El trasplante heterotópico traqueal y ortotópico en ratones utilizados como modelos para estudiar el desarrollo de la enfermedad de las vías respiratorias obliterante

Resumen

Este video muestra y se comparan dos modelos experimentales para estudiar el desarrollo de la enfermedad de las vías respiratorias obliterante (OAD) en ratones, el modelo de trasplante heterotópico traqueal y ortotópico.

Resumen

Obliterante las vías respiratorias enfermedad (OAD) es la complicación más importante después de un trasplante de pulmón que los límites de la supervivencia a largo plazo (1-7).

Para el estudio de la fisiopatología, tratamiento y prevención de los modelos de OAD, animales diferentes de trasplante de tráquea en los roedores se han desarrollado (1-7). Aquí, hemos utilizado dos modelos establecidos de transplante de tráquea, el modelo ortotópico y heterotópico y demostrar sus ventajas y limitaciones.

Para el modelo heterotópico, la tráquea del donante se envuelve en el epiplón mayor del receptor, mientras que el donante la tráquea se anastomosa por anastomosis término-a-extremo en el modelo ortotópico.

En ambos modelos, el desarrollo de lesiones histológicas similares a obliterante OAD clínicos se ha demostrado (1-7).

Este vídeo muestra cómo llevar a cabo tanto, el heterotópico, así como la técnica de trasplante ortotópico traqueal en ratones, y se compara la evolución temporal del desarrollo de AOD en ambos modelos con la histología.

Protocolo

1. Mujer ratones Balb / C (8-12 semanas) son adquiridos de Charles River Laboratories (Sulzfeld, Alemania). Los ratones se encuentran en condiciones convencionales, alimentados con comida estándar de ratones y agua ad libitum.
2. 2% Isofluran se utiliza para la anestesia.

PREPARACIÓN DE LOS DONANTES

1. Afeitar el vello abdominal y desinfectar el área con betaisodona.
2. Bajo visión microscópica, realizar una incisión cervical desde el nivel de la laringe con el esternón.
3. Quitar la grasa subcutánea y los músculos de la correa para obtener una visión clara de la tráquea.
4. Disecar la tráquea de los tejidos circundantes, como el esófago, los nervios, arterias y tejido conectivo.
5. Retire toda la tráquea (desde la laringe hasta la bifurcación).
6. Enjuague bien el trasplante con una solución salina fría y guardar el injerto a 4 ° C.
7. El donante es la eutanasia por dislocación cervical después de la cosecha de la tráquea.

BENEFICIARIO: trasplante heterotópico

1. Afeitar el vello abdominal en un amplio margen alrededor de la incisión y desinfectar la zona tres veces con betaisodona (betadine), seguido por el alcohol. Los ojos deben ser lubricados con un producto de ungüento oftálmico para evitar que las córneas que se sequen.
2. Realizar una laparotomía media y el lugar en el intestino en un guante estéril y humectada.
3. Difundir el epiplón mayor cuidado. Coloque el injerto en el centro y fijar con una sola sutura con 8-0 (Prolene, Ethicon, Alemania).
4. Cubren totalmente el trasplante con el epiplón mayor y fijar el injerto con una sola sutura 8-0 (Prolene, Ethicon, Alemania).
5. Reubicar a los intestinos en el abdomen y lave con solución salina tibia y estéril antes del cierre.
6. Cerca de dos capas - pared abdominal y la capa de la piel con un patrón continuo con prolene 7-0 para el músculo y Vicryl 7-0 para la piel.

