Wir möchten für die Unterstützung danken, die Verwaltungspersonal CIBIO (Universität Trient) und CNR Neuroscience Institute. Giovanni Provenzano wird von einem Post-Doc-Stipendium Fondazione Veronesi (Mailand, Italien) unterstützt. Diese Arbeit wurde durch das italienische Ministerium für Universität und Forschung (PRIN 2008 Grant # 200894SYW2_002 und PRIN 2010-2011 Stipendium # 2010N8PBAA_002 zu YB), Universität Trento (CIBIO Gründungszuschuss zu YB) und Telethon Foundation (Grant # GGP13034 finanziert YB).

Alle Experimente wurden in Übereinstimmung mit der EG-Richtlinie 2010/63 / EU durchgeführt und wurden von der italienischen Gesundheitsministerium genehmigt. 1. Tierpflege, Wohnen und Behandlung <ol><li> Führen Sie alle Versuchsprotokolle unter Verwendung von Mäusen in Übereinstimmung mit den Richtlinien der jeweiligen institutionellen Tierpflege. </li><li> Pflegen Tiere in einem 12 Stunden Licht / Dunkel-Zyklus mit Futter und Wasser ad libitum zur Verfügung. </li><li> Haus die Mäuse in Gruppen von 2-4, in Standardgröße Polycarbonat Mauskäfige mit Sägemehl und Einstreu werden wöchentlich gewechselt. </li><li> Verwenden Alter und Geschlecht abgestimmte Mäuse, weil die Anfälligkeit für Krankheiten können mit Alter und Geschlecht in verschiedenen Mausmodellen für neurologische Entwicklungsstörungen variieren. </li><li> Wählen einer geeigneten Anzahl von Tieren, statistische Signifikanz (ein Minimum von 10 Mäusen pro Genotyp für Verhaltensstudie und 4 Mäuse pro Genotyp für die Immunhistochemie Experiment) zu erreichen. </li></ol> 2. Morris Water Maze (MWM) <ol><li> Verwenden Sie ein Rundbecken (Durchmesser 100 cm, Höhe 50 cm). <ol><li> Platzieren Sie einige visuelle Hinweise auf den Raumteiler um den Behälter. </li><li> Legen Sie eine 10 cm Plattformdurchmesser in den Behälter an einer festen Stelle in der Mitte von einer der vier gedachte Quadranten. Halten Sie die versteckte Plattform im selben Quadranten für alle Studien in allen Trainingseinheiten. </li><li> Füllen Sie den Pool mit Leitungswasser, bis die Plattform 1 cm über der Wasseroberfläche. Äquilibrieren Wassertemperatur sollte möglichst nahe bei 22 ° C sein; Dieser Schritt kann mehrere Stunden dauern. In heißem Wasser, um den Zeitaufwand für die Wassertemperatur ins Gleichgewicht zu verkürzen. </li><li> In ca. 1,5-2 l weiß, ungiftige Farbe das Wasser undurchsichtig zu machen. </li></ol></li><li> Spuraufnahmeverfahren <ol><li> Einrichten MWM-Tracking-System mit Standard-CCD-Kameras und Video-Boards. Wählen Sie ein Video-Tracking-System zur Überwachung und Analyse mehrerer Variablen wie Weglänge, escape Latenz und Zeit in jedem Quadranten verbringen. </li><li> Teilen Sie die Arena in vier Quadranten und passen Erkennungseinstellungen, um eine optimale Kontrast zwischen Tieren und Hintergrund für die Live-Tracking zu gewährleisten. </li><li> Geben Sie den Plattformbereich. </li><li> Stellen Sie die maximale Probezeit als 60 Sek. </li></ol></li><li> MWM Testing <ol><li> Vor Verhalten Tests erlauben Mäusen eine Anpassungszeit von 20-25 min in einem Gebiet, wo sie nicht sehen können den Pool oder den räumlichen Informationen. </li><li> Trainieren Sie jede Maus für 9 Tage (zwei aufeinander folgenden Prüfungen am Tag, mit 20-30 min Abstand zwischen ihnen). </li><li> Schalten Sie den Computer und die Kamera ein und starten Sie das Video-Tracking-System-Software. </li><li> Nehmen Sie die Maus am Schwanz und legen Sie sie in das Wasser, mit dem Kopf wies auf die Seite des Pools, ausgehend von einer der vier Startpositionen (Nord, Süd, Ost, West). Für jede Maus, sollte die Startposition und in verschiedenen Studien pseudorandomized sein. </li><li> Lassen Sie die Maus schwimmen und die Suche nach dem Plattform für maximal 60 sec. Sobald das Tier die Plattform erreicht, lassen Sie es auf der Plattform 20 Sekunden bleiben. </li><li> Wenn der Maus konnte die Plattform innerhalb dieser Zeit finden, sanft in die Maus, um die Plattform, wobei sie an den Schwanz und lassen Sie ihn dort für 20 Sekunden zu bleiben. Sobald das Tier alle zwei Studien abgeschlossen, trocknen Sie es mit einem Tuch und legen Sie sie zurück in Käfig. </li><li> Jeder Tag der Ausbildungszeit, wiederholen Sie den Vorgang (Schritte 2.3.4-2.3.6). </li><li> Führen Sie den Sondentest am 9. Tag nach der letzten Trainingspfad. </li><li> Entfernen Sie die Plattform aus dem Pool. </li><li> Lassen Sie die Maus schwimmen und die Suche nach der Plattform für maximal 60 sec. </li><li> In regelmäßigen Abständen überprüfen Sie die Wassertemperatur, so dass sollte es die gleiche (22 ° C), und reinigen Sie den Pool. </li></ol></li></ol> 3. Herstellung von Abschnitten aus perfundierten Tiere <ol><li> Opfern die Mäuse am Ende der MWM. Vier Mäuse pro Genotyp muss vor betäubt zu werden euthanization nach lokalen und internationalen Richtlinien. </li><li> Perfusion des Tieres transkardial (cut das Recht auriclewith scheren Blutung zu ermöglichen und die Einführung einer Flügelkanüle in den linken Ventrikel zu perfundieren) mit phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) für 