Enfoques y Protocolos para la Integral ecocardiográficos Caracterización fenotípica en las valvulopatías en ratones

Resumen

This protocol provides a detailed description of the echocardiographic approach for comprehensive phenotyping of heart and heart valve function in mice.

Resumen

The aim of this manuscript and accompanying video is to provide an overview of the methods and approaches used for imaging heart valve function in rodents, with detailed descriptions of the appropriate methods for anesthesia, the echocardiographic windows used, the imaging planes and probe orientations for image acquisition, the methods for data analysis, and the limitations of emerging technologies for the evaluation of cardiac and valvular function. Importantly, we also highlight several future areas of research in cardiac and heart valve imaging that may be leveraged to gain insights into the pathogenesis of valve disease in preclinical animal models. We propose that using a systematic approach to evaluating cardiac and heart valve function in mice can result in more robust and reproducible data, as well as facilitate the discovery of previously underappreciated phenotypes in genetically-altered and/or physiologically-stressed mice.

Introducción

El envejecimiento se asocia con aumentos progresivos en la formación de calcificaciones cardiovasculares ^1. La estenosis de la válvula aórtica hemodinámicamente significativa afecta al 3% de la población mayor de 65 años ^2, y los pacientes con estenosis de la válvula aórtica, incluso moderada (velocidad pico de 3-4 m / s) tienen una supervivencia libre de eventos a los 5 años del 40% menos de ^3. En la actualidad, no existen tratamientos eficaces para frenar la progresión de la calcificación de la válvula aórtica, y el reemplazo de la válvula aórtica quirúrgica es el único tratamiento disponible para la estenosis de la válvula aórtica avanzada ^4.

Estudios dirigidos a obtener una comprensión más profunda de los mecanismos que contribuyen a la iniciación y progresión de la calcificación de la válvula aórtica son un primer paso clave en el camino hacia métodos farmacológicos y no quirúrgicos para tratar la estenosis de la válvula aórtica ^{5, 6.} Genéticoratones alterados-ly han jugado un papel importante en el desarrollo de nuestra comprensión de los mecanismos que contribuyen a una variedad de enfermedades y ahora están llegando a la vanguardia de los estudios sobre los mecanismos destinados a comprender la biología de la estenosis de la válvula aórtica ^{6, 7, 8.} A diferencia de otras enfermedades cardiovasculares tales como la aterosclerosis y la insuficiencia cardíaca, donde protocolos estándar para evaluar la función vascular y ventricular son en su mayor parte bien establecidos-hay retos únicos asociados con el fenotipo in vivo de la función de válvula de corazón en ratones. Aunque recientes han proporcionado discusiones exhaustivas sobre las ventajas y desventajas de numerosas imágenes y modalidades invasivas utilizadas para evaluar la función de la válvula de roedores ^{9, 10, 11,} hasta la fecha, no tenemos conocimiento de una publicación que proporciona una comprehensive, paso a paso protocolo para la función de la válvula del corazón fenotipificación en ratones.

El propósito de este manuscrito es describir los métodos y protocolos al fenotipo función de válvula de corazón en ratones. Todos los métodos y procedimientos han sido aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Clínica Mayo. Los componentes clave de este protocolo incluyen la profundidad de la anestesia, la evaluación de la función cardíaca, así como la evaluación de la función de las válvulas cardíacas. Esperamos que este informe no sólo servirá para guiar a los investigadores interesados ​​en seguir la investigación en el campo de la enfermedad de las válvulas del corazón, sino que también se iniciará un diálogo nacional e internacional relacionada con el protocolo de estandarización para asegurar la reproducibilidad y validez de datos en este campo de rápido crecimiento. Es importante destacar que el uso de imágenes exitosa a los sistemas de ultrasonido de alta resolución requiere un conocimiento práctico de los principios de la ecografía (y la terminología de uso común en la ecografía), una comprensión fundamental de la principles de la fisiología cardiaca, y la experiencia significativa con la ecografía para permitir una evaluación precisa y eficiente en el tiempo de la función cardiaca en los roedores.

