Verwenden Sie zunächst eine multi- oder biparametrische MRT, um den Tumor und seine Position in der Prostata vor der Operation zu lokalisieren. Bereiten Sie den Patienten als Nächstes auf den Bauchzugang, die Insufflation und die Platzierung eines Chemoports vor. Stellen Sie das Pneumoperitoneum auf 12 Millimeter ein.
Machen Sie einen Schnitt am Peritoneum, um die Blase zu lösen und den perirektalen Raum zu präparieren. Öffnen Sie nun die Beckenfaszie auf beiden Seiten und führen Sie eine vollständige Dissektion der vorderen und lateralen Aspekte der Prostata und der Blase durch. Öffnen Sie den Blasenhals und identifizieren Sie die proximale Harnröhre.
Durchtrennung der proximalen Harnröhre, um Zugang zu den hinteren Aspekten der Prostata und der Blase zu erhalten. Als nächstes präparieren Sie die Samenbläschen und den Rektumraum, gefolgt von den lateralen Aspekten der Prostata. Präparieren Sie die Spitze.
Durchtrennen Sie dann die distale Harnröhre. Führen Sie dann die vesiko-urethrale Anastomose durch. Ziehen Sie die Prostata heraus und nähen Sie dann den Schnitt zu.
Legen Sie die frisch gesammelte Prostata in ein trockenes Gefäß. Um die Prostata für die Probenentnahme zu bearbeiten, wählen Sie zunächst die Zielzonen basierend auf den MRT-Informationen aus. Entnehmen Sie mit einer automatischen Einwegnadel zylindrische Proben aus den ausgewählten Bereichen.
Identifizieren Sie dann die äußere Zone des Zylinders und klemmen Sie ihn mit einer Gewebezange fest. Legen Sie den Zylinder auf einen Schieber und markieren Sie die äußere Zone mit Tuchtinte. Legen Sie die gesammelten Zylinder horizontal auf eine mit Kryostat-Einbettmedium gefüllte Probenhalterscheibe und geben Sie sie zum Schneiden auf eine Mikrotom-Kühlplatte.
Befestigen Sie anschließend die Probenhalterscheibe am Probenfutter. Verwenden Sie die OCT-Verbindung, um die Gewebeprobe vor dem Schnitt einzubetten. Verwenden Sie ein Kryostat-Mikrotom, um die Probe bei 25 Grad Celsius zu schneiden.
Sammeln Sie dünne zylinderförmige Gewebeschnitte auf behandelten Objektträgern. Fixieren Sie die Objektträger in 96%igem Ethanol und hydratisieren Sie sie dann in destilliertem Wasser. Färben Sie die Abschnitte eine Minute lang mit Harris-Hämatoxylin ein.
Behandeln Sie nun die Objektträger mit 30%Ammoniumhydroxid, um das Hämatoxylin blau zu färben. Färben Sie dann die gewaschenen Objektträger 30 Sekunden lang mit Eosin. Dann dehydrieren Sie die Objektträger mit zunehmenden Titrationen von Alkohol, gefolgt von einer Reinigung mit 100%igem Xylol.
Montieren Sie die Objektträger mit GPX und legen Sie ein Deckglas auf das gefärbte Gewebe. Verwenden Sie ein Lichtmikroskop, um die gefärbte Probe zu analysieren, Bereiche mit dem Karzinom zu unterscheiden und den Gleason-Score des Tumors zu bestimmen. Markieren Sie präzise Tumorzonen auf den Objektträgern.
Anschließend präparieren Sie mit der chirurgischen Klinge die auf dem Objektträger markierten Probenbereiche innerhalb der OCT-Scheibe. Wenn das Einbettungsgewebe aufzutauen beginnt, heben Sie das Gewebe mit einer Pinzette an und legen Sie es in korrekt beschriftete Kryoröhrchen. Diese Technik wurde verwendet, um Tumormaterial von 61% der untersuchten Fälle zu gewinnen.
Von den 16 Prostataregionen, bei denen die Tumorakquisition nicht erfolgreich war, hatten 10 eine Tumorlast von weniger als 10 % und keine überstieg 20 %Eine ROC-Kurvenanalyse zeigte eine Fläche unter der Kurve von 0,843, was darauf hindeutet, dass diese Methode zufriedenstellende Ergebnisse bei der Tumorakquisition liefern kann. Die histopathologische Korrelation der radikalen Prostatektomieprobe mit der aufbereiteten Zylinderbiopsie wurde mittels Hämatoxylin- und Eosinfärbung durchgeführt. Entlang des Zylinders wurden verschiedene histologische Muster gefunden, wie z. B. das Gleason-Muster 3, das kleine, gut geformte Drüsen zeigte, die von Krebszellen ausgekleidet waren.
Unregelmäßig geformte Drüsen mit vergrößerten atypischen Zellen wurden in den Schnitten des Gleason-Musters 4 beobachtet. Die Proben mit intraepithelialen Neoplasien der Prostata zeigten dicht gedrängte Zellen in den Gangräumen.