4-5 min, gefolgt von 4% Paraformaldehyd in PBS für 10-15 22 min. </li><li> Sezieren und post-fix die Gehirne in 4% Paraformaldehyd bei 4 ° C für mindestens 12 Stunden. </li><li> Legen Sie die Gehirne in 50 ml Polystyrol konische Röhrchen mit 15 ml 0,02% Natriumazid in 0,1 M PBS und bei 4 ° C bis zum Schneiden erforderlich. </li><li> Schneiden Sie und entfernen Sie das Kleinhirn vor Vibratom Schneiden. </li><li> Kleben Sie das Gehirn aufrecht mit der Schnittstelle, mit Sekundenkleber, auf die Halteplatte der Vibratom. </li><li> Schneiden Sie das Gehirn in 20-40 um dicke Koronalschnitte, in serieller Reihenfolge in den dorsalen Hippocampus, auf entsprechende Vibratom. </li><li> Sammeln Vibratom Scheiben mit einem Pinsel und in ein 24 Multi-Well-Platte mit 1 ml 0,1 M PBS für jeden gut. </li><li> Shop Sektionen für kurzfristige in PBS oder langfristig in 0,02% Natriumazid in PBS bei 4 ° C (Gewebe könnte für bis zu einem Jahr) eingesetzt werden. </li></ol> 4. Immunhistochemie <ol><li> Transfer 3-5 dorsalen Hippocampus-Abschnitte für jede Maus in 24-Multiwell-Platte, die 500 ul 0,1 M PBS für jede Vertiefung. </li><li> Waschen Sie die in jeder enthaltenen Abschnitte auch mit 500 ul 0,1 M PBS (5 min, 3-mal mit leichtem Schütteln). </li><li> Stillen endogenen Peroxidase-Aktivität durch Inkubieren Abschnitte in 1% H 2 O 2 in PBS für 20 min unter leichtem Schütteln. </li><li> Auswaschbereiche in 0,1 M PBS unter leichtem Bewegen (3 x 5 min). </li><li> Permeabilisierung Gewebe: inkubieren Abschnitte für 5 min in 0,2% Triton X-100 in PBS. </li><li> Während der obigen Schritte (4.4; 4.5), stellen genug Blockierungspuffer (10% Ziegenserum und 0,1% Triton-X100 in PBS) für das gesamte Experiment (number der Abschnitte x 100 ul x 3 Stufen). </li><li> Anmerkung: Die Verwendung Serum von derselben Spezies, in denen die sekundären Ab (an Biotin konjugiert) gemacht wurde. </li><li> Verhindert die unspezifische Bindung des Antikörpers durch Inkubieren Abschnitte in Blocking-Puffer (100 &amp; mgr; l / Schnitt) für 1 Stunde bei Raumtemperatur (RT) unter leichtem Schütteln. </li><li> Inkubieren Abschnitte in primären Ab (pERK) in Blockierungspuffer über Nacht bei 4 ° C unter leichtem Rühren verdünnt. </li><li> Auswaschbereiche in 0,1 M PBS unter leichtem Bewegen (3 x 5 min). </li><li> Inkubieren mit dem sekundären Ab mit Biotin (1: 250) konjugiert in Blockierungspuffer verdünnt, für 1 h bei RT unter leichtem Rühren (das gleiche wie in Schritt 4.6 verwendet wird). </li><li> Vorbereitung ABC Reagenz gleichzeitig, weil Avidin und Biotin sind mindestens 30 Minuten bei Raumtemperatur bis komplex. </li><li> Bereiten Sie das erforderliche Volumen des ABC-Reagenz gemäß dem Protokoll des Herstellers. </li><li> Auswaschbereiche in 0,1 M PBS unter leichtem Bewegen (3 x 5 min). </li><li> INCUBATe Schnitte für 45 min bei RT mit ABC-Reagenz. </li><li> Auswaschbereiche in 0,1 M PBS unter leichtem Bewegen (3 x 5 min). </li><li> Bereiten DAB Arbeitslösung muss jeder Schritt, der DAB im Abzug durchgeführt werden, wie DAB ist karzinogen und teratogen. </li><li> Übertragen DAB-Lösung auf eine neue Platte mit Kunststofftransferpipette. </li><li> Platz Abschnitte in der Platte, die DAB-Arbeitslösung und langsam Wirbelplatte mit der Hand, um maximale Exposition gegenüber Abschnitten zu ermöglichen. </li><li> Überwachen DAB Reaktion auf Mikroskop, bis eine ausreichende Signal entwickelt (2-5 min). </li><li> Die Reaktion bei der gewünschten Farbintensität, die durch das Waschen des Gewebes in 0,1 M PBS (3 x 5 min). </li><li> Bleichmittel verwenden, um alle verbleibenden DAB Substratlösung im Abzug über Nacht ausschalten und entsorgen Sie es nach den Laborrichtlinien. </li><li> Berg Abschnitte auf Gelatine beschichtete Objektträger durch schwimmende in PBS. Dann trocknen Sie sie bei Raumtemperatur mindestens 3-4 Stunden. </li><li> Die Abschnitte der Reihe nach zu entwässern in 50%, 70%, 95%und 100% Ethanol für jede 2 min, und klar, in 100% Xylol für 5 min. </li><li> Deckglas mit Eindeckmedium und lassen in Abzug über Nacht trocknen. </li></ol> 5. Cell Count <ol><li> Zählen pERK-positive Zellen sollte drei vor fünf Abschnitte auf dem Niveau des dorsalen Hippocampus pro Tier analysiert werden. </li><li> Erwerben Sie mehrere Hellfeld-Bilder von jedem Abschnitt bei 200-facher Vergrößerung unter Verwendung eines geeigneten Mikroskop und dann montieren sie mit einer Bildbearbeitungssoftware. </li><li> Führen Zellzahlen auf tiff-umgewandelt Mosaikbilder mit dem ImageJ freie Software. </li><li> Zählen pERK-gefärbten Zellen im Hilus und Körnerzellschicht über zwei bis drei Kästen von 100 × 100 &amp; mgr; m jeder Zählung. </li><li> Zelldichten, wenn die Anzahl markierter Zellen pro Zählung Fenster (100 x 100 um) ausgedrückt werden. </li><li> Statistische Analysen zu signifikanten Unterschied zwischen den Genotypen zu bewerten. Dies kann mit Student-t erreicht werdenTest oder ANOVA, gefolgt von entsprechenden Post-hoc-Test unter Verwendung von kommerziellen Software. Legen statistische Signifikanzniveau bei p &lt;0,05. </li></ol>