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Protocolo

1. Preparar los materiales y equipos (Tabla 1 y Figura 1)

1. Encienda la máquina de ultrasonido. Entre el ID de animales, la fecha y la hora (para los experimentos de imagen de serie) y otra información relevante.
2. Utilice un transductor de ultrasonido de alta frecuencia, 40 MHz para los ratones de imagen de menos de ~ 20 g o 30 MHz para los ratones de más de ~ 20 g.
3. Conectar la plataforma con el electrocardiograma (ECG) vigilar para ECG gating de imágenes para ciertas modalidades.
   NOTA: Fundamentalmente, esto también permite el cálculo instantáneo de la frecuencia cardíaca (HR), que se puede utilizar como uno de varios índices de una profundidad apropiada de la anestesia.
4. Precalentar la plataforma a 37 ° C.
   NOTA: Todas las máquinas de ultrasonido comercialmente disponibles tienen un panel de control que proporciona controles de adquisición de imagen y controles de gestión del estudio para B-mode, modo M, y la ecocardiografía Doppler. Una herramienta de medición cardíaca está incrustado en la máquina para la medición automáticay el cálculo de los parámetros ecocardiográficos comunes de las funciones cardíacas valvulares.

2. Preparar el ratón de la Imagen y la inducción de la anestesia

1. recoger suavemente hacia arriba el ratón por la cola y sostener firmemente el animal en la nuca de su cuello.
2. Guiar la nariz del animal en el cono de la nariz. Comienza el flujo de la anestesia isoflurano al 1%. Asegúrese de que el animal está sedado dentro de 3-5 s de la exposición al gas.
3. Con rapidez y precisión estaba el animal sobre la plataforma en posición supina, asegurándose de que las patas delanteras y las patas traseras se encuentran en los sensores de ECG de la plataforma.
4. asegurar suavemente el animal con cinta adhesiva en las cuatro extremidades, ligeramente aplicar cinta adhesiva para estabilizar la cabeza en el aparato de cono de la nariz, y aplicar la cinta adhesiva para estabilizar la cola. Ambas patas traseras y patas delanteras deben estar planos para garantizar la adquisición de señales de ECG estable y clara por el sistema de imagen fisiológica.
5. Compruebe la AR. Hacer esto utilizando una imaplataforma ging con capacidades de ECG o con los dispositivos de ECG externo. Asegúrese de que el FC basal es de entre 600 a 700 latidos por minuto. Asegúrese de que la HR no cae por debajo de 450 latidos por minuto bajo ninguna circunstancia.
   NOTA: Durante el procedimiento, el HR puede disminuir ligeramente debido a la anestesia, pero debe estar por encima de 500 latidos por minuto en la mayoría de los casos.
6. Ajuste el flujo de la anestesia mediante pequeños incrementos en consecuencia (~ 0,1% con incrementos cada 15 s hasta que se alcanza un estado estable de la anestesia).
   NOTA: Un estado estable de la anestesia es una condición en la que se mantienen los parámetros cardíacos antes mencionados (véase el paso 2.5) y el animal no abiertamente responden a los estímulos de la colocación de la sonda en varias ventanas de imagen. Es importante destacar que esto no es un plano quirúrgico de anestesia, lo que resulta en marcado cardiodepresión en ratones. Para las sesiones de formación de imágenes prolongados, se recomienda la aplicación de veterinario ungüento para los ojos para evitar la sequedad.
7. Compruebe la temperatura del cuerpo usando un termómetro rectal. Mantener la temperatura entre 36,5 ° C y 38 ° C.
   NOTA: En una sala apropiadamente controlado con el medio ambiente y en una plataforma calentada, la temperatura del cuerpo (medida por vía rectal) permanece constante durante todo el procedimiento y, en consecuencia, no es un factor de confusión que influyen en la hemodinámica cardiovascular con el tiempo.
8. Afeitarse el vello del pecho usando una maquinilla eléctrica diseñada para su uso con el cabello fino. Limpiar el pecho con una toalla de papel húmeda. El animal está listo para la imagen.
   NOTA: Mientras la eliminación química del cabello también se puede realizar, evitar el uso de tales compuestos, ya que pueden causar irritación significativa de la piel con el tiempo en experimentos a largo plazo. Por otra parte, la aplicación y la eliminación de tales productos de depilación basados ​​químicamente adecuada puede prolongar la duración de la exposición anestesia por 2-3 minutos (~ 10-20%). El tiempo total de la inducción de la anestesia hasta la finalización de la preparación de la piel debe tener menos de 3 min.

