x7684;&#x679C;&#x8747;&#x539F;&#x4EE3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x9996;&#x5148;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x5206;&#x5B50;&#x6807;&#x8BB0;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x786E;&#x8BA4;&#x5E76;&#x5EF6;&#x957F;&#x539F;&#x4EE3;&#x57F9;&#x517B;&#x6210;&#x808C;&#x6765;&#x81EA;&#x679C;&#x8747;&#x80DA;&#x80CE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5982;&#x4E0B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4F53;&#x5185;&#x770B;&#x5230;&#x540C;&#x4E00;&#x53D1;&#x80B2;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x89C2;&#x5BDF;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5E94;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x5206;&#x6790; 28 &#x679C;&#x8747;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x4EBA;&#x4F53;&#x808C;&#x8089;&#x75BE;&#x75C5;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x627E;&#x5230; 19 &#x7684;&#x4ED6;&#x4EEC;&#xFF0C;&#x5F53;&#x4E2D;&#x65AD;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E3B;&#x6587;&#x5316;&#x5F02;&#x5E38;&#x808C;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E09;&#xFF0C;&#x4ECE; 1140&#x5E74;&#x57FA;&#x56E0;&#x968F;&#x673A;&#x6311;&#x9009;&#x7684; RNAi &#x5C4F;&#x5E55;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A; 49 &#x53C2;&#x4E0E;&#x540E;&#x671F;&#x808C;&#x8089;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x4E86;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E0E;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x4E09;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;Fermitin 1 &#x548C; Fermitin 2&#xFF0C;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x542B;&#x7C98;&#x8FDE;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x884C;&#x4E8B;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x5197;&#x4F59;&#x65B9;&#x5F0F;&#x4FDD;&#x6301;&#x808C;&#x8089;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86; CG2165&#xFF0C;&#x5B83;&#x5C06;&#x7F16;&#x7801;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C; Ca2 +-ATPase&#xFF0C;&#x5E76;&#x663E;&#x793A;&#x5B83;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x7EF4;&#x6301;&#x808C;&#x8089;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x5982;&#x4F55;&#x53EF;&#x4EE5;&#x64CD;&#x7EB5;&#x679C;&#x8747;&#x539F;&#x4EE3;&#x7EC6;&#x80DE; RNAi &#x548C;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5C4F;&#x5E55;&#x4E3A;&#x5F00;&#x53D1;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6A21;&#x578B;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x68C0;&#x5B9A;&#x3002;

RNA &#x5E72;&#x6270;&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#x539F;&#x4EE3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x56E0;&#x53C2;&#x4E0E;&#x808C;&#x8089;&#x88C5;&#x914D;&#x548C;&#x7EF4;&#x4FEE;&#x7684;&#x7B5B;&#x67E5;&#x3002;

To facilitate the genetic analysis of muscle assembly and maintenance, we have developed a method for efficient RNA interference (RNAi) in Drosophila primary cells using double-stranded RNAs (dsRNAs). First, using molecular markers, we confirm and extend the observation that myogenesis in primary cultures derived from Drosophila embryonic cells follows the same developmental course as that seen in vivo. Second, we apply this approach to analyze 28 Drosophila homologs of human muscle disease genes and find that 19 of them, when disrupted, lead to abnormal muscle phenotypes in primary culture. Third, from an RNAi screen of 1140 genes chosen at random, we identify 49 involved in late muscle differentiation. We validate our approach with the in vivo analyses of three genes. We find that Fermitin 1 and Fermitin 2, which are involved in integrin-containing adhesion structures, act in a partially redundant manner to maintain muscle integrity. In addition, we characterize CG2165, which encodes a plasma membrane Ca2+-ATPase, and show that it plays an important role in maintaining muscle integrity. Finally, we discuss how Drosophila primary cells can be manipulated to develop cell-based assays to model human diseases for RNAi and small-molecule screens.

RNA interference screening in Drosophila primary cells for genes involved in muscle assembly and maintenance.

Pour faciliter l&#x26;#39;analyse g&#xE9;n&#xE9;tique de l&#x26;#39;assemblage et l&#x26;#39;entretien des muscles, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une m&#xE9;thode pour l&#x26;#39;efficacit&#xE9; interf&#xE9;rence ARN (ARNi) dans les cellules de drosophile primaires en utilisant des ARN double brin (ARNdb). Tout d&#x26;#39;abord, en utilisant des marqueurs mol&#xE9;culaires, nous confirmer et d&#x26;#39;&#xE9;tendre l&#x26;#39;observation que la myogen&#xE8;se dans des cultures primaires d&#xE9;riv&#xE9;es de cellules embryonnaires chez la drosophile suit le m&#xEA;me cours de d&#xE9;veloppement au vu in vivo. Deuxi&#xE8;mement, nous appliquons cette approche pour analyser 28 homologues chez la drosophile de l&#x26;#39;homme des g&#xE8;nes de maladies musculaires et de constater que 19 d&#x26;#39;entre eux, lorsque perturb&#xE9;, conduisent &#xE0; des ph&#xE9;notypes musculaires anormales en culture primaire. Troisi&#xE8;mement, &#xE0; partir d&#x26;#39;un &#xE9;cran de RNAi de 1140 g&#xE8;nes choisis au hasard, nous identifions 49 impliqu&#xE9;e dans la diff&#xE9;renciation musculaire tardive. Nous validons notre approche avec l&#x26;#39;analyses in vivo de trois g&#xE8;nes. Nous constatons que Fermitin 1 et Fermitin 2, qui sont impliqu&#xE9;s dans des structures d&#x26;#39;adh&#xE9;rence int&#xE9;grine contenant, agir d&#x26;#39;une mani&#xE8;re partiellement redondants pour maintenir l&#x26;#39;int&#xE9;grit&#xE9; musculaire. En outre, nous caract&#xE9;risons CG2165, qui code pour une membrane plasmique Ca2 +-ATPase, et montrer qu&#x26;#39;il joue un r&#xF4;le important dans le maintien de l&#x26;#39;int&#xE9;grit&#xE9; musculaire. Enfin, nous discutons de la fa&#xE7;on dont les cellules de drosophile primaires peuvent &#xEA;tre manipul&#xE9;s pour d&#xE9;velopper des cellules &#xE0; base de tests pour mod&#xE9;liser les maladies humaines pour l&#x26;#39;ARNi et de petites mol&#xE9;cules &#xE9;crans.