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	<li>Castren, E., Elgersma, Y., Maffei, L., Hagerman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+neurodevelopmental+disorders+in+adulthood.">Treatment of neurodevelopmental disorders in adulthood.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 32, 14074-14079 (2012).</li><li>Ehninger, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+learning+deficits+in+a+Tsc2+/-+mouse+model+of+tuberous+sclerosis.">Reversal of learning deficits in a Tsc2+/- mouse model of tuberous sclerosis.</a> Nature medicine. 14, 843-848 (2008).</li><li>West, A. E., Greenberg, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity-regulated+gene+transcription+in+synapse+development+and+cognitive+function.">Neuronal activity-regulated gene transcription in synapse development and cognitive function.</a> Cold Spring Harbor perspectives in biology. 3, (2011).</li><li>Goorden, S. M., van Woerden, G. M., van der Weerd, L., Cheadle, J. P., Elgersma, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+deficits+in+Tsc1+/-+mice+in+the+absence+of+cerebral+lesions+and+seizures.">Cognitive deficits in Tsc1+/- mice in the absence of cerebral lesions and seizures.</a> Annals of neurology. 62, 648-655 (2007).</li><li>Cui, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofibromin+regulation+of+ERK+signaling+modulates+GABA+release+and+learning.">Neurofibromin regulation of ERK signaling modulates GABA release and learning.</a> Cell. 135, 549-560 (2008).</li><li>Brielmaier, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autism-relevant+social+abnormalities+and+cognitive+deficits+in+engrailed-2+knockout+mice.">Autism-relevant social abnormalities and cognitive deficits in engrailed-2 knockout mice.</a> PloS one. 7, e40914 (2012).</li><li>Provenzano, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampal+dysregulation+of+neurofibromin-dependent+pathways+is+associated+with+impaired+spatial+learning+in+engrailed+2+knock-out+mice.">Hippocampal dysregulation of neurofibromin-dependent pathways is associated with impaired spatial learning in engrailed 2 knock-out mice.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 34, 13281-13288 (2014).</li><li>Morgan, J. I., Curran, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulus-transcription+coupling+in+neurons:+role+of+cellular+immediate-early+genes.">Stimulus-transcription coupling in neurons: role of cellular immediate-early genes.</a> Trends in neurosciences. 12, 459-462 (1989).</li><li>Steward, O., Schuman, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+synthesis+at+synaptic+sites+on+dendrites.">Protein synthesis at synaptic sites on dendrites.</a> Annual review of neuroscience. 24, 299-325 (2001).</li><li>Gutmann, D. H., Parada, L. F., Silva, A. J., Ratner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofibromatosis+type+1:+modeling+CNS+dysfunction.">Neurofibromatosis type 1: modeling CNS dysfunction.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 32, 14087-14093 (2012).</li><li>Costa, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+for+the+learning+deficits+in+a+mouse+model+of+neurofibromatosis+type+1.">Mechanism for the learning deficits in a mouse model of neurofibromatosis type 1.</a> Nature. 415, 526-530 (2002).</li><li>Silva, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+for+the+learning+and+memory+deficits+associated+with+neurofibromatosis+type.">A mouse model for the learning and memory deficits associated with neurofibromatosis type.</a> I. Nature. 15, 281-284 (1997).</li><li>Morris, R. G., Garrud, P., Rawlins, J. N., O'Keefe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Place+navigation+impaired+in+rats+with+hippocampal+lesions.">Place navigation impaired in rats with hippocampal lesions.</a> Nature. 297, 681-683 (1982).</li><li>Praag, H., Kempermann, G., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Running+increases+cell+proliferation+and+neurogenesis+in+the+adult+mouse+dentate+gyrus.">Running increases cell proliferation and neurogenesis in the adult mouse dentate gyrus.</a> Nature. 2, 266-270 (1999).</li><li>Adams, J. P., Sweatt, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+psychology:+roles+for+the+ERK+MAP+kinase+cascade+in+memory.">Molecular psychology: roles for the ERK MAP kinase cascade in memory.</a> Annual review of pharmacology and toxicology. 42, 135-163 (2002).</li><li>Di Cristo, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+of+ERK+activation+for+visual+cortical+plasticity.">Requirement of ERK activation for visual cortical plasticity.</a> Science. 292, 2337-2340 (2001).</li><li>Satoh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERK2+contributes+to+the+control+of+social+behaviors+in+mice.">ERK2 contributes to the control of social behaviors in mice.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 31, 11953-11967 (2011).</li><li>Sgado, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+GABAergic+neurons+in+the+hippocampus+and+cerebral+cortex+of+Engrailed-2+null+mutant+mice:+implications+for+autism+spectrum+disorders.">Loss of GABAergic neurons in the hippocampus and cerebral cortex of Engrailed-2 null mutant mice: implications for autism spectrum disorders.</a> Experimental neurology. 247, 496-505 (2013).</li><li>Sgado, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+profiling+in+engrailed-2+mutant+mice+reveals+common+molecular+pathways+associated+with+autism+spectrum+disorders.">Transcriptome profiling in engrailed-2 mutant mice reveals common molecular pathways associated with autism spectrum disorders.</a> Molecular autism. 4, 51 (2013).</li><li>Cheh, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=En2+knockout+mice+display+neurobehavioral+and+neurochemical+alterations+relevant+to+autism+spectrum+disorder.">En2 knockout mice display neurobehavioral and neurochemical alterations relevant to autism spectrum disorder.</a> Brain research. 1116, 166-176 (2006).</li><li>Dawson, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+broader+phenotype+of+autism:+genetic,+brain,+and+behavioral+perspectives.">Defining the broader phenotype of autism: genetic, brain, and behavioral perspectives.</a> Development and psychopathology. 14, 581-611 (2002).</li><li>Gage, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> J Vis Exp. (65), (2012).</li><li>Maei, H. R., Zaslavsky, K., Teixeira, C. M., Frankland, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+the+Most+Sensitive+Measure+of+Water+Maze+Probe+Test+Performance.">What is the Most Sensitive Measure of Water Maze Probe Test Performance.</a> Frontiers in integrative neuroscience. 3, 4 (2009).</li><li>Guzowski, J. F., Setlow, B., Wagner, E. K., McGaugh, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+gene+expression+in+the+rat+hippocampus+after+spatial+learning:+a+comparison+of+the+immediate-early+genes+Arc,+c-fos+and+zif268.">Experience-dependent gene expression in the rat hippocampus after spatial learning: a comparison of the immediate-early genes Arc, c-fos and zif268.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 21, 5089-5098 (2001).</li></ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren

Hier stellen wir ein Protokoll für die Immunhistochemie pERK enthüllt neuronale Aktivierung folgt MWM in En2 - / - Mäuse, ein Mausmodell für neurologische Entwicklungsstörungen. / - - Erniedrigte pERK wurden in der CA3 Teilgebiet der En2 erkannt Mutanten im Vergleich zu WT. Anders, als in CA3 Unterfeld, eine allgemeine Erhöhung der pERK-positiven Neuronen beobachtet stattdessen sowohl hilus erkannt und GCL von En2 - / - Mäusen im Vergleich zu WT. Eine mögliche Erklärung für die...

Neurologische Entwicklungsstörungen umfassen eine große und heterogene Gruppe von Erkrankungen wie das Down-Syndrom, fragile X-Syndrom (FXS), Rett-Syndrom, Neurofibromatose, tuberöser Sklerose und ASD, in dem die Entwicklung und Reifung des zentralen Nervensystems (ZNS) wird früh während gestört der pränatalen Phase 1. Diese Entwicklungsfunktionsstörungen des Gehirns können tiefe, lebenslange Auswirkungen auf die Motorik, Sprache, Lernen und Gedächtnis-Prozess führen. Eine Vielzahl von genetischen und Umweltfaktoren bei der Pathogenese von Störungen der neurologischen Entwicklung während der letzten Jahre 2,3 gebracht. Auch wenn die molekularen Mechanismen, die klinische Phänotyp zugrunde liegenden unbekannt bleiben, haben die oben genannten Erkenntnisse die Entwicklung von mehreren Mausmodellen dieser Erkrankungen erlaubt. Lern- und Gedächtnisdefizite in einer Reihe dieser Mausmodelle wie Tsc1 +/-, Tsc2 +/- identifiziert worden ist,Nf1 +/- und En2 ​​- / - Mäusen 2,4-7. Eine wichtige Herausforderung auf dem Gebiet der Neuroentwicklungsstörungen ist die Identifizierung von zellulären und molekularen Prozesse zugrunde liegenden Speicher und Lernstörungen. Ausgewählte Signalwege während der Lern- oder Speicher aktiviert die Transkription bestimmter Gene zu induzieren und schließlich zur de novo Proteinsynthese führen. Immediate-Early-Gene (IEGs) Aktivierung und Protein-abhängige synaptische Modifikationen schnell in Gehirnneuronen als Reaktion auf neuronale Aktivität und Verhaltenstraining 8,9 induziert. Defizite in der Signalwege mit neurofibromin haben mit dem Lernen in neurologische Entwicklungsstörungen beeinträchtigt Verbindung gebracht. Neurofibromin ist das Produkt aus dem NF1-Gen, dessen Mutation Neurofibromatose Typ 1, einem komplexen genetischen Syndrom mit Tumoren des Nervensystems, Verhaltens- und Motor verzögert und kognitive disakeiten 10. Mäuse heterozygot für Nf1 Löschung zu hemmenden Nervenzellen beschränkt Defizite in der Frühphase der Langzeit-Potenzierung (LTP) sowie kompromittiert räumlichen Lernen in MWM 5,11,12. Interessanterweise Nf1 Mangel in diesem Mausmodell führt zu einer Überaktivierung des Ras-Signalisierung in hemmenden Inter während des Lernens, was zu erhöhten ERK-Phosphorylierung und schließlich in einer abnormalen Steigerung der GABA-Freisetzung aus diesen Neuronen 5. Aufbauend auf diesen Erkenntnissen, die Visualisierung der neuronalen Aktivität nach Verhaltens Aufgaben stellt eine Möglichkeit, bestimmte Schaltungen in der Entwicklung des Nervenerkrankungen beteiligt rekonstruieren. Die hier beschriebene Immunhistochemie Protokoll zielt darauf ab, zu bewerten und zu quantifizieren Hippocampus ERK Phosphorylierung folgenden MWM in einem ASD Mausmodell mit kognitiven Defiziten. MWM wird häufig zur hippocampalen abhängigen räumlichen Lernen und Gedächtnis bei Nagetieren 13,14 untersuchen </sup&gt;. Wir entscheiden uns, ERK-Phosphorylierung als Molekular Auslesen aufgabenabhängige hippocampalen Lernen verwenden, da ERK wurde gezeigt, dass eine wesentliche Rolle bei Lern- und Gedächtnisbildung 15 haben. Darüber hinaus ist die ERK Weg für erfahrungsabhängige Plastizität im Entwicklungs Sehrinde 16 notwendig. Schließlich Mäusen fehlt einer der beiden ERK Isoformen (ERK2) im ZNS zeigen deutliche Anomalien in kognitiven, emotionalen und sozialen Verhaltensweisen, 17, die anzeigt, dass ERK-Signal könnte eine entscheidende Rolle in der Pathogenese der Neuroentwicklungsstörungen wie ASD zu spielen. Wir verwendeten Engrailed 2 knockout (En2 - / -) Mäusen als Modell für neurologische Entwicklungsstörungen. En2 - / - Mäuse zeigen anatomische und Verhaltens &quot;ASD-like&quot; Funktionen, einschließlich Verlust von Vorderhirn Inter 18, verminderte Expression von ASD-verwandte Gene 19, verringert Geselligkeit und Beeinträchtigung der kognitiven Flexibilität 6,7,20. Spatial learning und Gedächtnisstörungen, wie sie in der MWM erkannt, sind in En2 besonders robust - / - Mäusen 6,7 und möglicherweise relevant für die ASD-Patienten in 21 beobachteten kognitiven Beeinträchtigungen werden. Darüber hinaus haben wir gezeigt, dass eine beeinträchtigte räumliche Lernen in MWM mit reduzierten neurofibromin Expression und erhöhter pERK Spiegel im Hilus En2 - / - erwachsenen Mäusen 7. Hier präsentieren wir die detaillierte Protokoll für die immunhistochemischen Charakterisierung pERK folgenden MWM in diesem ASD-Mausmodell.