_TITLE "> 3. Siga Principios y directrices básicos en Adquisición de imágenes de ultrasonido cardíaco

NOTA: Existen tres modalidades de ultrasonido utilizados en la adquisición de las imágenes: modo B / 2-D, en modo M y Doppler (Doppler espectral de la onda de impulsos y de imagen Doppler color). Hay dos posiciones del transductor básicos utilizados para adquirir imágenes de las válvulas del corazón y del corazón: el paraesternal y ventanas apical (Figura 2).

1. De cada posición del transductor, obtener múltiples imágenes tomográficas del corazón con respecto a sus ejes largos y cortos mediante la rotación y angulación del transductor manualmente.
   NOTA: La rotación se refiere a pivotamiento o torcer el transductor a partir de una posición fija en la pared del pecho, mientras que la angulación se refiere al movimiento de lado a lado del transductor de un punto fijo en la pared torácica. Todos los transductores de ultrasonidos tienen un marcador de índice de imágenes en forma de una ranura (notch), nervadura externa, o un botón.
2. Asegúrese de que la firma de ultrasonidonal es perpendicular a la estructura objetivo mediante el ajuste de la posición del transductor en consecuencia.
3. Optimizar el flujo de señales de velocidad de pico color y alineando el haz ultrasónico transmitido paralela al flujo. El ángulo entre el haz de ultrasonido y el flujo debe ser menor de 60 °.
4. Optimizar la calidad de imagen utilizando los controles del panel de control. Sólo el área de interrogación debe llenar la pantalla de imagen.
   NOTA: Los ajustes de precisión en las posiciones del transductor y de la plataforma son casi siempre necesario obtener imágenes claras. Incluso en condiciones óptimas, los movimientos respiratorios, la anatomía de la pared torácica (por ejemplo, un pequeño espacio entre las costillas), y las variaciones en la anatomía interna (tanto inherente y la enfermedad inducida) puede limitar la ventana acústica y hacer la adquisición de imágenes muy difícil.
5. Al medir las dimensiones del ventrículo izquierdo en modo M y 2-D / B-mode, colocar la pinza de medición en la línea de eco más continua.
6. Ajustar el color de un sector Dopplerd volumen de muestra a la zona de interrogación ajustando el control de sector, que se encuentra en el panel.
   NOTA: El esquema de codificación por colores en los estudios Doppler indica la velocidad y la direccionalidad del flujo sanguíneo. señales Doppler que son rojas indican el flujo laminar de la sangre hacia el transductor. señales Doppler que son azules indican el flujo laminar de distancia desde el transductor. Un patrón de color "mosaico" indica regiones de flujo sanguíneo turbulento o no laminar (que comúnmente ocurre en la estenosis valvular o insuficiencia valvular).
7. Registrar un mínimo de dos tiras de 5 s (o 100 fotogramas) de modo B en tiempo real / 2D eco de cada ventana de imagen para el análisis fuera de línea.
   NOTA: Las máquinas de eco disponibles comercialmente tienen valores de adquisición de imágenes que capturan un número preestablecido de marcos o tamaños de cine-loop. Los ajustes de adquisición de imágenes pueden ser modificados de manera que los bucles de cine más largos pueden ser adquiridos. Adquisición de imágenes de alta calidad requiere una amplia experiencia y la experimentación. Investigdores deben encontrar la combinación correcta de colocación del transductor y el ángulo de la plataforma para obtener imágenes desde muchos puntos de vista y ventanas acústicas.