BENEFICIARIO: trasplante ortotópico

1. Afeitar el vello abdominal en un amplio margen alrededor de la incisión y desinfectar la zona tres veces con betaisodona (betadine), seguido por el alcohol. Los ojos deben ser lubricados con un producto de ungüento oftálmico para evitar que las córneas que se sequen.
2. Divide los músculos correa para visualizar el complejo laringotraqueal completa.
3. Diseccionar cuidadosamente la tráquea de los tejidos circundantes, tenga cuidado para preservar los nervios laríngeos recurrentes.
4. Divide la tráquea tres anillos de caudal desde el cricoides. El animal mantiene la respiración fisiológica a través de la traqueotomía.
5. Asegúrese de limpiar los bordes de la tráquea en el receptor, así como en el injerto.
6. El injerto se interpone entre el receptor defectos traqueal y orientado a mantener la polaridad anatómica.
7. Utilizando 8-0 (Prolene, Ethicon, Alemania) anastomosis del injerto donante con la parte distal (mediastino) tráquea. La cara posterior de la anastomosis se realiza en forma continua en funcionamiento. La cara anterior se completa con puntos de sutura interrumpida.
8. Eliminar las secreciones de las vías respiratorias.
9. La anastomosis proximal se completa en la misma forma que la distal.
10. Asegurar la integridad de las vías respiratorias y la respiración adecuada y espontánea.
11. La ubicación de la correa de los músculos y cerrar el tejido subcutáneo y la capa de la piel con suturas 6-0 (Vicryl, Ethicon, Alemania) con un patrón continuo.
12. El uso de anestesia por inyección para el destinatario, por lo tanto, el animal mantendrá la respiración fisiológica a través de la tráquea. Una combinación de 75/1/0.2 mg / kg de propofol, medetomidina y fentanilo, respectivamente, se utiliza para la anestesia ip en ratones.

Figura 1: donantes tráquea.
1A: Donantes tráquea in situ después de la preparación.
1B: tráquea extirpada de los donantes.
1C: Donantes tráquea después de la explantación.

Figura 2: Modelo heterotópico.
2A: El injerto se coloca en el centro del epiplón mayor.
2B: El injerto se fija en ambos extremos con una sutura simple.
2C: El injerto se envuelve en el epiplón mayor y se fija con una sutura simple.

Figura 3: Modelo ortotópico.
3A: El injerto se interpone entre el receptor defectos traqueal y la pared posterior se anastomosa en forma continua en funcionamiento.
3B: La pared anterior se completa con una sola sutura.

Figura 4: Histología.
4A: Reformado tráquea trasplantada heterotópico después de 28 días en la estación H + Enando (15x). Tenga en cuenta la destrucción del 100% luminal.
4B: Reformado tráquea trasplantada ortotópico después de 60 días en la tinción H + E (15x). Obliteración luminal máximo alcanzado es de aproximadamente 45%.

	Modelo heterotópico trasplante traqueal	Modelo ortotópico de trasplante traqueal
Ventajas	+ Fácil para llevar a cabo + Obliteración luminal con oclusión completa las vías respiratorias después de 28 días + No hay afecto físico de los animales por el OAD	+ Física ventilación del injerto + Administración de fármacos inhalados posible + Fuertes reacciones inmunológicas como la producción de anticuerpos IgM aloreactivas + Torácica medio fisiológico + Traqueal-traqueal anastomosis imita a la práctica clínica
Desventajas	- No había ventilación de la tráquea trasplantada - No hay evaluación de patógenos inhalados posible - La inhibición de la depuración mucociliar y retención de secreciones - Microambiente peritoneal en lugar de medio torácica	- Formación necesaria quirúrgica - Obliteración luminal con aplicación de la oclusión luminal. 45% después de 60 días - Los animales pueden desarrollar síntomas de la OAD

Tabla 1: Ventajas y desventajas del trasplante heterotópico traqueal y ortotópico.

Discusión

Los ratones están disponibles en diferentes transgeneic y el modelo de octavos de final, y por lo tanto, adecuado para estudiar las cuestiones relacionadas con la mecánica OAD (4).
Ambos modelos de trasplante de tráquea se muestra en este video se puede utilizar como modelos confiables para estudiar el desarrollo OAD.
Sin embargo, cada modelo muestra las ventajas y limitaciones.

El trasplante traqueal heterotópico es fácil de realizar y no requiere de entr...