D&#xE9;pistage interf&#xE9;rence ARN dans les cellules de drosophile primaires de g&#xE8;nes impliqu&#xE9;s dans l&#x26;#39;Assembl&#xE9;e musculaire et d&#x26;#39;entretien

Um die genetische Analyse von Muskel-Montage und Wartung zu erleichtern, haben wir eine Methode zur effizienten RNA-Interferenz (RNAi) in Drosophila-Prim&auml;rzellen mit doppelstr&auml;ngige RNA (DsRNAs) entwickelt. Zuerst mit molekularer Marker, wir best&auml;tigen und erweitern die Beobachtung, dass Myogenese in Prim&auml;rkulturen von Drosophila embryonalen Zellen folgt dem gleichen Entwicklungsst&ouml;rungen Platz wie wir es erlebt in Vivo abgeleitet. Zweitens setzen wir diesen Ansatz um 28 Drosophila UCP1 menschlichen Muskel Krankheit Gene zu analysieren und feststellen, dass 19 von ihnen, wenn gest&ouml;rt, abnorme Muskel Ph&auml;notypen in der Prim&auml;rkultur f&uuml;hren. Drittens ein RNAi-Bildschirm von 1140-Genen, die nach dem Zufallsprinzip ausgew&auml;hlt, identifizieren wir 49 sp&auml;ten Differenzierung der Muskeln beteiligt. Wir &uuml;berpr&uuml;fen unser Ansatz der in-vivo-Analysen von drei Genen. Wir finden, die Fermitin 1 und Fermitin 2, die bei Integrin-haltigen Adh&auml;sion Strukturen, handeln teilweise redundante Muskel Integrit&auml;t erhalten. Dar&uuml;ber hinaus charakterisieren wir CG2165, das einer Plasmamembran Ca2 + codiert-ATPase und zeigen, dass es spielt eine wichtige Rolle bei der Aufrechterhaltung der Integrit&auml;t der Muskel. Schlie&szlig;lich diskutieren wir, wie Taufliege-Prim&auml;rzellen manipuliert werden k&ouml;nnen, um zellbasierte Assays auf Modell menschliche Krankheiten f&uuml;r RNAi und klein-Molek&uuml;l-Bildschirme zu entwickeln.

RNA-Interferenz-Screening in Drosophila-Prim&auml;rzellen f&uuml;r Genen, die bei Muskel-Montage und Wartung.

Per facilitare l&#39;analisi genetica del muscolo montaggio e manutenzione, abbiamo sviluppato in drosofila celle primarie usando RNA a doppio filamento (RNAds) un metodo efficiente interferenza del RNA (RNAi). In primo luogo, mediante marcatori molecolari, confermare ed estendere l&#39;osservazione che myogenesis in colture primarie derivato da segue le cellule embrionali della drosofila lo stesso corso dello sviluppo come quello visto in vivo. In secondo luogo, applichiamo questo approccio per analizzare 28 omologhi della drosofila dei geni malattia muscolo umano e trovare che 19 di loro, quando perturbato, portare a fenotipi muscolari anomale in coltura primaria. In terzo luogo, da uno schermo di RNAi di 1140 geni scelti a caso, identifichiamo 49 coinvolto nella differenziazione muscolare ritardato. Noi di convalidare il nostro approccio con l&#39;analisi in vivo dei tre geni. Troviamo che Fermitin 1 e 2 di Fermitin, che sono coinvolti in integrina-contenente strutture di adesione, agire in modo parzialmente ridondante per mantenere l&#39;integrit&agrave; muscolare. Inoltre, ci caratterizzano CG2165, che codifica per una membrana plasmatica Ca2 +-ATPasi e mostrano che essa svolge un ruolo importante nel mantenere l&#39;integrit&agrave; muscolare. Infine, discutiamo come Drosophila celle primarie possono essere manipolate per sviluppare analisi cell-based di malattie umane modello per molecola di piccoli schermi e RNAi.

Screening di interferenza RNA nelle cellule primarie della drosofila per geni coinvolti nella manutenzione e nell&#39;assemblaggio di muscolo.

&#x7B4B;&#x8089;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x3084;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C6;&#x30CA;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;RNA&#xFF08;dsRNA&#x306F;&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x521D;&#x4EE3;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#xFF08;RNAi&#xFF09;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305A;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x80DA;&#x7D30;&#x80DE;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x521D;&#x4EE3;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7B4B;&#x5F62;&#x6210;&#x304C;in vivo&#x3067;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x767A;&#x9054;&#x904E;&#x7A0B;&#x306B;&#x5F93;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3066;&#x62E1;&#x5F35;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;28&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;19&#x306F;&#x3001;&#x7834;&#x7815;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;&#x521D;&#x4EE3;&#x57F9;&#x990A;&#x3067;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x7B4B;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E09;&#x306B;&#x3001;&#x7121;&#x4F5C;&#x70BA;&#x306B;&#x9078;&#x3070;&#x308C;&#x305F;1140&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;RNAi&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x9045;&#x308C;&#x3066;&#x7B4B;&#x8089;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;49&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;3&#x3064;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x3068;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x63A5;&#x7740;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;Fermitin 1 Fermitin 2&#x306F;&#x3001;&#x7B4B;&#x8089;&#x306E;&#x6574;&#x5408;&#x6027;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x5197;&#x9577;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x884C;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;Ca2 +-ATPase&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x3001;CG2165&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x7B4B;&#x8089;&#x306E;&#x6574;&#x5408;&#x6027;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;RNAi&#x3068;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x75C5;&#x6C17;&#x3092;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7B4B;&#x8089;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7DAD;&#x6301;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x521D;&#x4EE3;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;

&#xADFC;&#xC721; &#xBC0F; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; 1 &#xCC28; &#xC140; &#xB354;&#xBE14;-&#xC88C;&#xCD08; RNAs (dsRNAs)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; RNA &#xAC04;&#xC12D; (RNAi) &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCCAB;&#xC9F8;, &#xBD84;&#xC790; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBB38;&#xD654;&#xAD8C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; myogenesis&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xBC30;&#xC544; &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF8; &#xAC83;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xACFC;&#xC815; &#xAD00;&#xCC30;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5;. &#xB458;&#xC9F8;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xADFC;&#xC721; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; 28 Drosophila homologs &#xBD84;&#xC11D; &#xCC3E;&#xC544; 19, &#xC911;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC8FC; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xADFC;&#xC721; &#xACE0;&#xAE30; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC801;&#xC6A9;. &#xC14B;&#xC9F8;, &#xBB34;&#xC791;&#xC704;&#xB85C; &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; 1140 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD55C; RNAi &#xD654;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; 49 &#xB2A6;&#xC740; &#xADFC;&#xC721; &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2DD;&#xBCC4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC138; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xBD84;&#xC11D; &#xC811;&#xADFC;&#xC758; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCC3E;&#xC744; integrin &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; Fermitin 1, Fermitin 2, &#xC811;&#xCC29; &#xAD6C;&#xC870; &#xADFC;&#xC721; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xBCF5; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC73C;&#xB85C; &#xD589;&#xB3D9;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; CG2165 &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; Ca2 +&#xC744; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xD2B9;&#xC9D5;-ATPase, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC1FC; &#xADFC;&#xC721; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; 1 &#xCC28; &#xC140;&#xC744; &#xC870;&#xC791; &#xD558; RNAi &#xBC0F; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBAA8;&#xB378; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RNA &#xAC04;&#xC12D; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xADFC;&#xC721; &#xC870;&#xB9BD; &#xBC0F; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; 1 &#xCC28; &#xC140;&#xC5D0;.