4. Evaluación de la válvula aórtica (AV) Función

NOTA: Las evaluaciones de la función de la válvula aórtica incluyen evaluaciones cualitativas de la válvula (por ejemplo, la percepción de espesor cúspide, aumento de la ecogenicidad debido a la calcificación valvular, y la presencia o ausencia de chorros de regurgitación utilizando Doppler color) y las medidas cuantitativas de la función de válvula (por ejemplo, transvalvular pico la velocidad y la distancia de separación cúspide).

1. Comience a la imagen de la válvula aórtica mediante la selección de modo B de adquisición de imágenes.
2. Con el animal bien sujeta en la plataforma y la cabeza de espaldas a la investigadora, la inclinación de la mesa de 15-20 ° a la izquierda. Esto hará que el corazón hacia delante y hacia la izquierda, más cerca de la pared torácica. Aplicar una cantidad generosa de gel de ultrasonido en el transductor o directamente sobre la unapecho de nimal.
3. Coloque el transductor paraesternalmente, sobre 90 ° perpendicular con el eje longitudinal del corazón, con el marcador de índice de imagen del transductor señalando posterior (Figura 2). Mientras que en modo B / 2D, deslice el transductor cefálica hasta que el AV está a la vista. Esta es la vista "eje corto" de la válvula aórtica.
   NOTA: una válvula aórtica normal tiene tres cúspides delgadas que se pueden abrir ampliamente durante la sístole y la diástole se cierran adecuadamente durante por lo que no hay regurgitación de la sangre hacia el ventrículo izquierdo. Las cúspides son muy finas, se mueven muy rápidamente, y, a menudo puede ser difícil de visualizar.
4. Rotar el transductor de las agujas del reloj hasta que los puntos de índice de imágenes marca en posición caudal. Observar la raíz aórtica, la válvula aórtica, el tracto de salida del ventrículo izquierdo, la válvula mitral, aurícula izquierda, y parte del ventrículo derecho del tracto de salida en la pantalla de imagen.
   NOTA: Esta es la vista "eje paraesternal largo" de la AV. El ecografista debecerciorarse de que hay dos cúspides de la válvula aórtica visibles durante todo el ciclo cardiaco en las imágenes en modo B, lo que permitirá la posterior formación de imágenes y análisis (véase más adelante) M-Mode.
5. Evaluar la raíz aórtica en esta vista. Cuidadosamente mover adelante y atrás para que las imágenes de la raíz aórtica contienen las mayores dimensiones de la raíz aórtica. Medir la mayor dimensión antero-posterior de la aorta usando el calibrador electrónico asociado con la herramienta de medición integrado en la máquina.
6. Localiza la válvula aórtica en el eje largo. Reducir el ancho de la imagen de modo que sólo la válvula aórtica está en la visualización de la imagen mediante el ajuste de botón ancho de la imagen en el panel de control. Coloque la línea M-modo de interrogación donde se cruza con la punta de la válvula aórtica para evaluar con precisión la separación aórtica cúspide de válvula.
7. En la pantalla en modo M de la válvula aórtica, medir la distancia de separación cúspide (apariencia similar a una caja en la sístole) usando el calibrador electrónico asociada con el measurherramienta ele- incrustado en la máquina.
   NOTA: La mayor ventaja de la formación de imágenes en modo M es la muy alta resolución temporal, que es esencial para la evaluación de la función valvular aórtica. Mientras que las imágenes en modo M del AV se pueden adquirir tanto en los puntos de vista de corto y largo de ejes, el eje largo paraesternal En general se prefiere debido a que el plano de la imagen permite que el auxiliar de ecografía para identificar fácilmente la orientación y la ubicación de la punta de la cúspides durante la sístole.
8. Aunque todavía en la vista de eje largo paraesternal de la válvula aórtica, pulse la tecla de control Doppler color en el panel de control. Aplicar Doppler color a la región de la válvula aórtica.
   NOTA: flujo normal desde el ventrículo izquierdo a través de la válvula aórtica durante la sístole es hacia el transductor y por lo tanto se codifica rojo.
9. Documentar la presencia o ausencia de regurgitación de la válvula aórtica.
   NOTA: regurgitación de la válvula aórtica es un flujo anormal que se produce durante la diástole y se dirige lejos de la transducer; de este modo, se codifica azul.
10. Pulse la tecla de control Doppler de onda pulsada. El uso de la bola de seguimiento situado en el panel de control, coloque el volumen de la muestra de ondas pulsadas en la aorta ascendente proximal, justo por encima de la válvula aórtica, asegurándose de que el ángulo entre el haz de ultrasonidos y el flujo de sangre es inferior a 60 ° de inclinación de la plataforma y / o el transductor. Si es posible, obtener el pico de velocidad a través de la válvula aórtica desde la ventana horquilla esternal.
11. Medir la velocidad pico de la visualización espectral utilizando los calibradores electrónicos asociados con la herramienta de medición incorporado en la máquina (Figura 3C y 3F).
    NOTA: Un mosaico de color denota la velocidad de flujo máxima que es probable que contenga patrones de flujo no laminar.

