Z-Scores zur Beurteilung der ovariellen Reserve bei jungen Patientinnen, die sich einer Fertilitätserhaltung unterziehen

Zusammenfassung

Das vorliegende Protokoll beschreibt ein Verfahren zur Beurteilung der ovariellen Reserve bei Patientinnen unter 25 Jahren, die eine Fertilitätserhaltung durch Kryokonservierung des Ovarialgewebes benötigen. Diese Methode umfasst: (1) die histologische Beurteilung der ovariellen Reserve in kortikalen Proben, (2) den Vergleich mit einem Referenzdatensatz und (3) die Berechnung von Z-Scores.

Zusammenfassung

Frauen werden mit einem nicht erneuerbaren Pool von Eierstockfollikeln geboren, der als Eierstockreserve bezeichnet wird. Diese Reserve besteht aus primordialen Follikeln in den Eierstöcken und kann von vielen Faktoren beeinflusst werden, wie z. B. genetischen und endokrinen Störungen, medizinischen Eingriffen und endokrinen Disruptoren. Die Erhaltung der Fruchtbarkeit wird empfohlen, wenn gonadotoxische Behandlungen erforderlich sind. Die bevorzugten Optionen für Frauen sind die Kryokonservierung von Eizellen und Embryonen. Bei sehr jungen, sexuell unreifen Patientinnen ist die Kryokonservierung des Eierstockgewebes jedoch die einzige Option. Die Kenntnis der Follikeldichte von kryokonservierten Gewebeproben ist für die Kinderwunschberatung für junge Patientinnen unerlässlich. Dieses Protokoll zeigt die Verwendung von Z-Scores für die kortikale Follikeldichte als Instrument zur Bewertung der Qualität des Eierstockgewebes bei Mädchen und jungen Frauen im Alter von 25 Jahren und darunter, die sich einer Fertilitätserhaltung unterziehen. Die Follikeldichte in Patientenproben wird mit altersnormalisierten Referenzstandards verglichen, die von Hassan et al. entwickelt wurden, um mögliche Abweichungen vom Standard abzuschätzen. Die Follikeldichte wird durch histologische Quantifizierung gemessen. Zu diesem Zweck wird ein kleines Stück kortikales Gewebe der Eierstöcke (~2 mm x 2 mm x 2 mm) entweder in Bouin- oder Formaldehydlösung fixiert, in Paraffin eingebettet, bei einer Dicke von 4 μm geschnitten, mit Hämatoxylin und Eosin gefärbt und mit einem Objektträgerscanner digitalisiert. Die in der Hirnrinde vorhandenen Follikelstadien reichen von den primordialen bis zu den primären Follikeln. Der kortikale Bereich war in histologischen Schnitten 1 mm vom Oberflächenepithel entfernt. Die Follikeldichte wird unter Verwendung einer modifizierten Formel von Schmidt et al. berechnet, und der Z-Score wird anhand des Referenzmittelwerts und der Standardabweichung bestimmt. Der Z-Wert gibt an, wie stark der gemessene Wert vom Referenzmittel abweicht, und bestimmt die reduzierte (<-1,7 Z-Wert) ovarielle Reserve. Mit dieser Methode können Follikeldichten als wertvolles Maß für die ovarielle Reserve für junge Patientinnen verwendet werden, die eine Fertilitätserhaltung benötigen.

Einleitung

Der Eierstock ist ein dynamisches, endokrinologisch aktives Organ, das aus einer äußeren Rinde und einer inneren Medulla besteht. Heterogen in den Eierstöcken verteilt sind Follikel, die die gonadale Eizelle enthalten, die von stromalen Granulosazellen umgeben ist¹. Alle Follikel werden bereits während der Entwicklung des Fötus gebildet und erreichen ihren Höhepunkt in der 20. Schwangerschaftswoche, gefolgt von einem exponentiellen Rückgang. Bei der Geburt verbleiben 1-2 Millionen Primordialfollikel in der Hirnrinde, und nur wenige hunderttausend Follikel überleben bis zur Pubertät². Der....

Protokoll

Alle durchgeführten Verfahren wurden von der schwedischen Ethikprüfungsbehörde (Sveafertil-Patienten, Dnr: 2019-03802) und von der Ethikkommission des Universitätskrankenhauses Helsinki (HCH-Patienten, Dnr 340/13/03/03/2015) genehmigt. Schriftliche und mündliche Informationen über die Studie wurden von den Forschungsschwestern zur Verfügung gestellt, und es wurde eine Einverständniserklärung gemäß der Erklärung von Helsinki eingeholt. Für Patienten unter 18 Jahren wurde die Einverständniserklärung der Erziehungsberechtigten eingeholt. Alle Proben wurden pseudonymisiert und gemäß der europäischen Datenschutz-Grundverordnung (DSGVO) ver....

Diskussion

Frauen werden mit einem endlichen Pool an Eizellen geboren, der nicht aufgefüllt werden kann. Die ovarielle Reserve ist ein wichtiger Faktor für das Fortpflanzungspotenzial einer Frau. In diesem Artikel wird eine Methode zur histologischen Quantifizierung der Follikeldichte und deren Vergleich mit Referenzstandards anhand von Z-Scores der ovariellen kortikalen Follikeldichten bei jungen Patientinnen und Frauen bis zum Alter von 25 Jahren vorgestellt.

In dies.......

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x Dulbecco's Phosphate Buffered Saline	Thermo Fisher	14190144
1x Phosphate Buffered Saline w/ CaCl2, MgCl2, 1 g/L D-glucose, 36 mg/L pyruvate	Thermo Fisher	14287-080
37% Hydrochloric acid	Sigma-Aldrich	1.09057.1000
70% ethanol	Histolabs	01370.01L
95% ethanol	Fisher scientific	10572143
Absolute ethanol	Histolabs	01399.01L
Bouin's solution	Sigma-Aldrich	HT10132-1L
Eosin Y Free acid	Sigma-Aldrich	E4009-5G
Formaldehyde	Thermo Fisher	28908
Haematoxylin solution according to Delafield	Sigma-Aldrich	03971-250ML
ImageJ
Microsoft Excel
Microtome
Pertex mounting solution	Histolabs	00840-05
Propofol	Baxter Holding B.V.	N01AX10	ATC-code provided instead of catalog number
QuPath			https://qupath.github.io/
Rocuronium bromide	B. Braun Melsungen AG	M03AC09	ATC-code provided instead of catalog number
Scott's tap water substitute concentrate	Sigma-Aldrich	S5134-6x100ml
Sevoflurane	Baxter Medical AB	N01AB08	ATC-code provided instead of catalog number
Slide scanner
Sufentanil	Hameln Pharma gmbh	N01AH03	ATC-code provided instead of catalog number
Sugammadex	Baxter Holding B.V.	V03AB35	ATC-code provided instead of catalog number
SuperFrost plus white	Histolabs	06400
SuperFrost Plus White microscope slides	Histolabs	06400
Xylene	Saveen Werner	131769.1611