Einfrierverletzung im Kaumuskel der Maus zur Etablierung eines orofazialen Muskelfibrosemodells

Zusammenfassung

Das Ziel dieses Protokolls ist es, ein orofaziales Muskelfibrosemodell zu etablieren. Der Vergleich der Histologie zwischen Mäusen, Kaumuskel und Tibialis-Vordermuskel nach Erfrierverletzung bestätigte eine Kaumuskelfibrose. Dieses Modell wird die weitere Untersuchung des Mechanismus erleichtern, der der orofazialen Muskelfibrose zugrunde liegt.

Zusammenfassung

Der orofaziale Muskel stellt eine Untergruppe des Skelettmuskelgewebes dar, die einen ausgeprägten evolutionären Verlauf und Entwicklungsursprung aufweist. Im Gegensatz zu den aus Somiten gewonnenen Gliedmaßenmuskeln stammen die orofazialen Muskeln aus den Kiemenbögen, wobei ausschließlich die kraniale Neuralleiste beisteuert. Eine aktuelle Studie hat gezeigt, dass die Regeneration auch in der orofazialen Muskelgruppe unterschiedlich ist. Der zugrunde liegende Regulierungsmechanismus muss jedoch noch aufgedeckt werden. Aktuelle Modelle zur Regeneration der Skelettmuskulatur konzentrieren sich hauptsächlich auf die Gliedmaßen- und Rumpfmuskulatur. In diesem Protokoll wurde Trockeneis verwendet, um eine Gefrierverletzung im Kaumuskel der Maus und im vorderen Tibialis-Muskel zu induzieren, um ein orofaziales Muskelfibrosemodell zu erstellen. Die zeitliche Dynamik von Muskelsatellitenzellen und fibro-adipogenen Vorläuferzellen war zwischen den beiden Muskeln unterschiedlich, was zu einer gestörten Regeneration von Myofasern und einer übermäßigen Ablagerung der extrazellulären Matrix führte. Mit Hilfe dieses Modells könnte eine tiefergehende Untersuchung der Muskelregeneration im orofazialen Bereich durchgeführt werden, um Therapieansätze für Patienten mit orofazialen Erkrankungen zu entwickeln.

Einleitung

Die orofaziale Muskulatur ist entscheidend für tägliche physiologische Aktivitäten wie Kauen, Sprechen, Atmen und Gesichtsausdruck¹. Bei angeborenen orofazialen Deformitäten weisen diese Muskeln jedoch atrophische und fibrotische Veränderungen auf, die zu einer Beeinträchtigung der Körpergesundheit und der sozialen Kognition führen². Die rekonstruktive Gesichtschirurgie ist nach wie vor die erste Wahl, aber bis zu 30-70 % der postoperativen Patienten leiden immer noch an Muskelschwund und Muskelfunktionsstörungen ^3,4 Das Versagen der orofazialen Muskelregeneratio....

Protokoll

Alle tierexperimentellen Verfahren in dieser Studie wurden von der Ethikkommission der West China School of Stomatology der Universität Sichuan überprüft und genehmigt (WCHSIRB-D-2020-114). Männliche C57BL/6-Mäuse (5 Wochen alt) wurden in einer feuchtigkeitskontrollierten (53 ± 2%) und temperaturkontrollierten (23 ± 2 °C) Anlage aufgezogen und befanden sich in einem 12-stündigen Hell-Dunkel-Zyklus. In der Materialtabelle finden Sie Einzelheiten zu allen Materialien, Reagenzien und Instrumenten, die in diesem Protokoll verwendet werden.

1. Frostverletzung

1. Anästhesie: Betäuben Sie die Mäuse mit mit ....

Diskussion

Es gibt eine Vielzahl von Verletzungsmodellen zur Untersuchung der Regeneration der Skelettmuskulatur, einschließlich der Verwendung physikalischer, chemischer und chirurgischer Reize 10,11,12,13,14,15,16. Kardiotoxin und Bariumchlorid sind die beiden am häufigsten verwendeten Chemikalien,.......

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 mL syringe	Shifeng Medical Apparatus and Instrument (Chengdu, Sichuan, China)	1-ml syringe	/
Acetone	Chron Chemicals	Aceton	/
Adhesion microscope slides	Citotest Scientific	188105	/
Animal depilatory	Phygene Scientific	PH1877	/
BSA (bovine serum albumin)	Solarbio Life Sciences	A8010	/
DAPI	Solarbio Life Sciences	C0065	/
Donkey anti-goat Alexa Fluor 488	Abcam	ab150129	1:200
donkey serum	Solarbio Life Sciences	SL050	/
Dry Ice	Sinrro Technology (Chengdu, Sichuan, China)	rice-shaped dry ice	/
IFKine Red Donkey anti-rabbit	Abbkine Scientific Company	A24421	1:200
Insulation barrels (big)	Thermos	D600	/
Insulation barrels (small)	Polar Ware	250B	/
Isoflurane	RWD Life Technology Company (Shenzhen, Guangdong, China)	R510-22	/
Isopentane	MACKLIN	M813375	/
Laminin	Sigma-Aldrich	L9393	1:1000
Liquid nitrogen	Sinrro Technology (Chengdu, Sichuan, China)	/	/
M.O.M kit	Vector Laboratories	BMK-2202
Mice	Dashuo Biological Technology Company(Chengdu, Sichuan, China)	5 weeks old	/
mounting medium	Solarbio Life Sciences	S2100	/
Nertral balsam	Solarbio Life Sciences	G8590	/
Pax7	Developmental Studies Hybridoma Bank	Pax7	1:5
Pdgfra	R&D systems	AF1062	1:40
Sirus Red Staining Kit	Solarbio Life Sciences	G1472	/
Surgical instruments (forceps, scissors, needle holder, scalpel, and suture)	Zhuoyue Medical Instrument (Suqian, Jiangsu, China)	/	/
Tissue-tek OCT	Sakura	4583	/
Triton	Shanghai Scigrace Biotech	ABIO-Biofroxx-0006A	/
Zoletil	Virbac	Zoletil 50	/