11.24 : Cromatografía de afinidad

La cromatografía de afinidad es una técnica potente que se utiliza ampliamente para separar y purificar biomoléculas específicas de mezclas complejas. Aprovecha la unión altamente selectiva entre un analito y su contraparte, como las interacciones anticuerpo-antígeno. La contraparte se inmoviliza en la fase estacionaria, formando una columna de afinidad. La fase estacionaria generalmente consta de un soporte sólido, como agarosa o perlas de vidrio porosas, que inmovilizan el ligando de afinidad. La fase móvil cumple una doble función: favorecer la unión fuerte entre el analito y el ligando y, posteriormente, debilitar la interacción para eluir el analito. Solo el analito se une cuando la mezcla que contiene el analito deseado pasa por la columna, mientras que otras sustancias se lavan. El analito unido se puede eluir luego modificando las condiciones, como el pH o la fuerza iónica, lo que debilita su unión.

Este método es particularmente valioso en bioquímica por su especificidad y aplicación en el aislamiento de proteínas, enzimas, sustratos, anticuerpos, antígenos, receptores y hormonas. La cromatografía de afinidad también se puede emplear para aislar isómeros ópticos individuales de fármacos, que pueden exhibir diferentes efectos terapéuticos. Este proceso implica el uso de anticuerpos monoclonales específicos para cada estereoisómero.

La principal ventaja de la cromatografía de afinidad es su especificidad excepcional, que la hace ideal para el aislamiento rápido de biomoléculas en el trabajo preparatorio.