5. Evaluación de la válvula mitral (VM) Función

NOTA: Evaluación de la función de la válvula mitral incluye evaluaciones cualitativas de la válvula (por ejemplo, porespesor cúspide recibida, aumento de la ecogenicidad debido a la calcificación valvular, presencia o ausencia de chorros de regurgitación utilizando Doppler color) y las medidas cuantitativas de la función de la válvula.

1. Coloque el transductor en la posición apical en B-mode. Posicionar el transductor de forma que está en ángulo hacia la cabeza del ratón (Figura 2C). Observar el ventrículo derecho (VD), el ventrículo izquierdo (VI), la aurícula derecha (AD), y la aurícula izquierda (AI) en la pantalla de imagen. inclinar manualmente la plataforma ligeramente de modo que el animal está en una posición de "cabeza abajo" para visualizar la válvula mitral, ya que se abre en el LV.
   NOTA: La vista apical de 4 cámaras es la visión más adecuada para el examen de velocidad de la sangre a través de las válvulas mitral y tricúspide, así como la velocidad tisular del anillo mitral. Esta es también una buena vista para evaluar el movimiento y las dimensiones de la RV y el tabique interventricular.
2. A partir de la vista apical de 4 cámaras, llevar la válvula mitral en el foco mediante la reducción de la anchura de la imagen.Observe que las valvas de la válvula mitral aparecen como la apertura y cierre durante cada ciclo cardíaco, dos filamentos delgados móviles.
   NOTA: valvas mitrales de un ratón "normal" puede ser difícil de visualizar si la imagen se realiza en HR fisiológica (es decir,> 450 bpm).
3. Coloque el cursor en modo M través de la válvula mitral para evaluar el grosor de las valvas.
   NOTA: La valva anterior se visualiza mejor en sístole cuando es perpendicular al haz de ultrasonido (Figura 4).
4. Uso de la vista apical de 4 cámaras, aplicar Doppler color a la imagen de flujo desde la aurícula izquierda a través de la válvula mitral durante la diástole. Observar si se produce la regurgitación de la válvula mitral.
   NOTA: El flujo se dirige hacia el transductor y por lo tanto se codifica rojo. Flujo regurgitante se codificará azul y se produce durante la sístole (Figura 5).
5. Utilizando la vista de eje largo apical, cambie al modo de onda pulsada. Mueva el volumen de la muestra Doppler a las puntas de lavelo mitral. Tenga en cuenta los dos picos de la pantalla de entrada espectral mitral. Si no están bien visualizaron-las valvas, utilice Doppler color para identificar regiones con patrones de color rojo o mosaico brillante y colocar el volumen de la muestra en ese punto.
   NOTA: La visualización espectral del flujo mitral tiene dos picos en los CRI lenta (<450 lpm). En los CRI normales (> 450 lpm), el temprano (E) y tardía de llenado de los flujos (A) se fusionan. La pantalla Doppler espectral de flujo a través de la válvula mitral se utiliza en la evaluación de la función diastólica ventricular izquierda (véase el paso 7.5).