<table><tbody><tr><td>EthoVision XT 8</td><td>Noldus Information Technology</td><td></td><td>This software platform is not a requirement &amp;ndash; there are many other behavioral softwares on the market.</td></tr><tr><td>Tempera Paint</td><td>Giotto - Fila Group Company</td><td></td><td>White and liquid, non toxic. Used to prepare opaque water in the Morris water maze.</td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica</td><td>VT1200</td><td>Equivalent models from other companies can be used.</td></tr><tr><td>24 well plate</td><td>Sigma</td><td>CLS3524</td><td></td></tr><tr><td>100% ethanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A406-20</td><td>Used to make ethanol gradient for dehydration prior to slide mounting.</td></tr><tr><td>Xylene</td><td>VWR</td><td>66004-950</td><td>Toxic - to be used under hood. Change xylene every month depending on use.&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Sodium Azide</td><td>Sigma</td><td>&amp;nbsp;S2002</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma</td><td>P3813-10PAK</td><td></td></tr><tr><td>ddH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma&amp;nbsp;</td><td>T-8787</td><td></td></tr><tr><td>Hydrogen Peroxide</td><td>Sigma</td><td>H1009-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Normal Goat Serum</td><td>Abcam</td><td>G9023-10ML</td><td></td></tr><tr><td>ABC kit Vectastain&amp;nbsp;</td><td>Vector Laboratories</td><td>PK-6100</td><td>Add in a volume of 5 ml of PBS 2 drops of reagent A, mix and then add 2 drops of reagent B and mix.</td></tr><tr><td>DAB peroxidase substrate</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-4100</td><td>Add in a volume of 5 ml ddH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O: 2 drops of buffer stock solution and mix; 4 drops of DAB and mix; 2 drops of H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; and mix.</td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td>pERK antibody</td><td>Cell Signaling Technologies&amp;nbsp;</td><td>4370</td><td>Dilution 1:500</td></tr><tr><td>Biotinylated Goat Anti-Rabbit IgG Antibody</td><td>Vector Laboratories</td><td>BA-1000&amp;nbsp;</td><td>Dilution 1:250</td></tr><tr><td>SuperFrost Slides&amp;nbsp;</td><td>Carl Roth</td><td>1879</td><td></td></tr><tr><td>Coverslips</td><td>Fisher</td><td>12-548-B</td><td></td></tr><tr><td>DPX</td><td>Sigma</td><td>317616</td><td>Mounting medium for slides. Equivalent mounting medium can be used.</td></tr><tr><td>Microscope</td><td>&amp;nbsp;Zeiss&amp;nbsp;</td><td>Axio Imager.M2</td><td>Equivalent microscope can be used.</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop</td><td>Adobe Systems, San Jose, CA</td><td></td><td>To assemble images.</td></tr><tr><td>ImageJ Software</td><td>National Institute of Health</td><td></td><td>Free software can be downloaded at http://rsb.info.nih.gov/ij/</td></tr><tr><td>SigmaPlot 11.0</td><td>Systat Software Inc. (USA)</td><td></td><td>Equivalent softwares for statistical analysis can be used.</td></tr><tr><td>Prism 6</td><td>GraphPad Software, Inc. (La Jolla, CA, USA)</td><td></td><td>Equivalent softwares for statistical analysis can be used.</td></tr></tbody></table>

immunohistochemical visualization of hippocampal neuron activity after spatial learning in a mouse model of neurodevelopmental disorders

