Transplantation von Leber-Sphäroiden in die vordere Kammer des Mausauges für bildgebende Untersuchungen

Sammeln Sie zunächst alle erforderlichen Ressourcen und reinigen Sie die Hamilton-Spritze, den Schlauch und die Kanüle mit 70 % Ethanol, gefolgt von Kochsalzlösung. Nachdem Sie sie mit Kochsalzlösung gefüllt haben, kleben Sie die Hamilton-Spritze horizontal auf die Bank. Bereiten Sie als nächstes das Anästhesie-Isofluran-Gerät vor und erwärmen Sie das Heizkissen auf 37 Grad Celsius.

Decken Sie die Spitzen der Pinzette, die an dem festen Kreuzgelenk befestigt ist, mit einem Stück Polyethylenschlauch ab, um eine Schlaufe zu bilden. Übertragen Sie die Lebersphäroide mit einer 200-Mikroliter-Pipette und -Spitze von der 96-Well-Platte in eine 35-Millimeter-Zellsuspensionsschale mit Erhaltungsmedium. Nachdem Sie die Maus betäubt haben, übertragen Sie sie auf das Heizkissen und fixieren Sie den Kopf mit den Schrauben.

Schieben Sie dann das Auge vorsichtig aus der Augenhöhle und befestigen Sie es mit der Pinzette. Um ein Austrocknen zu verhindern, geben Sie einen Tropfen Kochsalzlösung auf beide Augen. Aspirieren Sie mit der Hamilton-Spritze die Lebersphäroide unter dem Stereoskop.

Legen Sie die Kanüle waagerecht auf eine saubere Oberfläche. Stechen Sie mit einer 23-Gauge-Nadel vorsichtig in die Hornhaut und schieben Sie die Nadel zur Seite, um den Schnitt zu erweitern. Trocknen Sie das austretende Kammerwasser mit einem Taschentuch und geben Sie Kochsalztropfen auf das Auge, um es feucht zu halten.

Positionieren Sie die Kanüle senkrecht, damit die Lebersphäroide zur Spitze hingezogen werden, und führen Sie sie dann vorsichtig in das Loch ein. Mit der Hamilton-Spritze die Lebersteroide langsam in das ACE ausscheiden. Stoßen Sie mit der Spitze der Kanüle vorsichtig von außen in die Hornhaut, um die Lebersphäroide um die Pupille herum zu positionieren.

Nach 5 bis 10 Minuten lösen Sie das Auge von der Pinzette. Um die Hornhaut zu schmieren und zu heilen, tragen Sie Vaseline Augensalbe auf das operierte Auge auf. Verabreichen Sie das Analgetikum vor dem Aufwecken der Maus subkutan, um postoperative Beschwerden zu vermeiden.