Verbesserung der Zuverlässigkeit von Prostatatumor-Biobanken durch verbesserte Probenahmetechnik und histologische Charakterisierung

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt ein Verfahren zur Erleichterung der Entnahme von Proben aus radikalen Prostatektomieproben. Ziel ist es, Gewebeproben aus den Proben nach anatomisch-pathologischen Kriterien zu kartieren, zu charakterisieren und zu mikro-präparieren, bevor sie in einer Biobank gelagert werden.

Zusammenfassung

Die Gewinnung frischer und gut charakterisierter Tumorgewebeproben ist entscheidend für die Durchführung qualitativ hochwertiger "Omics"-Studien. Im Zusammenhang mit Prostatakrebs (PC) kann es jedoch aufgrund der Einzigartigkeit dieses Organs und der hohen Heterogenität, die mit diesem Tumor verbunden ist, eine besondere Herausforderung darstellen. Auf der anderen Seite ist es auch eine faszinierende Herausforderung, Proben vor ihrer Lagerung histopathologisch zu charakterisieren, ohne signifikante Gewebeveränderungen zu verursachen. In diesem Zusammenhang stellen wir eine neue Methode zur Gewinnung, Kartierung, Charakterisierung und Mikrodissektion von reseziertem Prostatagewebe anhand anatomopathologischer Kriterien vor.

Im Gegensatz zu zuvor veröffentlichten Protokollen reduziert diese Methode den Zeitaufwand für die histopathologische Analyse der Prostataprobe, ohne deren Struktur zu beeinträchtigen, was für die Beurteilung der chirurgischen Ränder entscheidend ist. Darüber hinaus ermöglicht es die Abgrenzung und Mikro-Makro-Dissektion von frischen Prostatagewebeproben, wobei der Schwerpunkt auf histologischen Tumorbereichen liegt, die durch pathologische Kriterien wie den Gleason-Score, Präcursorläsionen (hochgradige intraepitheliale Neoplasie der Prostata - PIN) und entzündliche Läsionen (Prostatitis) definiert sind. Diese Proben werden dann in einer Biobank für spätere Forschungsanalysen gelagert.

Einleitung

Prostatakrebs (PC) ist die 2^. häufigste Krebserkrankung bei Männern und die 5^. häufigste Todesursache weltweit¹. Die Behandlung und Prognose des Patienten hängt vom Staging und der Einstufung (Gleason-Score) des Tumors ab, was sich in den höheren 5-Jahres-Überlebensraten von lokalisierten und niedriggradigen Tumoren (Gleason-Grad 6) (99 %) im Vergleich zu hohen Gleason-Tumoren und metastasierten Tumoren (31 %) ^zeigt2.

Das PC-Lokalrezidiv und das Versagen der Behandlung wurden mit der charakteristischen hohen genetischen Intratumorheterogenität dieses Tumortyps

Protokoll

Diese Methode wurde in Zusammenarbeit mit verschiedenen klinischen Diensten (Urologie, Pathologie und Biobank des Krankenhauses La Fe) entwickelt. Die Studie wurde in Übereinstimmung mit institutionellen, nationalen und internationalen Richtlinien für das Wohlergehen des Menschen durchgeführt und von der Ethikkommission für biomedizinische Forschung am Instituto de Investigación Sanitaria Hospital Universitario y Politécnico La Fe (Valencia, Spanien) genehmigt. Alle Proben wurden in der Biobank des Krankenhauses La Fe (PT13/0010/0026) gelagert. Das Gesamtverfahren ist in Abbildung 1 dargestellt.

Diskussion

In jeder Forschungsstudie ist die Gewinnung von Qualitätsproben eine wesentliche Voraussetzung, um systematische Verzerrungen zu reduzieren und zuverlässige Ergebnisse zu erhalten²². Daher muss die Kontrolle präanalytischer Variablen wie die Temperatur, bei der Proben verarbeitet und gelagert werden, die von der Probenentnahme bis zur Lagerung verstrichene Zeit, die Verwendung sterilisierter Materialien oder die Auswirkungen, die der Zusatz von Konservierungsmitteln oder anderen Zusatzstoffen a.......

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cadiere forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471049. 18 uses.
Conventional slides	Knittel Glass	2021	Ground/ Frosted end
Cryostat microtome	Thermo Fisher Scientific	---	Criostato CryoStar NX50
Cryotubes	Greiner Bio-One GmbH	Ref.: 122280.	CRYO S. PP, with screw cap, sterile.
Da Vinci surgical system	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	XI model
Dissection instruments	Bayer	---	Two tweezers and a surgical blade
DPX Eukitt	Medizin- und Labortechnik GmbH	6.00.01.0001.06.01.01
Eosin	Agilent	157252
Fenestrated bipolar forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471205. 14 lives.
Force bipolar	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471405. 12 uses.
Freezers	Thermo Scientific		MODEL 907. -80 ºC
Hematoxylin	Agilent	157251
Inmunohistochemistry Slides	Agilent-Dako	K802021-2
Large needle driver	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471006. 15 uses.
Maryland bipolar forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471172. 14 uses.
Microscope	Olympus	---	Olympus cx40
Microtome blades	PFM Medical	a35
Monopolar curved scissors	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 470179. 10 uses.
OCT compound	NEG-50	LOT.117340
PlusSpeed S Single-use Biopsy Device with beveled tip	Peter Pflugbeil GmbH	PSS-1825-S
ProGasp forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471093. 18 uses.
Sample holder Disc	Davidson Cryo Chuck. BradleyProducts		30 mm
Tissue ink	Pelikan	2021	Ink 4001 brilliant black (301168)
Xylol	Quimipur	Ref. 169