Die Induktion der extrazellulären phosphoryliert-regulierten Kinase (pERK) ist ein zuverlässiges Auslesen der molekularen Lernabhängige neuronale Aktivierung. Hier beschreiben wir ein Perk Immunhistochemie Protokoll, um das Profil Hippocampus-Neuronen Aktivierung nach Exposition gegenüber einer räumlichen Lernaufgabe in einem Maus-Modell gekennzeichnet durch kognitive Defizite der Neuroentwicklungs Ursprung zu studieren. Genauer gesagt, haben wir pERK Immunfärbung auf neuronale Aktivierung zu studieren folgenden Morris-Wasserlabyrinth (MWM, ein klassisches Hippocampus-abhängige Lernaufgabe) in Engrailed-2-Knockout (En2 - / -) Mäusen, einem Modell des Autismus-Spektrum-Störungen (ASD). Im Vergleich zum Wildtyp (WT) steuert, En2 - / - Mäuse zeigten eine signifikante räumliche Lernen Defizite in der MWM. / - - Nach MWM wurden signifikante Unterschiede in der Anzahl von pERK-positiven Neuronen in spezifischen Unterfelder hippocampalen En2 detektiert Mäusen im Vergleich zu WT-Tieren. So kann unser Protokoll robust Schiede erkennenpERK-positiven Neuronen zu Hippocampus-abhängige Lernwertminderung in einem Mausmodell der ASD verbunden. Allgemeiner kann unser Protokoll angewandt werden, um das Profil des Hippocampus Aktivierung sowohl genetische oder pharmakologische Mausmodellen, gekennzeichnet durch kognitive Defizite zu untersuchen.

Das hier beschriebene Protokoll wurde entwickelt, um sichtbar zu machen, mittels Immunhistochemie die Expression eines spezifischen Marker der Hippocampus-Neuronen-Aktivität nach MWM in einem Mausmodell für neurologische Entwicklungsstörungen. Alle hier gezeigten experimentellen Daten wurden von unserer jüngsten Arbeiten 7 übernommen. Männliche und weibliche WT und En2 ​​- / - gleichaltrigen Erwachsenen Wurfgeschwistern (3-5 Monate alt, Gewicht = 25-35 g) aus heterozygoten Verpaarungen er...

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Immunohistochemical Visualization of Hippocampal Neuron Activity After Spatial Learning in a Mouse Model of Neurodevelopmental Disorders

Wir beschreiben ein Immunhistochemie Protokoll, um das Profil Hippocampus-Neuronen Aktivierung nach Exposition gegenüber einer räumlichen Lernaufgabe in einem Maus-Modell gekennzeichnet durch kognitive Defizite der Neuroentwicklungs Ursprung zu studieren. Dieses Protokoll kann sowohl genetische oder pharmakologische Mausmodellen, gekennzeichnet durch kognitive Defizite angewendet werden.

Immunhistochemische Visualisierung von Hippocampus-Aktivität nach Spatial Learning in einem Mausmodell für neurologische Entwicklungsstörungen

Induction of phosphorylated extracellular-regulated kinase (pERK) is a reliable molecular readout of learning-dependent neuronal activation. Here, we ...

immunohistochemical-visualization-hippocampal-neuron-activity-after

Research

JoVE Journal

Neuroscience

11.2K Aufrufe.  University of Trento.  Wir beschreiben ein Immunhistochemie Protokoll, um das Profil Hippocampus-Neuronen Aktivierung nach Exposition gegenüber einer räumlichen Lernaufgabe in einem Maus-Modell gekennzeichnet durch kognitive Defizite der Neuroentwicklungs Ursprung zu studieren. Dieses Protokoll kann sowohl genetische oder pharmakologische Mausmodellen, gekennzeichnet durch kognitive Defizite angewendet werden. 

Serie: Immunohistochemical Visualization of Hippocampal Neuron Activity After Spatial Learning in a Mouse Model of Neurodevelopmental Disorders

Longitudinal Two-Photon Imaging of Dorsal Hippocampal CA1 in Live Mice

Two-photon microscopy is a fundamental tool for neuroscience as it permits investigation of the brain of live animals at spatial scales ranging from subcellular to network levels and at temporal scales from milliseconds to weeks. In addition, two-photon imaging can be combined with a variety of behavioral tasks to explore the causal relationships between brain function and behavior. However, in mammals, limited penetration and scattering of light have limited two-photon intravital imaging mostly to superficial brain regions, thus precluding longitudinal investigation of deep-brain areas such as the hippocampus. The hippocampus is involved in spatial navigation and episodic memory and is a long-standing model used to study cellular as well as cognitive processes important for learning and recall, both in health and disease. Here, a preparation that enables chronic optical access to the dorsal hippocampus in living mice is detailed. This preparation can be combined with two-photon optical imaging at cellular and subcellular resolution in head fixed, anesthetized live mice over several weeks. These techniques enable repeated imaging of neuronal structure or activity-evoked plasticity in tens to hundreds of neurons in the dorsal hippocampal CA1. Furthermore, this chronic preparation can be used in combination with other techniques such as micro-endoscopy, head-mounted wide field microscopy or three-photon microscopy, thus greatly expanding the toolbox to study cellular and network processes involved in learning and memory.

This method describes a chronic preparation that allows optical access to the hippocampus of living mice. This preparation can be used to perform longitudinal optical imaging of neuronal structural plasticity and activity-evoked cellular plasticity over a period of several weeks.