Para facilitar el an&#xE1;lisis gen&#xE9;tico de ensamblaje y mantenimiento del m&#xFA;sculo, hemos desarrollado un m&#xE9;todo para la eficiencia de interferencia de ARN (RNAi) en c&#xE9;lulas de Drosophila primarios utilizando ARN de doble cadena (ARN de doble cadena). En primer lugar, el uso de marcadores moleculares, que confirman y ampl&#xED;an la observaci&#xF3;n de que la miog&#xE9;nesis en cultivos primarios derivados de c&#xE9;lulas embrionarias de Drosophila sigue el mismo curso de desarrollo como la que se observa in vivo. En segundo lugar, aplicar este enfoque para analizar los 28 hom&#xF3;logos de Drosophila los genes humanos de la enfermedad del m&#xFA;sculo y encontrar que 19 de ellos, cuando falla, dar lugar a fenotipos musculares anormales en cultivo primario. En tercer lugar, desde una pantalla de RNAi de 1140 genes elegidos al azar, se identifican 49 implicados en la diferenciaci&#xF3;n muscular tard&#xED;o. Nos validar nuestro enfoque con el an&#xE1;lisis in vivo de los tres genes. Encontramos que Fermitin 1 y Fermitin 2, que est&#xE1;n involucrados en las estructuras de adhesi&#xF3;n integrina que contienen, actuar de una manera parcialmente redundantes para mantener la integridad muscular. Adem&#xE1;s, se caracterizan CG2165, que codifica una membrana plasm&#xE1;tica de Ca2 +-ATPasa, y demostrar que juega un papel importante en el mantenimiento de la integridad muscular. Finalmente, se discute c&#xF3;mo las c&#xE9;lulas de Drosophila primarias pueden ser manipulados para desarrollar ensayos basados &#x200B;&#x200B;en c&#xE9;lulas para modelar enfermedades humanas para RNAi y pantallas de peque&#xF1;as mol&#xE9;culas.

Detecci&#xF3;n de interferencia de ARN en las c&#xE9;lulas de Drosophila primarios de los genes implicados en la Asamblea muscular y mantenimiento

&#x5728;&#x5F00;&#x53D1;&#x671F;&#x95F4;&#xFF0C;&#x7CBE;&#x5FC3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x548C;&#x8FD0;&#x52A8;&#x6A21;&#x5F0F;&#x5FC5;&#x987B;&#x51FA;&#x73B0;&#x5728;&#x6B63;&#x786E;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x9002;&#x5F53;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x5C0F;&#x4E8E;&#x7A7A;&#x95F4;&#x683C;&#x5C40;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E86;&#x53D1;&#x5C55;&#x65F6;&#x673A;&#x548C;&#x6574;&#x5408;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x673A;&#x5236;&#x4E86;&#x89E3;&#x5F97;&#x5F88;&#x5C11;&#x3002;&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#x5375;&#x5DE2;&#x8FB9;&#x754C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x53D1;&#x751F;&#x5177;&#x4F53;&#x9636;&#x6BB5; 9&#x3002;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x88AB;&#x53D7;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x6FC0;&#x7D20;&#x8715;&#x76AE;&#x6FC0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x800C;&#x7A7A;&#x95F4;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x6D04;&#x6E38;&#x7684;&#x4EBA;&#x53E3;&#x9700;&#x8981;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x9014;&#x5F84;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x8715;&#x76AE;&#x6FC0;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7A7A;&#x95F4;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6682;&#x65F6;&#x88AB;&#x56FE;&#x6848;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x673A;&#x5236;&#x8FD8;&#x4E0D;&#x592A;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x5728;&#x9636;&#x6BB5; 9 &#x86CB;&#x5206;&#x5EAD;&#x3001; &#x8715;&#x76AE;&#x6FC0;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6700;&#x9AD8;&#x524D;&#x6BDB;&#x56CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5305;&#x62EC;&#x8FB9;&#x6846;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x51FA;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x8715;&#x76AE;&#x6FC0;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x548C;&#x8FB9;&#x754C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x7A81;&#x7136;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x4ECE;&#x8FB9;&#x5883;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x901A;&#x5E38;&#x4F1A;&#x4E22;&#x5931;&#x9636;&#x6BB5; 9&#xFF0C;&#x5728;&#x54CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x8FD9;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x8715;&#x76AE;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x683C;&#x5C40;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x6291;&#x5236;&#x8715;&#x76AE;&#x6FC0;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7; P160 &#x8715;&#x76AE;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x5171;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x56E0;&#x5B50;&#x592A;&#x6EE1; &#xFF08;&#x53F0;&#xFF09; &#x4E0E;&#x57FA;&#x672C;&#x87BA;&#x65CB;-&#x73AF;-&#x87BA;&#x65CB; (bHLH&#xFF09; &#x57DF;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D1;&#x73B0;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x65F6;&#x7A7A;&#x7EBF;&#x7D22;&#x90FD;&#x96C6;&#x6210;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x8FB9;&#x754C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684; BTB &#x86CB;&#x767D;&#x7A81;&#x53D8;&#x9700;&#x8981;&#x4E00;&#x4F53;&#x5316;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x548C;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

During development, elaborate patterns of cell differentiation and movement must occur in the correct locations and at the proper times. Developmental timing has been studied less than spatial pattern formation, and the mechanisms integrating the two are poorly understood. Border-cell migration in the Drosophila ovary occurs specifically at stage 9. Timing of the migration is regulated by the steroid hormone ecdysone, whereas spatial patterning of the migratory population requires localized activity of the JAK-STAT pathway. Ecdysone signalling is patterned spatially as well as temporally, although the mechanisms are not well understood. In stage 9 egg chambers, ecdysone signalling is highest in anterior follicle cells including the border cells. We identify the gene abrupt as a repressor of ecdysone signalling and border-cell migration. Abrupt protein is normally lost from border-cell nuclei during stage 9, in response to JAK-STAT activity. This contributes to the spatial pattern of the ecdysone response. Abrupt attenuates ecdysone signalling by means of a direct interaction with the basic helix-loop-helix (bHLH) domain of the P160 ecdysone receptor coactivator Taiman (Tai). Taken together, these findings provide a molecular mechanism by which spatial and temporal cues are integrated.

Border-cell migration requires integration of spatial and temporal signals by the BTB protein Abrupt.

Au cours du d&#xE9;veloppement, des mod&#xE8;les &#xE9;labor&#xE9;s de la diff&#xE9;renciation cellulaire et le mouvement doit se produire dans les emplacements appropri&#xE9;s et aux moments appropri&#xE9;s. Calendrier de d&#xE9;veloppement a &#xE9;t&#xE9; moins &#xE9;tudi&#xE9;e que la formation de structure spatiale, et les m&#xE9;canismes d&#x26;#39;int&#xE9;gration, les deux sont mal compris. Border la migration des cellules de l&#x26;#39;ovaire chez la drosophile se produit en particulier &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tape 9. Moment de la migration est r&#xE9;glement&#xE9;e par l&#x26;#39;hormone st&#xE9;ro&#xEF;de ecdysone, alors structuration spatiale de la population migratoire n&#xE9;cessite une activit&#xE9; localis&#xE9;e de la voie JAK-STAT. Ecdysone signalisation est model&#xE9;e dans l&#x26;#39;espace ainsi que dans le temps, bien que les m&#xE9;canismes ne sont pas bien comprises. Dans les chambres stade de l&#x26;#39;oeuf 9, ecdysone de signalisation est la plus &#xE9;lev&#xE9;e dans les cellules folliculaires ant&#xE9;rieures, y compris les cellules de bordure. Nous identifions le g&#xE8;ne abrupte comme un r&#xE9;presseur de l&#x26;#39;ecdysone de signalisation et de la fronti&#xE8;re la migration des cellules. Prot&#xE9;ines brusque est normalement perdue de la fronti&#xE8;re des cellules noyaux lors de l&#x26;#39;&#xE9;tape 9, en r&#xE9;ponse &#xE0; la JAK-STAT activit&#xE9;. Cela contribue &#xE0; la r&#xE9;partition spatiale de la r&#xE9;ponse ecdysone. Brusque att&#xE9;nue l&#x26;#39;ecdysone de signalisation au moyen d&#x26;#39;une interaction directe avec l&#x26;#39;base h&#xE9;lice-boucle-h&#xE9;lice (bHLH) de domaine de l&#x26;#39;ecdysone P160 r&#xE9;cepteur coactivateur Taiman (tai). Pris ensemble, ces r&#xE9;sultats fournissent un m&#xE9;canisme mol&#xE9;culaire par lequel les indices spatiaux et temporels sont int&#xE9;gr&#xE9;s.

