Um den Eingriff im ordnungsgemäß eingerichteten Operationssaal zu beginnen, legen Sie das anästhesierte Schwein in die Brustbein-Liegeposition und stellen Sie sicher, dass alle angeschlossenen Leitungen und Schläuche gesichert sind. Entfernen Sie alle Resthaare von der rasierten Stelle, die für die Wunde vorgesehen ist, mit einer Haarentfernungscreme. Markieren Sie nach der Sterilisation der Wundstellen den Bereich mit einer sterilen Verbrennungsschablone und einem chirurgischen Hautmarker.
Stellen Sie den Brenner ein, indem Sie den Sollwert an der Steuereinheit auf 150 Grad Celsius einstellen. Der untere Sollwert liegt bei 145 Grad Celsius und der höchste Sollwert bei 155 Grad Celsius. Mit einem beheizten Edelstahlblock, der an das Brenngerät angeschlossen ist, erzeugen Sie eine Brandwunde in voller Dicke, indem Sie die Blöcke 60 Sekunden lang auf die Haut legen.
Machen Sie ein digitales Foto vom gesamten Rücken des Schweins, einschließlich eines Plakats mit dem Zeitpunkt und dem Datum der Identifizierung des Schweins. Nehmen Sie dann separat Bilder für jede Wunde auf, zusammen mit einem Lineal und einem Schild mit der Schweine-ID, der Wund-ID und dem Zeitpunkt. Um die mikrovaskuläre Perfusion der Wunde in Echtzeit mit Laser-Speckle-Imaging oder LSI zu beurteilen, bilden Sie alle Wunden in einer einzigen Aufnahme mit einem LASCA-Blutperfusions-Imager ab.
Um den transepidermalen Wasserverlust oder TEWL zu messen, legen Sie eine saubere Sondenabdeckung über die TEWL-Sondenspitze, die mit dem Wundgewebe in Kontakt kommt. Messen Sie jede Wunde fünfmal, zuerst in der Mitte, dann in jeder Ecke. Exportieren Sie dann alle Messwerte in eine Tabelle.
Führen Sie ein harmonisches Ultraschall- oder HUSD-Mapping durch, indem Sie die Wunde mit einer Ultraschallsonde von der Mittellinie oder der Wirbelsäule aus scannen, beginnend mit normaler Haut und zur seitlichen Seite des Schweins über die Wunden bewegen, bis die normale Haut wieder erreicht ist. Befolgen Sie das Scanmuster für jede Wunde sowohl im B-Modus als auch im Gewebeelastographie-Modus. Ändern Sie die Anmerkung, nachdem jede Wunde sowohl im B-Modus als auch im Elasto-Modus abgebildet wurde, d. h. zwei Aufzeichnungen pro Wunde.
Ist die gesamte Bildgebung abgeschlossen, decken Sie die Brandwunden einzeln mit transparenten Filmverbänden oder dem Testverband ab. Legen Sie dann einen größeren transparenten Folienverband über die gesamte Wundfläche. Tragen Sie eine zweite Schicht Rollgaze locker um den gesamten Rumpf des Schweins auf, um die aus den Wunden austretende Flüssigkeit aufzusaugen.
Decken Sie die Gaze locker mit einer Schicht flexibler elastischer Binde ab. Decken Sie den elastischen Verband mit einer letzten Schicht aus vier Zoll dickem Gummiband ab. Nach dem Absetzen des Narkosegases nach Beendigung des Verbandes lassen Sie das Schwein mindestens fünf Minuten lang mit Sauerstoff versorgen.
Um die Brandwunden am dritten Tag nach der Verbrennung zu impfen, verteilen Sie das Inokulum mit einer Pipette auf der Oberfläche der freiliegenden Wunden und verteilen Sie es gleichmäßig mit einem Einwegspreizer. Um die Gewebebiopsien für die Analyse nach der Bildgebung zu entnehmen, infiltrieren Sie den Bereich um die Wunde mit 0,5 % Bupivacain. Schneiden Sie mit einem Einwegskalpell mit einer Klinge der Größe 10 einen 3-4 Millimeter breiten Streifen von einem Rand der Wunde zum anderen, wobei Sie auf beiden Seiten kleine Ränder normaler Haut beibehalten.
Schneiden Sie eine 6-Millimeter-Stanzbiopsie aus der Wunde, entweder vom Wundbett oder vom Wundrand aus. Erreichen Sie die Hämostase nach der Entnahme der Proben, indem Sie die Wunde vorsichtig mit einer sterilen Gaze drücken. Decken Sie die Wunde mit einem nicht haftenden Verband ab und verbinden Sie sie wie zuvor gezeigt.
Die Analyse der Biopsieprobe mittels Hämatoxylin- und Eosin-Färbung zeigte eine Verzerrung und Nekrose aller histologischen Hautschichten. Der etablierte Biofilm wurde am siebten Tag nach der Inokulation durch die koloniebildende Einheit weiter validiert. Scannen Sie die elektronenmikroskopische Bildgebung und Immunfluoreszenzfärbung.
Die Brandwunden zeigten am siebten Tag nach der Inokulation eine dicke biogene Membran auf der Wundoberfläche, was die Infektion und die Etablierung eines Biofilms bestätigte. Die Wundfläche begann am 14. Tag zu schrumpfen, aber bis zum 56. Tag wurde eine unvollständige Heilung auf etwa 25 % der ursprünglichen Wundgröße beobachtet, was auf eine Wundchronizität hindeutet. Die Wundchronizität und die gestörte Wundheilung wurden durch den TEWL bestätigt, der zu allen gemessenen Zeitpunkten einen hohen transepidermalen Wasserverlust zeigte.
Dies wurde auch durch die Unterdrückung der Tight-Junctional-Proteine ZO-1 und 2 und die beeinträchtigte Wiederherstellung der Hautbarrierefunktion bestätigt.