Längs-Zwei-Photon-Bildgebung des Dorsal Hippocampal CA1 in lebenden Mäusen

Two-photon microscopy is a fundamental tool for neuroscience as it permits investigation of the brain of live animals at spatial scales ranging from ...

Forschung

Verhalten

Assessment of Dendritic Arborization in the Dentate Gyrus of the Hippocampal Region in Mice

Dendritic arborization has been shown to be a reliable marker for examination of structural and functional integrity of neurons. Indeed, the complexity and extent of dendritic arborization correlates well with the synaptic plasticity in these cells. A reliable method for assessment of dendritic arborization is needed to characterize the deleterious effects of neurological disorders on these structures and to determine the effects of therapeutic interventions. However, quantification of these structures has proven to be a formidable task given their complex and dynamic nature. Fortunately, sophisticated imaging techniques can be paired with conventional staining methods to assess the state of dendritic arborization, providing a more reliable and expeditious means of assessment. Below is an example of how these imaging techniques were paired with staining methods to characterize the dendritic arborization in wild type mice. These complementary imaging methods can be used to qualitatively and quantitatively assess dendritic arborization that span a rather wide area within the hippocampal region.

We describe two methods for visualization and quantification of dendritic arborization in the hippocampus of mouse models: real-time and extended depth of field imaging. While the former method allows sophisticated topographical tracing and quantification of the extent of branching, the latter allows speedy visualization of the dendritic tree.

Bewertung der dendritischen Verzweigung im Gyrus dentatus des Hippocampus-Region an der Maus

Dendritic arborization has been shown to be a reliable marker for examination of structural and functional integrity of neurons. Indeed, the complexity ...

Neurowissenschaften

Craniotomy Procedure for Visualizing Neuronal Activities in Hippocampus of Behaving Mice

Imaging neuronal activities at single-cell resolution in awake behaving animals is a very powerful approach for the investigation of neural circuit functions in systems neuroscience. However, high absorbance and scattering of light in mammalian tissue limit intravital imaging mostly to superficial brain regions, leaving deep-brain areas, such as the hippocampus, out of reach for optical microscopy. In this video, we show the preparation and implantation of the custom-made imaging window to enable chronic in vivo imaging of the dorsal hippocampal CA1 region in head-fixed behaving mice. The custom-made window is supplemented with an infusion cannula that allows targeted delivery of viral vectors and drugs to the imaging area. By combining this preparation with wide-field imaging, we performed a long-term recording of neuronal activity using a fluorescent calcium indicator from large subsets of neurons in behaving mice over several weeks. We also demonstrated the applicability of this preparation for voltage imaging with single-spike resolution. High-performance genetically encoded indicators of neuronal activity and scientific CMOS cameras allowed the recurrent visualization of subcellular morphological details of single neurons at high temporal resolution. We also discuss the advantages and potential limitations of the described method and its compatibility with other imaging techniques.

This article demonstrates the preparation of a custom-made imaging window supplemented with infusion cannula and its implantation onto the CA1 region of the hippocampus in mice.

Kraniotomie-Verfahren zur Visualisierung neuronaler Aktivitäten im Hippocampus von sich benehmenden Mäusen

Imaging neuronal activities at single-cell resolution in awake behaving animals is a very powerful approach for the investigation of neural circuit ...

In Vivo Chronic Two-Photon Imaging of Microglia in the Mouse Hippocampus

Microglia, the only immune cells resident in the brain, actively participate in neural circuit maintenance by modifying synapses and neuronal excitability. Recent studies have revealed the differential gene expression and functional heterogeneity of microglia in different brain regions. The unique functions of the hippocampal neural network in learning and memory may be associated with the active roles of microglia in synapse remodeling. However, inflammatory responses induced by surgical procedures have been problematic in the two-photon microscopic analysis of hippocampal microglia. Here, a method is presented that enables the chronic observation of microglia in all layers of the hippocampal CA1 through an imaging window. This method allows the analysis of morphological changes in microglial processes for more than 1 month. Long-term and high-resolution imaging of the resting microglia requires minimally invasive surgical procedures, appropriate objective lens selection, and optimized imaging techniques. The transient inflammatory response of hippocampal microglia may prevent imaging immediately after surgery, but the microglia restore their quiescent morphology within a few weeks. Furthermore, imaging neurons simultaneously with microglia allows us to analyze the interactions of multiple cell types in the hippocampus. This technique may provide essential information about microglial function in the hippocampus.

In Vivo Chronic Two-Photon Imaging of Microglia in the Mouse Hippocampus

This paper describes a method for chronic in vivo observation of the resting microglia in the mouse hippocampal CA1 using precisely controlled surgery and two-photon microscopy.

Im lebenden Organismus Chronische Zwei-Photonen-Bildgebung von Mikroglia im Hippocampus der Maus

Microglia, the only immune cells resident in the brain, actively participate in neural circuit maintenance by modifying synapses and neuronal ...

Transplantation of Human Stem Cell-Derived GABAergic Neurons into the Early Postnatal Mouse Hippocampus to Mitigate Neurodevelopmental Disorders

A reduced number or dysfunction of inhibitory interneurons is a common contributor to neurodevelopmental disorders. Therefore, cell therapy using interneurons to replace or mitigate the effects of altered neuronal circuits is an attractive therapeutic avenue. To this end, more knowledge is needed about how human stem cell-derived GABAergic interneuron-like cells (hdINs) mature, integrate, and function over time in the host circuitry. Of particular importance in neurodevelopmental disorders is a better understanding of whether these processes in transplanted cells are affected by an evolving and maturing host brain. The present protocol describes a fast and highly efficient generation of hdINs from human embryonic stem cells based on the transgenic expression of the transcription factors Ascl1 and Dlx2. These neuronal precursors are transplanted unilaterally, after 7 days in vitro, to the hippocampus of neonatal 2-day-old mice. The transplanted neurons disperse in the ipsi- and contralateral hippocampus of a mouse model of cortical dysplasia-focal epilepsy syndrome and survive for up to 9 months after transplantation. This approach allows for investigating the cellular identity, integration, functionality, and therapeutic potential of transplanted interneurons over an extended time in developing healthy and diseased brains.