Border la migration des cellules n&#xE9;cessite l&#x26;#39;int&#xE9;gration de signaux spatiaux et temporels par la prot&#xE9;ine BTB brusque

W&auml;hrend der Entwicklung mu&szlig; aufwendige Muster der Zelldifferenzierung und Bewegung in die richtigen Speicherorte und zu den richtigen Zeitpunkten auftreten. Entwicklungsbiologie Zeitpunkt weniger als r&auml;umliche Strukturbildung untersucht worden, und die Integration der beiden Mechanismen sind oft missverstanden. Grenze-Zellmigration im Eierstock Drosophila tritt speziell auf Stufe 9. Zeitpunkt der Migration wird durch das Steroid Hormon Ecdyson, reguliert, r&auml;umliche Musterung der wandernden Bev&ouml;lkerung erfordert lokalisierte Aktivit&auml;t von der JAK-STAT-Signalweg. Ecdyson Signalisierung ist auch r&auml;umlich wie zeitlich gemustert, obwohl die Mechanismen nicht gut verstanden sind. In Stufe 9 Ei Kammern signalisiert Ecdyson h&ouml;chste in anterior Follikel Zellen einschlie&szlig;lich der Grenze-Zellen. Wir identifizieren das Gen als ein Verdr&auml;nger Ecdyson Signal- und Grenze-Zelle Migration abrupt. Abrupten Protein wird normalerweise nicht Grenze-Zellkerne in Phase 9, Reaktion in JAK-STAT-Aktivit&auml;t. Dies tr&auml;gt zu dem r&auml;umlichen Muster der Ecdyson Antwort. Abrupte d&auml;mpft Ecdyson Signalisierung durch eine direkte Interaktion mit der grundlegenden Helix-Schleife-Helix (bHLH)-Dom&auml;ne der P160 Ecdyson Rezeptor Coaktivator Taiman (Tai). Zusammengenommen bieten diese Erkenntnisse eine molekulare Mechanismen, durch die r&auml;umliche und zeitliche Hinweise integriert sind.

Grenze-Zelle Migration erfordert die Integration von r&auml;umlichen und zeitlichen Signale durch das BTB-Protein Abrupt.

Durante lo sviluppo, elaborati modelli di differenziazione delle cellule e il movimento devono avvenire nelle posizioni corrette e nel momento giusto. Temporizzazione dello sviluppo &egrave; stato studiato meno di formazione modello spaziale, e i meccanismi di integrazione di due sono capiti male. Migrazione di confine-cellulare nell&#39;ovaio di Drosophila si verifica in particolare in fase 9. Temporizzazione della migrazione &egrave; regolata dall&#39;ecdisone ormone steroide, mentre patterning spaziale della popolazione migratoria richiede attivit&agrave; localizzate della via JAK-STAT. Segnalazione di ecdisone &egrave; modellata spazialmente cos&igrave; come temporaneamente, anche se i meccanismi non sono ben compresi. Nelle camere di uovo fase 9, ecdisone segnalazione &egrave; pi&ugrave; alta nelle cellule del follicolo anteriore compreso le cellule di confine. Identifichiamo il gene brusco come un repressore della migrazione di segnalamento e di confine-cella ecdisone. Brusca della proteina &egrave; normalmente persa dai nuclei di frontiera-cella durante la fase 9, in risposta all&#39;attivit&agrave; JAK-STAT. Questo contribuisce al modello spaziale della risposta ecdisone. Brusco attenua ecdisone segnalazione mediante un&#39;interazione diretta con il dominio basic helix-loop-helix (bHLH) del del ricevitore ecdisone P160 Taiman (Tai). Presi insieme, questi risultati forniscono un meccanismo molecolare che sono integrati spunti spaziali e temporali.

Migrazione cellulare di bordo richiede l&#39;integrazione di segnali spaziali e temporali dalla proteina BTB brusco.

&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x3068;&#x52D5;&#x304D;&#x306E;&#x7CBE;&#x5DE7;&#x306A;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x304C;&#x6B63;&#x3057;&#x3044;&#x5834;&#x6240;&#x306B;&#x3001;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x30BF;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x767A;&#x751F;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x7A7A;&#x9593;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5F62;&#x6210;&#x3088;&#x308A;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x7814;&#x7A76;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x4E8C;&#x3064;&#x3092;&#x7D71;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x89E3;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x5375;&#x5DE3;&#x306E;&#x5883;&#x754C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x306F;&#x6BB5;&#x968E;9&#x3067;&#x7279;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6E21;&#x308A;&#x9CE5;&#x306E;&#x4EBA;&#x53E3;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;JAK-STAT&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x4E00;&#x65B9;&#x3001;&#x79FB;&#x884C;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x306E;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B8;&#x30BD;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x3001;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B8;&#x30BD;&#x30F3;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306B;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;9&#x5375;&#x5BA4;&#x3067;&#x3001;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B8;&#x30BD;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5883;&#x754C;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x524D;&#x5375;&#x80DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x6700;&#x9AD8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B8;&#x30BD;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3068;&#x30DC;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;&#x306E;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x7A81;&#x7136;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7A81;&#x7136;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;JAK-STAT&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;9&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x56FD;&#x5883;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x304B;&#x3089;&#x5931;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B8;&#x30BD;&#x30F3;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7A81;&#x7136;&#x306E;P160&#x30A8;&#x30AF;&#x30B8;&#x30BD;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B3;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;Taiman&#xFF08;TAI&#xFF09;&#x306E;&#x5869;&#x57FA;&#x6027;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; - &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; - &#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#xFF08;bHLH&#x578B;&#xFF09;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B8;&#x30BD;&#x30F3;&#x306F;&#x6E1B;&#x8870;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x3068;&#x3081;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x624B;&#x304C;&#x304B;&#x308A;&#x304C;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DC;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x304C;&#x6025;&#x6FC0;BTB&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;

