Nehmen Sie zunächst die Kulturplatte mit adulten hermaphroditischen weiblichen Würmern aus dem Inkubator. Nach der Synchronisierung von him-5 Würmern waschen Sie die Würmer fünfmal mit M9-Puffer. Übertragen Sie die einen Tag alten erwachsenen Männchen von der ausgesäten Platte in ein Röhrchen mit M9-Puffer.
Legen Sie die Würmer auf eine nicht besäte NGM-Platte, um verbleibende Bakterien zu beseitigen und Interferenzen durch Lebensmittel während des Assays zu verhindern. Bereiten Sie eine Chemoattraction-Assay-Platte mit 1,5 % Schnecke, 25 Millimolar Natriumchlorid, 1,5 Millimolar Tris Base und 3,5 Millimolar Tris Hydrochlorid vor. Erhitzen Sie die Schnecke in der Chemoattraktionslösung in der Mikrowelle, bis sie sich vollständig aufgelöst hat.
Verteilen Sie nach dem Abkühlen mit einer Pipette die Chemoattraktionsschneckenlösung gleichmäßig in Petrischale. Lassen Sie die Deckel an einem sauberen Ort offen, damit die Oberfläche der Schnecke leicht trocknen kann. Sobald die Oberfläche richtig getrocknet ist, schließen Sie die Deckel.
Um den Chemoattraktionstest durchzuführen, markieren Sie drei verschiedene Flecken auf dem Deckel und der Unterseite der Petrischale. Tragen Sie zwei Mikroliter eines molaren Natriumazids auf jede Versuchs- und Kontrollstelle auf der Platte auf. Pflücke 20 gesunde und frei bewegliche männliche Würmer mit einem Wurmsammler.
Lassen Sie den Wurm unter einem Präpariermikroskop am Startpunkt los. Geben Sie schnell zwei Mikroliter M9-Puffer auf die Kontrollstelle und zwei Mikroliter Sexualpheromon auf die experimentelle Stelle auf dem Deckel. Schließen Sie vorsichtig den Deckel und stellen Sie die Platte an einen ruhigen, temperaturstabilen Ort.
Nach 30 Minuten bewerten Sie den Assay, indem Sie die Anzahl der Würmer an jeder Stelle zählen. Für eine bessere Beurteilung der Chemotaxis zeichnen Sie die Trajektorien der Würmer mit einer Kamera auf. Der Chemotaxis-Index für Him-5-Männer lag durchweg über 0,5, was auf eine starke Anziehungskraft auf die Sexualpheromonquelle hindeutet, während der Chemotaxis-Index für SRD-1-Männer bei etwa Null lag.
Erfolgreiche Chemoattraktions-Assays zeigten, dass sich him-5 Männchen im Laufe der Zeit näher an die Pheromonquelle heranbewegten, mit farbcodierten Trajektorien, die Zeit, Entfernung, Geschwindigkeit, Geradlinigkeit und Richtungskorrektheit anzeigten.