6. Evaluación de la función de las válvulas cardíacas derecho unilateral

NOTA: El válvulas tricúspide y pulmonic comprenden las válvulas del corazón derecho. La válvula tricúspide se puede visualizar fácilmente en el eje largo apical, mientras que la válvula pulmonar puede ser visualizado en las vistas tanto del largo paraesternal y de eje corto.

1. Desde el punto de vista de eje largo apical, la inclinación o el punto U la punta del transductorcantar un movimiento oscilante de modo que el ventrículo derecho está en el centro de la visualización de la imagen. Reducir el ancho de la imagen de modo que sólo el ventrículo derecho es visible en la pantalla de imagen.
2. En el mismo plano de la imagen, visualizar las valvas de la válvula tricúspide, que aparecen como filamentos delgados, teléfonos entre la aurícula derecha y el ventrículo derecho y que se abren y cierran en el transcurso de cada ciclo cardíaco.
3. Aplicar Doppler color en la región de la válvula tricúspide. Nota para la regurgitación de la válvula tricúspide.
   NOTA: flujo normal ocurre durante la diástole, se dirige hacia el transductor, y por lo tanto se codifica rojo. flujo regurgitante anormal se produce durante la sístole, se aleja del transductor, y por lo tanto se codifica azul. La velocidad máxima del chorro regurgitante se utiliza para estimar la presión sistólica del ventrículo derecho.
4. Mover el transductor a la posición de eje corto parasternal al nivel de la válvula aórtica. Por encima de la válvula aórtica son el ventrículo derecho outfbajo las vías, la válvula pulmonar, la arteria pulmonar principal proximal, y el derecho y las arterias pulmonares izquierda (Figura 6).
5. Rotar el transductor de las agujas del reloj a una posición de eje largo paraesternal modificado. A continuación, inclinar el transductor ligeramente hacia arriba para obtener una vista de eje corto de la válvula pulmonar.
6. En este punto de vista, se aplican las imágenes en modo M para evaluar la distancia de separación de las valvas válvula pulmonar (Figura 7).
7. Aplicar Doppler color en la región de la válvula pulmonar para evaluar la regurgitación valvular (a, chorro de alta velocidad-mosaico con dibujos durante la diástole) y estenosis (un chorro de alta velocidad-mosaico con dibujos durante la sístole).
8. Pulse la tecla de control de onda pulsada y colocar el volumen de la muestra justo después de la válvula pulmonar.
   NOTA: Análisis de la pantalla Doppler espectral de flujo se utiliza para estimar la presión arterial pulmonar (Figura 8).

7. Evaluación de la función cardiaca

NOTA: La evaluación de la función cardíaca incluye evaluaciones cualitativas de la contractilidad ventricular izquierda (por ejemplo, la estimación visual de la fracción de eyección, la anormalidad de movimiento de la pared regional, y el espesor percibido de las paredes) y las medidas cuantitativas del ventrículo izquierdo función (por ejemplo, la fracción de eyección, la masa del ventrículo izquierdo, la función diastólica del ventrículo izquierdo, y los índices de rendimiento miocárdico).