&#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654; &#xBC0F; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC758; &#xC815;&#xAD50;&#xD55C; &#xD328;&#xD134; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC704;&#xCE58; &#xBC0F; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC1C;&#xB2EC; &#xD0C0;&#xC774;&#xBC0D;&#xC744; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xD328;&#xD134; &#xD615;&#xC131; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB35C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xACE0; &#xB450; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC774;&#xD574;. Drosophila &#xB09C;&#xC18C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD14C;&#xB450;&#xB9AC; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xB2E8;&#xACC4; 9&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xD788; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC758; &#xD0C0;&#xC774;&#xBC0D; &#xCCA0;&#xC0C8; &#xC778;&#xAD6C;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xD328;&#xD134;&#xD654; JAK &#xD569;&#xACC4; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; ecdysone&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ecdysone &#xC2E0;&#xD638; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC798; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0; &#xBE44;&#xB85D; &#xBB34;&#xB2AC; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC2A4;&#xD14C;&#xC774;&#xC9C0; 9&#xC5D0; &#xADF8; &#xC2E4;&#xC5D0;&#xC11C; ecdysone &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB192;&#xC740; &#xC55E;&#xCABD;&#xC5D0; &#xC5EC; &#xD3EC; &#xC140; &#xD14C;&#xB450;&#xB9AC; &#xC140;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; ecdysone &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xD14C;&#xB450;&#xB9AC; &#xC140; &#xC774;&#xB3D9;&#xC758; &#xC9C4;&#xC555;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC11;&#xC791;&#xC2A4;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC11;&#xC791;&#xC2A4;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; JAK &#xD569;&#xACC4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; 9 &#xB2E8;&#xACC4; &#xD14C;&#xB450;&#xB9AC; &#xC140; &#xD575; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC190;&#xC2E4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; ecdysone &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04; &#xD328;&#xD134;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xD241;&#xBA85;&#xC2A4;&#xB7EC;&#xC6B4; ecdysone P160 ecdysone &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; coactivator Taiman (&#xD0C0;&#xC774;)&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xD5EC;&#xB9AD;&#xC2A4;-&#xB8E8;&#xD504;-&#xD5EC;&#xB9AD;&#xC2A4; (bHLH) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC640; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC57D;&#xD654;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xACF5;&#xAC04; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB2E8;&#xC11C; &#xD1B5;&#xD569; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD14C;&#xB450;&#xB9AC; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC6E8;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xAC00; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB73B;&#xBC16;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xD569;&#xC744; &#xD574;&#xC57C;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Durante el desarrollo, elaborar patrones de diferenciaci&#xF3;n celular y el movimiento debe ocurrir en los lugares correctos y en los momentos adecuados. Momento del desarrollo ha sido menos estudiada que la formaci&#xF3;n de patr&#xF3;n espacial, y los mecanismos de integraci&#xF3;n de las dos son poco conocidos. Frontera migraci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas en el ovario de Drosophila se produce espec&#xED;ficamente en la etapa 9. Momento de la migraci&#xF3;n es regulada por la ecdisona hormona esteroide, mientras patr&#xF3;n espacial de la poblaci&#xF3;n migratoria requiere una actividad localizada de la v&#xED;a de JAK-STAT. Ecdisona se&#xF1;alizaci&#xF3;n se modela espacialmente as&#xED; como temporalmente, aunque los mecanismos no se comprenden bien. En la etapa de huevo 9 c&#xE1;maras, la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de la ecdisona es mayor en las c&#xE9;lulas del fol&#xED;culo anteriores, incluyendo las c&#xE9;lulas de la frontera. Nos identificamos el gen de la abrupta como un represor de la ecdisona de se&#xF1;alizaci&#xF3;n y la migraci&#xF3;n transfronteriza de las c&#xE9;lulas. Prote&#xED;na brusca se pierde normalmente a partir de n&#xFA;cleos de c&#xE9;lulas frontera durante la etapa 9, en respuesta a JAK-STAT actividad. Esto contribuye a la distribuci&#xF3;n espacial de la respuesta ecdisona. Abrupto aten&#xFA;a ecdisona de se&#xF1;alizaci&#xF3;n por medio de una interacci&#xF3;n directa con la base h&#xE9;lice-loop-h&#xE9;lice (bHLH) dominio del receptor de la ecdisona P160 Taiman coactivador (Tai). En conjunto, estos resultados proporcionan un mecanismo molecular por el cual las se&#xF1;ales espaciales y temporales se integran.

Frontera de c&#xE9;lulas de Migraci&#xF3;n requiere la integraci&#xF3;n de las se&#xF1;ales espaciales y temporales de la prote&#xED;na brusca BTB

&#x679C;&#x8747;&#x80DA;&#x80CE;&#x8131;&#x79BB;&#x539F;&#x4EE3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x57F9;&#x517B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x534F;&#x8BAE;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5176;&#x4ED6;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x672C;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x7684;&#x4F18;&#x52BF;&#x662F;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x4E3A;&#x5927;&#x578B;&#x8868;&#x73B0;&#x5F3A;&#x52B2;&#xFF0C;&#x9002;&#x5408;&#x7528;&#x7B5B;&#x9009;&#x4F18;&#x5316;&#x5B83;&#x3002;&#x66F4;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x6765;&#x5904;&#x7406;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x7684;&#x53CC;&#x7EDE; (ds) RNAs&#x3002;&#x9AD8;&#x6548; RNAi &#x5728;&#x679C;&#x8747;&#x539F;&#x4EE3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x901A;&#x8FC7;&#x7B80;&#x5355;&#x5730;&#x6C90;&#x6D74; dsRNA &#x542B;&#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E3A;&#x5728;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5982;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x808C;&#x8089;&#xFF0C;&#x7528; RNAi &#x6216;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5C4F;&#x5E55;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4F9D;&#x636E;&#x3002;&#x6574;&#x4E2A;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x5360;&#x5927;&#x7EA6; 14 d&#xFF0C;&#x4F46;&#x4ECE;&#x679C;&#x8747;&#x80DA;&#x80CE;&#x539F;&#x4EE3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5236;&#x5907;&#x53EA;&#x9700;&#x8981; 2-4 h&#x3002;

&#x679C;&#x8747;&#x539F;&#x4EE3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8131;&#x79BB;&#x539F;&#x80A0;&#x80DA;&#x548C; RNAi &#x7B5B;&#x9009;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#x6027;&#x3002;

We provide a detailed protocol for the mass culturing of primary cells dissociated from Drosophila embryos. The advantage of this protocol over others is that we have optimized it for a robust large-scale performance that is suitable for screening. More importantly, we further present conditions to treat these cells with double stranded (ds) RNAs for gene knockdown. Efficient RNAi in Drosophila primary cells is accomplished by simply bathing the cells in dsRNA-containing culture medium. This method provides the basis for functional genomic screens in differentiated cells, such as neurons and muscles, using RNAi or small molecules. The entire protocol takes approximately 14 d, whereas the preparation of primary cells from Drosophila embryos only requires 2-4 h.

Culture of Drosophila primary cells dissociated from gastrula embryos and their use in RNAi screening.

