Füllen Sie zunächst eine Ein-Milliliter-Spritze mit 500 Mikrolitern kontinuierlicher Phase. Befestigen Sie den PTFE-Mikroschlauch an einer 27-Gauge-Nadel mit einem Durchmesser von 0,75 Zoll. Montieren Sie die Baugruppe auf die Spritze und anschließend auf die Spritzenpumpe.
Stanzen Sie dann mit einem 0,75-Millimeter-Biopsiestanzer ein Loch in die Mitte eines PDMS-Ausschnitts. Ziehen Sie etwa drei Zentimeter PTFE-Schlauch durch das Loch im Ausschnitt und schieben Sie die Baugruppe in die Oberseite einer 200-Mikroliter-Pipettenspitze. Versiegeln Sie den Stecker mit UV-härtendem Kleber auf der Pipette und befestigen Sie die andere Seite des Schlauchs an einer 23-Gauge-Nadel mit 1,25 Zoll.
Füllen Sie anschließend zwei Ein-Milliliter-Spritzen mit 500 Mikrolitern leichtem Mineralöl. Befestigen Sie zwei 23-Gauge-Nadeln mit den maßgefertigten Aufsätzen und montieren Sie sie auf die Spritzenpumpe. Aspirieren Sie mit der Steuerungssoftware für die Spritzenpumpe funktionalisierte Nanopartikel und Zelllösung in die Pipettenspitze der wässrigen Phasen.
Nach der Reinigung der vorbereiteten Beobachtungskammer klemmen Sie die Kammer in den bedruckten Kammerhalter, der mit zwei Neodym-Magneten in einem Winkel von 30 Grad ausgestattet ist. Öffnen Sie nun beide Öffnungen und stecken Sie ein Papiertuch in die obere Öffnung, um die überschüssige äußere Phase während des Befüllens aufzunehmen. Verbinden Sie die kontinuierliche Phase mit dem oberen Eingang des mikrofluidischen Chips.
Spülen Sie dann den Chip etwa 30 Sekunden lang mit der kontinuierlichen Phase bei einer Durchflussrate von 1800 Mikrolitern pro Stunde. Befestigen Sie die Pipettenspitzen der wässrigen Lösungen an den beiden mittleren Einlässen des Chips. Beginnen Sie den Fluss der wässrigen Lösung mit 200 Mikrolitern pro Stunde für jede Lösung.
Sobald die Flüssigkeit am Auslass erscheint, beginnen Sie mit dem Phasenfluss des fluorierten Öls bei 800 Mikrolitern pro Stunde. Warten Sie, bis eine stabile Tröpfchenproduktion hergestellt ist, die durch eine homogene graue, glänzende Lösung am Auslass angezeigt wird. Schließen Sie dann den PTFE-Mikroschlauch an den Auslassanschluss an, um die Tröpfchen aufzufangen.
Richten Sie sie mit dem Aderendhülsenmodul einer fingerfesten einteiligen Armatur in eine Beobachtungskammer. Sobald die Kammer gefüllt ist, stoppen Sie den Durchfluss und verschließen Sie die Anschlüsse mit Anschlussstopfen mit fingerfestem Druck. Spülen Sie den Chip nach der Tröpfchenproduktion mit fluoriertem Öl, gefolgt von Stickstoff, um die restliche Flüssigkeit auszublasen.
Montieren Sie den Kammerhalter mit einem Well-Platten-Formattisch auf das Mikroskop. Schalten Sie dann das Mikroskop mit dem 10-fach-Objektiv auf den Hellfeldkanal. Konzentriere dich auf die immobilisierten Tröpfchen im Hellfeld und bewege dich in die Mitte der Kammer.
Aktivieren Sie dann das automatische Fokussiersystem. Passen Sie die Messebene auf dem Hellfeldkanal so an, dass die Tröpfchenkanten als scharfe schwarze Kreise erscheinen, die leicht von der Ölphase und dem Hintergrund zu unterscheiden sind. Gehen Sie durch jeden der Fluoreszenzkanäle und stellen Sie die optimale Messebene für sie ein.
Konzentrieren Sie sich bei Verlagerungsmessungen auf das Nanopartikelaggregat in den Kanälen FITC, TRITC und Cyanin5.