Transplantation of human pluripotent stem cell-derived GABAergic neurons generated by neuronal programming could be a potential treatment approach for neurodevelopmental disorders. This protocol describes the generation and transplantation of human stem cell-derived GABAergic neuronal precursors into the brains of neonatal mice, allowing long-term investigation of grafted neurons and evaluation of their therapeutic potential.

Transplantation von GABAergen Neuronen aus humanen Stammzellen in den frühen postnatalen Maushippocampus zur Linderung neurologischer Entwicklungsstörungen

A reduced number or dysfunction of inhibitory interneurons is a common contributor to neurodevelopmental disorders. Therefore, cell therapy using ...

Imaging Hippocampal Neuronal Activation In Mouse Brain Sections

<a href='https://app.jove.com/v/52919/immunohistochemical-visualization-hippocampal-neuron-activity-after'>Source: Provenzano, G., et al.&#160;Immunohistochemical Visualization of Hippocampal Neuron Activity After Spatial Learning in a Mouse Model of Neurodevelopmental Disorders. J. Vis. Exp.&#160;(2015)</a>This video demonstrates immunohistochemical imaging to visualize hippocampal neuronal activation. Stained brain sections reveal darker regions under a bright-field microscope, indicating activated neurons.

Source: Provenzano, G., et al.&#160;Immunohistochemical Visualization of Hippocampal Neuron Activity After Spatial Learning in a Mouse Model of ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroimaging

Structural & Functional Brain Imaging

Fluorescence Immunostaining of Rat Hippocampal Neurons within a Microfluidic Chip

Source: Nagendran, T., et al., <a href="https://app.jove.com/v/58421">Use of Pre-Assembled Plastic Microfluidic Chips for Compartmentalizing Primary Murine Neurons.</a> J. Vis. Exp. (2018)
This video demonstrates immunofluorescence staining of rat hippocampal neurons cultured within a microfluidic chip to analyze neuronal maturation and connectivity.

Fluoreszenz-Immunfärbung von Hippocampus-Neuronen der Ratte in einem mikrofluidischen Chip

1. Fluorescence Immunostaining within the Chip

	Prepare 4% formaldehyde fixation solution in PBS (4% formaldehyde, 1 &#181;M MgCl2, 0.1 &#181;m CaCl2, ...

Neuropathology

Trauma

Immunofluorescence Staining for Visualizing Proliferated Neural Stem Cells in Mouse Brain Sections

Source: Quintanilla, L. J., et al. <a href="https://app.jove.com/v/59237">Assaying Circuit Specific Regulation of Adult Hippocampal Neural Precursor Cells.</a> J. Vis. Exp. (2019)
This video demonstrates the procedure for staining newly proliferated neural stem cells in brain tissue sections using EdU incorporation, followed by immunofluorescence to visualize specific proteins, enhancing the understanding of cell dynamics and proliferation.

Immunfluoreszenzfärbung zur Visualisierung proliferierter neuraler Stammzellen in Hirnschnitten von Mäusen

All procedures involving animal samples have been reviewed and approved by the appropriate animal ethical review committee.
1. Immunohistochemistry

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Developmental and Pediatric Disorders

Microscopic Analysis of Synapses in Mouse Hippocampal Slices Using Immunofluorescence

<a href='https://app.jove.com/v/56153/evaluation-of-synapse-density-in-hippocampal-rodent-brain-slices'>Source: McLeod, F., et al. Evaluation of Synapse Density in Hippocampal Rodent Brain Slices. J. Vis. Exp. (2017).</a>This video demonstrates a method for visualizing synaptic markers in hippocampal brain slices using confocal immunofluorescence analysis. The slices are immunostained with primary antibodies targeting presynaptic and postsynaptic markers, followed by fluorophore-conjugated secondary antibodies. The labeled markers are then visualized using confocal microscopy to evaluate the synaptic architecture through their colocalization.

Source: McLeod, F., et al. Evaluation of Synapse Density in Hippocampal Rodent Brain Slices. J. Vis. Exp. (2017).This video demonstrates a method for ...

Synaptic & Cellular Imaging

An Immunofluorescence Staining Technique to Detect Adult Hippocampal Neurogenesis

Source: Ansorg, A., et al. <a href="https://app.jove.com/v/52551">Immunohistochemistry and Multiple Labeling with Antibodies from the Same Host Species to Study Adult Hippocampal Neurogenesis.</a> J. Vis. Exp. (2015)
The video illustrates an immunofluorescence staining method used to examine neurogenesis in the adult hippocampus. Initially, a mouse brain section undergoes treatment with primary antibodies directed at marker proteins associated with neurogenesis in neuronal progenitor cells. Next, it is labeled with secondary antibodies tagged with fluorophores. The brain section is then observed under a confocal microscope to distinguish various subtypes of progenitor cells, based on the expression patterns of distinct combinations of marker proteins.

Eine Immunfluoreszenz-Färbetechnik zum Nachweis der adulten Hippocampus-Neurogenese

All procedures involving animal models have been reviewed by the local institutional animal care committee and the JoVE veterinary review board.
1. Tissue ...