Nous fournissons un protocole d&#xE9;taill&#xE9; pour la culture en masse de cellules primaires dissoci&#xE9;es &#xE0; partir d&#x26;#39;embryons de drosophile. L&#x26;#39;avantage de ce protocole sur les autres est que nous l&#x26;#39;avons optimis&#xE9; pour une robustesse &#xE0; grande &#xE9;chelle de performance qui convient pour le d&#xE9;pistage. Plus important encore, nous autres les conditions actuelles pour traiter ces cellules avec double brin (ds) ARN pour inactivation g&#xE9;nique. Efficace ARNi dans les cellules de drosophile primaires se fait simplement en baignant les cellules dans un milieu de culture contenant de l&#x26;#39;ARNdb. Cette m&#xE9;thode fournit la base pour &#xE9;crans fonctionnels g&#xE9;nomiques dans les cellules diff&#xE9;renci&#xE9;es, telles que les neurones et les muscles, en utilisant l&#x26;#39;ARNi ou de petites mol&#xE9;cules. Le protocole prend toute environ 14 d, alors que la pr&#xE9;paration de cellules primaires &#xE0; partir d&#x26;#39;embryons de drosophile ne n&#xE9;cessite que 2-4 h.

Culture de cellules de drosophile primaires dissoci&#xE9;es &#xE0; partir d&#x26;#39;embryons gastrula et leur utilisation dans le d&#xE9;pistage du RNAi

Wir bieten ein ausf&uuml;hrliches Protokoll f&uuml;r die massenhaften Z&uuml;chtung von Prim&auml;rzellen dissoziiert von Drosophila Embryos. Der Vorteil dieses Protokolls gegen&uuml;ber anderen ist, dass wir es f&uuml;r eine robuste gro&szlig; angelegte Leistung optimiert haben, die f&uuml;r die Pr&uuml;fung geeignet ist. Noch wichtiger ist, f&ouml;rdern wir die vorliegende Bedingungen, diese Zellen mit doppelten angeschwemmt (ds) RNAs f&uuml;r gen-Knockdown zu behandeln. Effiziente RNAi in Drosophila-Prim&auml;rzellen wird erreicht, indem einfach die Zellen im sequenzspezifischen-haltigen Kulturmedium Baden. Diese Methode stellt die Grundlage f&uuml;r funktionale genomische Bildschirme in differenzierten Zellen wie Neuronen und Muskeln, RNAi oder kleine Molek&uuml;le. Das gesamte Protokoll nimmt etwa 14 d, w&auml;hrend die Vorbereitung der Prim&auml;rzellen von Drosophila Embryos nur 2-4 h erfordert.

Kultur von Drosophila-Prim&auml;rzellen distanzierte von Gastrula Embryonen und deren Verwendung im RNAi-Screening.

Forniamo un protocollo dettagliato per la massa per le colture di cellule primarie dissociate da embrioni della drosofila. Il vantaggio di questo protocollo sugli altri &egrave; che noi abbiamo ottimizzato per una robusta performance su larga scala che &egrave; adatta per lo screening. Ancora pi&ugrave; importante, abbiamo ulteriormente le condizioni presenti per il trattamento di queste cellule con RNA double-stranded (ds) per atterramento di gene. Efficiente RNAi in cellule primarie di Drosophila &egrave; compiuta da balneazione semplicemente le cellule nel terreno di coltura contenente dsRNA. Questo metodo fornisce la base per gli schermi di genomici funzionali nelle cellule differenziate, come i neuroni e muscoli, mediante RNAi o piccole molecole. L&#39;intero protocollo prende circa 14 d, considerando che la preparazione delle celle primarie da embrioni della drosofila richiede solo 2-4 h.

Cultura delle cellule primarie della drosofila dissociato dalla gastrula embrioni e loro impiego nello screening di RNAi.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x80DA;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x521D;&#x4EE3;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5927;&#x91CF;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4ED6;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30D1;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;&#xFF08;ds&#xFF09;RNA&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6CBB;&#x7642;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x672C;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x521D;&#x4EE3;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;RNAi&#x306F;&#x3001;dsRNA&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x306B;&#x542B;&#x6709;&#x57F9;&#x5730;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6D78;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;RNAi&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3084;&#x7B4B;&#x8089;&#x306A;&#x3069;&#x306B;&#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x80DA;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x521D;&#x4EE3;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8ABF;&#x88FD;&#x306F;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;2&#x301C;4&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x5168;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x7D04;14&#x65E5;&#x9593;&#x304B;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x539F;&#x8178;&#x80DA;&#x304B;&#x3089;&#x89E3;&#x96E2;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x3068;RNAi&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 1 &#xCC28; &#xC140; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xB9AC;&#xC758; &#xB300;&#xB7C9; &#xBC30;&#xC591;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xC138;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574;&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC758; &#xC7A5;&#xC810;&#xC740; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xB300;&#xADDC;&#xBAA8; &#xC131;&#xB2A5;&#xC744; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB354; &#xB354;&#xBE14; &#xC88C;&#xCD08; (ds) RNAs &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCD5C;&#xC800;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC140; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xC870;&#xAC74;. &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; 1 &#xCC28; &#xC140;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; Rnai&#xB294; &#xB2E8;&#xC21C;&#xD788; &#xBAA9;&#xC695; &#xBB38;&#xD654; &#xB9E4;&#xCCB4; dsRNA &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC140;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xD589; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAC8C;&#xB188; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBC0F; &#xADFC;&#xC721;, RNAi &#xB610;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC19;&#xC740; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; &#xC140;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; 1 &#xCC28; &#xC140;&#xC758; &#xC900;&#xBE44;&#xB9CC; 2-4 h&#xB97C; &#xC694;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xC804;&#xCCB4; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; 14 d &#xC57D;&#xC744; &#xAC78;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; 1 &#xCC28; &#xC140; gastrula &#xBC30;&#xC544;&#xC640; RNAi &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xB9AC;&#xC758; &#xBB38;&#xD654;.

Proporcionamos un protocolo detallado para el cultivo en masa de c&#xE9;lulas primarias disociadas a partir de embriones de Drosophila. La ventaja de este protocolo sobre otros es que lo hemos optimizado para un s&#xF3;lido a gran escala de rendimiento que es adecuado para la detecci&#xF3;n. M&#xE1;s importante a&#xFA;n, m&#xE1;s las condiciones actuales para el tratamiento de estas c&#xE9;lulas con doble cadena (ds) ARN para genes desmontables. Eficiente ARNi en c&#xE9;lulas de Drosophila primarios se logra simplemente impregnando las c&#xE9;lulas en medio de cultivo que contiene dsRNA. Este m&#xE9;todo proporciona la base para las pantallas funcionales gen&#xF3;micos en c&#xE9;lulas diferenciadas, como neuronas y los m&#xFA;sculos, utilizando RNAi o peque&#xF1;as mol&#xE9;culas. El protocolo completo dura aproximadamente 14 d, mientras que la preparaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas primarias a partir de embriones de Drosophila s&#xF3;lo requiere 2-4 h.