1. Obtener una vista de eje corto del VI en modo B / 2D, con el transductor en la posición paraesternal de eje corto a nivel de los músculos papilares. Mueva el transductor de arriba y abajo para escanear la LV desde la base hasta el ápice. Observe si hay alteraciones de la motilidad.
2. Desde un punto de vista paraesternal de eje corto del ventrículo izquierdo, pulse el botón de modo M, situada en el panel de control. Uso de la bola de seguimiento, posicionar el cursor en modo M en el centro de la cavidad ventricular izquierda en el nivel de los músculos papilares y obten imágenes en modo M.
3. Medir la dimensión de la cavidad ventricular izquierda al final de la diástole, donde la distancia entre la pared posterior y la pared anterior es la más grande, y en el final de la sístole, donde el movimiento hacia el interior de ambas paredes anterior y posterior es máxima (Figura 9).
4. Medir el espesor de las paredes anterior y posterior al final de la diástole y la sístole final.
   NOTA: Si bien los músculos papilares son un punto de referencia esencial para asegurar el plano de la imagen correcta, tenga cuidado de no incluirlos en cualquier medición.
5. Mover el transductor a la ventana apical. Ver el paso 5.1. Evaluar la función diastólica del ventrículo izquierdo con Doppler de onda pulsada del flujo de sangre a través de la válvula mitral en el eje largo apical.
6. Coloque el volumen de la muestra en las puntas de las valvas de la válvula mitral. Medir la velocidad pico de flujo mitral desde la visualización espectral de las velocidades Doppler de onda pulsada a través de la válvula mitral.
7. Coloque el volumen de la muestra entre LV inflflujo y la salida. Tenga en cuenta las válvulas mitral y las señales de cierre de la válvula aórtica y de apertura. Se mide el tiempo de relajación isovolumétrica, tiempo de contracción isovolumétrica, y el tiempo de eyección ventricular izquierda (Figura 10).
8. Realizar Doppler tisular (TDI) del anillo mitral en el eje largo apical. Pulse la tecla de control TDI y colocar el volumen de la muestra en la cara medial del anillo mitral. Asegúrese de que el volumen de la muestra no invada las valvas mitrales. Mantener el tamaño del volumen de muestra del Doppler entre 0,21 mm y 0,27 mm. Medir la velocidad diastólica precoz (e ') del anillo mitral (Figura 11).

8. Pasos finales

1. Revisar las imágenes adquiridas. Cerciorarse de que se han obtenido todas las imágenes necesarias.
2. Eliminar cualquier exceso de gel de ultrasonido del pecho del ratón y retire con cuidado la cinta que sujeta al animal en su lugar. Apagar la anestesia.
3. Colocar el animal sobre una toalla de papel absorbente(No ropa de cama, que puede ser aspirado o puede bloquear las vías respiratorias durante la recuperación). Observe que el animal hasta que se alcance decúbito esternal. Si la anestesia se administra adecuadamente, la recuperación debe ocurrir dentro de 30 a 60 s.

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Resultados

Los ejemplos de las imágenes que se obtienen de forma rutinaria a partir de imágenes de ultrasonido cardiaco animales se incluyen en este manuscrito. Se proporciona una ilustración de la colocación del transductor en el pecho del animal para dar al lector una comprensión clara de que el transductor se coloca para obtener las imágenes como se describe. Una fotografía del laboratorio de ultrasonido puesta a punto también se incluye para destacar la importancia de los equipos adecua...

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Discusión

La inducción de la anestesia

adecuado de inducción y mantenimiento de la anestesia es fundamental para la evaluación precisa de los cambios en las válvulas del corazón y la función cardiaca en ratones. Dada la rápida inducción de la anestesia con isoflurano y provocada por el tiempo relativamente largo de lavado de este anestésico después de la anestesia profunda, no utilizamos una cámara de anestesia autónomo para la inducción. En su lugar, como se ha indicado en ...

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Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
High resolution ultrasound machine	VisualSonics, Fujifilm	Vevo 2100
Isoflurane diffuser (capable of delivering 1 % to 1.5 % isoflurane mixed with 1 L/min 100% O2	VisualSonics, Fujifilm	N/A
Transducers for small mice (550D) or larger mice (400)	MicroScan, VisualSonics, Fujifilm	MS 550D, MS 400
Animal platform	VisualSonics, Fujifilm	11503
Advanced physiological monitoring unit	VisualSonics, Fujifilm	N/A
Isoflurane	Terrell	NDC 66794-019-10
Nose cone and tubing connected to isoflurane diffuser and 100% O2	Custom Engineered in-house	--
Hair razor	Andis Super AGR+ vet pack clipper	AD65340
Ultrasound gel	Parker Laboratories	REF 01-08
Electrode gel	Parker Laboratories	REF 15-25
Adhesive tapes	Fisher Laboratories	1590120B
Paper towels