Cultivo de las c&#xE9;lulas de Drosophila Primaria disociadas de embriones g&#xE1;strula y su uso en la detecci&#xF3;n de RNAi

&#x808C;&#x539F;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5B9A;&#x578B;&#x7684;&#x6761;&#x7EB9;&#x662F;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x808C;&#x8089;&#x7EC4;&#x7EC7;&#xFF0C;&#x662F;&#x5176;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x6784;&#x6210;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x808C;&#x539F;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x662F;&#x4EBA;&#x4EEC;&#x719F;&#x77E5;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x548C;&#xFF0C;&#x5747;&#x53D7;&#x5230;&#x4FDD;&#x80B2;&#x52A8;&#x7269;&#x738B;&#x56FD;&#xFF0C;&#x5728;&#x901A;&#x5F80;&#x808C;&#x8282;&#x7CBE;&#x5BC6;&#x88C5;&#x914D;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5374;&#x4E0D;&#x751A;&#x4E86;&#x89E3;&#x7684;&#x808C;&#x539F;&#x7EA4;&#x7EF4;&#xFF0C;&#x57FA;&#x672C;&#x5355;&#x4F4D;&#x3002;&#x8981;&#x6DF1;&#x5165;&#x4E86;&#x89E3;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x5FC3;&#x808C;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x6765;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6709;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5730;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E3B;&#x808C;&#x8089;&#x7EC6;&#x80DE; RNAi &#x6216;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x5728;&#x7F3A;&#x5C11;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6216;&#x591A;&#x4E2A;&#x5FC3;&#x808C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x679C;&#x8747;&#x808C;&#x8089;&#x4E2D;&#x7684;&#x808C;&#x539F;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x8584;&#x4E0E;&#x539A;&#x4E1D;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5F7C;&#x6B64;&#x7684;&#x6761;&#x7EB9;&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#xFF0C;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x62C9;&#x94FE;/Zasp/&alpha;-actinin &#x7684;&#x5F20;&#x529B;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x60C5;&#x7ED3;&#x88AB;&#x6D89;&#x53CA;&#x7A33;&#x5B9A;&#x808C;&#x8282;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728;&#x5176;&#x521D;&#x6B65;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x51FA;&#x73B0;&#x7684;&#x8584;&#x4E0E;&#x539A;&#x539A;&#x7684;&#x957F;&#x4E1D;&#x6761;&#x7EB9;&#x524D;&#x53D1;&#x751F;&#x7684; interdigitation &#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x808C;&#x8282;&#x5F62;&#x6210;&#x53D1;&#x751F;&#x7531;&#x591A;&#x4E2A;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x987A;&#x5E8F;&#x5927;&#x4F1A;&#x534F;&#x8C03;&#x5927;&#x4F1A;&#x3002;

&#x808C;&#x8282;&#x5F62;&#x6210;&#x53D1;&#x751F;&#x7531;&#x591A;&#x4E2A;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x5927;&#x4F1A;&#x3002;

The stereotyped striation of myofibrils is a conserved feature of muscle organization that is critical to its function. Although most components that constitute the basic myofibrils are well-characterized biochemically and are conserved across the animal kingdom, the mechanisms leading to the precise assembly of sarcomeres, the basic units of myofibrils, are poorly understood. To gain insights into this process, we investigated the functional relationships of sarcomeric protein complexes. Specifically, we systematically analyzed, using either RNAi in primary muscle cells or available genetic mutations, the organization of myofibrils in Drosophila muscles that lack one or more sarcomeric proteins. Our study reveals that the thin and thick filaments are mutually dependent on each other for striation. Further, the tension sensor complex comprised of zipper/Zasp/Î±-actinin is involved in stabilizing the sarcomere but not in its initial formation. Finally, integrins appear essential for the interdigitation of thin and thick filaments that occurs prior to striation. Thus, sarcomere formation occurs by the coordinated assembly of multiple latent protein complexes, as opposed to sequential assembly.

Sarcomere formation occurs by the assembly of multiple latent protein complexes.

La striation st&#xE9;r&#xE9;otyp&#xE9;e des myofibrilles est une caract&#xE9;ristique conserv&#xE9;e de l&#x26;#39;organisation du muscle qui est essentiel &#xE0; sa fonction. Bien que la plupart des composants qui constituent les myofibrilles de base sont bien caract&#xE9;ris&#xE9;s biochimiquement et sont conserv&#xE9;s &#xE0; travers le r&#xE8;gne animal, les m&#xE9;canismes conduisant &#xE0; l&#x26;#39;assemblage pr&#xE9;cis de sarcom&#xE8;res, les unit&#xE9;s de base de myofibrilles, sont mal comprises. Afin de mieux comprendre dans ce processus, nous avons &#xE9;tudi&#xE9; les relations fonctionnelles des complexes prot&#xE9;iques sarcom&#xE9;riques. Plus pr&#xE9;cis&#xE9;ment, nous avons syst&#xE9;matiquement analys&#xE9;, en utilisant soit l&#x26;#39;ARNi dans les cellules musculaires primaires ou des mutations g&#xE9;n&#xE9;tiques disponibles, l&#x26;#39;organisation des myofibrilles dans les muscles chez la drosophile qui n&#x26;#39;ont pas une ou plusieurs prot&#xE9;ines du sarcom&#xE8;re. Notre &#xE9;tude r&#xE9;v&#xE8;le que les filaments minces et &#xE9;pais sont mutuellement d&#xE9;pendants les uns des autres pour les stries. En outre, l&#x26;#39;ensemble capteur de tension de compos&#xE9; de glissi&#xE8;re / ZASP / &#x3B1;-actinine est impliqu&#xE9; dans la stabilisation du sarcom&#xE8;re mais pas dans sa formation initiale. Enfin, les int&#xE9;grines semblent essentielles pour la interdigitation de filaments minces et &#xE9;pais qui se produit avant stries. Ainsi, la formation se produit sarcom&#xE8;re par l&#x26;#39;assembl&#xE9;e coordonn&#xE9;e de plusieurs complexes prot&#xE9;iques latentes, par opposition &#xE0; assemblage s&#xE9;quentiel.

Formation sarcom&#xE8;re se produit par l&#x26;#39;Assembl&#xE9;e des multiples complexes prot&#xE9;iques latentes

Die Stereotype Rasterung der Myofibrillen ist eine konservierte Funktion von Muskel-Organisation, die f&uuml;r ihre Funktion entscheidend ist. Obwohl die meisten Komponenten, die die grundlegenden Myofibrillen bilden gut charakterisierten biochemisch und sind &uuml;ber das Tierreich, die Mechanismen, die pr&auml;zise Montage von Sarkomeren, konserviert, sind die Grundeinheiten der Myofibrillen, schlecht verstanden. Um tiefere Einblicke in diesen Prozess, untersuchten wir die funktionalen Beziehungen der Sarkomerproteine Proteinkomplexe. Im einzelnen analysiert wir systematisch mit RNAi in prim&auml;ren Muskelzellen, oder zur Verf&uuml;gung genetische Mutationen, die Organisation der Myofibrillen in Drosophila-Muskeln, die ein oder mehrere Sarkomerproteine Proteine fehlen. Unsere Studie zeigt, dass die d&uuml;nnen und dicken Filamente f&uuml;r Rasterung gegenseitig aufeinander angewiesen sind. Dar&uuml;ber hinaus engagiert sich der Spannung Sensor Komplex bestehend aus Rei&szlig;verschluss/Zasp/&alpha;-Actinin das Sarkomer zu stabilisieren, aber nicht in seiner Grundausbildung. Schlie&szlig;lich scheinen die Integrine f&uuml;r die Interdigitation von d&uuml;nnen und dicken Filamenten, die vor der Rasterung auftritt. Daher tritt Sarkomer Bildung von der koordinierten Versammlung von mehreren latent Proteinkomplexen, im Gegensatz zum sequentiellen Montage.

Sarkomer Bildung erfolgt durch die Montage von mehreren latent Proteinkomplexe.

La schematizzazione stereotipata di miofibrille &egrave; una caratteristica conservata dell&#39;organizzazione di muscolo che &egrave; critica per la sua funzione. Anche se la maggior parte dei componenti che costituiscono la base miofibrille sono ben caratterizzati biochimicamente e sono conservati in tutto il Regno animale, i meccanismi che portano all&#39;assembly precisa dei sarcomeri, le unit&agrave; di base di miofibrille, sono mal capito. Per acquisire conoscenze in questo processo, abbiamo studiato le relazioni funzionali dei complessi della proteina sarcomero. In particolare, abbiamo sistematicamente analizzato, mediante RNAi in cellule muscolari primarie o mutazioni genetiche disponibili, l&#39;organizzazione di miofibrille nei muscoli della drosofila che la mancanza di uno o pi&ugrave; proteine sarcomero. Il nostro studio rivela che i filamenti sottili e spessi sono reciprocamente interdipendenti per la striatura. Ulteriormente, il complesso del sensore di tensione composto da cerniera/Zasp/&alpha;-actinina &egrave; coinvolta nella stabilizzazione del sarcomero ma non nella sua formazione iniziale. Infine, le integrine appaiono essenziali per la interdigitation di filamenti sottili e spessi che si verifica prima della striatura. Cos&igrave;, la formazione del sarcomero avviene dall&#39;Assemblea coordinata dei pi&ugrave; complessi della proteina latente, al contrario di montaggio sequenza.

Formazione del sarcomero avviene dall&#39;Assemblea dei pi&ugrave; complessi della proteina latente.

&#x7B4B;&#x539F;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x6A2A;&#x7D0B;&#x7D0B;&#x5207;&#x308A;&#x578B;&#x306E;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x7B4B;&#x8089;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x7B4B;&#x539F;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x738B;&#x56FD;&#x3092;&#x8D8A;&#x3048;&#x3066;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x3001;&#x7B4B;&#x539F;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x5358;&#x4F4D;&#x306E;&#x7CBE;&#x5BC6;&#x7D44;&#x7ACB;&#x306B;&#x81F3;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x89E3;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x306B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x7B4B;&#x8089;&#x7D30;&#x80DE;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;1&#x3064;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x306E;&#x7B4B;&#x539F;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x5185;&#x3067;&#x306E;RNAi&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x7D30;&#x3044;&#x3068;&#x592A;&#x3044;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30A4;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x304A;&#x4E92;&#x3044;&#x306B;&#x76F8;&#x4E92;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30B8;&#x30C3;&#x30D1;&#x30FC;/ Zasp /&#x3B1;-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30CB;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308B;&#x5F35;&#x529B;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30A4;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x524D;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x8584;&#x3044;&#x3068;&#x592A;&#x3044;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5D4C;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E3;&#x30EB;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x5F62;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5354;&#x8ABF;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x5F62;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x30BF;&#x30F3;&#x200B;&#x200B;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Myofibrils&#xC758; &#xC9C4;&#xBD80;&#xD55C; &#xC904;&#xBB34;&#xB2AC;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xADFC;&#xC721; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; myofibrils &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xAC00; &#xD654;&#xD559;&#xC801; well-characterized&#xB294; sarcomeres&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC870;&#xB9BD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC758; &#xC655;&#xAD6D;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xBCF4;&#xC874; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAE30;&#xBCF8; &#xB2E8;&#xC704;&#xC758; myofibrils, &#xC11C; &#xD22C;&#xB974; &#xAC8C; &#xC774;&#xD574;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC5BB;&#xC73C;&#xB824;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC; sarcomeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xC11D;, &#xC8FC;&#xC694; &#xADFC;&#xC721; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; RNAi &#xB610;&#xB294; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xC774;, &#xD558;&#xB098; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; sarcomeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD80;&#xC871; Drosophila &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0; myofibrils&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC1D;&#xD600; &#xC587;&#xACE0; &#xB450;&#xAEBC;&#xC6B4; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; &#xC904;&#xBB34;&#xB2AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC11C;&#xB85C; &#xC11C;&#xB85C;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xB294;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC548;&#xC815;&#xD654;&#xB97C; sarcomere &#xCD08;&#xAE30; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xC9C0;&#xD37C;/Zasp/&alpha;-actinin&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xAE34;&#xC7A5; &#xC13C;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xAD00;&#xB828;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, integrins &#xD45C;&#xC2DC; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC904;&#xBB34;&#xB2AC; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC587;&#xACE0; &#xB450;&#xAEBC;&#xC6B4; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xC758; interdigitation&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, sarcomere &#xD615;&#xC131; &#xC21C;&#xCC28;&#xC801;&#xC778; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC7A0;&#xC7AC; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xC870;&#xC728; &#xB41C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Sarcomere &#xD615;&#xC131; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC7A0;&#xC7AC; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xC870;&#xB9BD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La estriaci&#xF3;n estereotipada de las miofibrillas es una caracter&#xED;stica conservada de la organizaci&#xF3;n de los m&#xFA;sculos que es fundamental para su funci&#xF3;n. Aunque la mayor&#xED;a de los componentes que constituyen las miofibrillas b&#xE1;sicos son bien caracterizado bioqu&#xED;micamente y se conservan a trav&#xE9;s del reino animal, los mecanismos que conducen a la Asamblea precisa de sarc&#xF3;meros, las unidades b&#xE1;sicas de las miofibrillas, son poco conocidos. Para hacerse una idea de este proceso, hemos investigado las relaciones funcionales de los complejos de prote&#xED;nas del sarc&#xF3;mero. En concreto, hemos analizado sistem&#xE1;ticamente, utilizando RNAi en las c&#xE9;lulas musculares primarios o mutaciones gen&#xE9;ticas disponibles, la organizaci&#xF3;n de las miofibrillas en los m&#xFA;sculos de Drosophila que carecen de una o m&#xE1;s prote&#xED;nas del sarc&#xF3;mero. Nuestro estudio revela que los filamentos gruesos y delgados son mutuamente dependientes unos de otros para estr&#xED;as. Adem&#xE1;s, el complejo sensor de tensi&#xF3;n compuesta de cremallera / ZASP / &#x3B1;-actinina est&#xE1; implicado en la estabilizaci&#xF3;n del sarc&#xF3;mero pero no en su formaci&#xF3;n inicial. Por &#xFA;ltimo, las integrinas parecen esenciales para la interdigitaci&#xF3;n de los filamentos gruesos y delgados que se produce antes de la estr&#xED;a. As&#xED;, la formaci&#xF3;n sarc&#xF3;mero se produce por el conjunto coordinado de m&#xFA;ltiples complejos latentes de prote&#xED;nas, a diferencia de montaje secuencial.

Jianwu Bai

Department of Genetics

Harvard Medical School

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Jianwu Bai

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Genetics

Harvard Medical School

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Department of Genetics