Laboratorio de cría de moscas de los establos y otros dípteros afines

Resumen

Se presenta un procedimiento para la cría de moscas de los establos (Stomoxys calcitrans). El procedimiento utiliza materiales localmente disponibles para equipos, insumos y componentes de la dieta.

Resumen

Moscas de los establos, Stomoxys calcitrans, son parásitos serios de la ganadería, los seres humanos, animales y vida silvestre en todo el mundo. Durante los últimos 20 años, cambios en las prácticas agronómicas dio lugar a graves brotes de mosca del establo en varios países. Estos brotes interrumpen la producción pecuaria y recreación humana, dando por resultado demandas del público para aumentar los esfuerzos de investigación y manejo de esta plaga. Se presenta un procedimiento simple y barato para la cría de moscas de los establos para los estudios de laboratorio. El procedimiento utiliza insumos, equipos y componentes de la dieta disponibles localmente. El procedimiento puede ser adaptado para la cría de otras moscas afines como mosca de la cara (Musca autumnalis), mosca de los cuernos (Haematobia irritans), mosca doméstica (Musca domestica). El procedimiento produce Moscas mosca estable con un promedio de 12,5 mg y ~ 35% de huevo para la supervivencia de adultos. Aproximadamente 3000 moscas se producen en cada pan.

Introducción

Moscas de los establos, Stomoxys calcitrans (L.), son moscas hematófagas cuyas dolorosas picaduras alteran el comportamiento de pastoreo de ganado, causan dolor y sufrimiento a los animales del compañero e interrumpir actividades recreativas humanas en todo el mundo. Moscas de los establos se convierten en la fermentación de materia vegetal, a menudo contaminada con desechos animales. Cultivos y prácticas agronómicas cambiantes han producido graves brotes de mosca del establo en residuos de cosecha, hortalizas en Australia¹, caña de azúcar en Brasil²y la piña en Costa Rica³. Aunque solo 14 estables moscas por animal se consideran el umbral económico⁴, se hicieron observaciones de más de 2.000 moscas por animal durante brotes recientes⁵. Esos niveles de infestación reducen la productividad de host para cerca de cero y pueden causar mortalidad⁶. Como resultado de agronómicamente asociados brotes, mosca del establo está recibiendo renovado interés y demanda de las colonias de laboratorio ha aumentado dramáticamente.

En cuanto a todos los holometamorphic insectos, moscas de los establos obtención todos los nutrientes requeridos para el crecimiento durante la etapa larval o inmaduro. Por lo tanto, un componente importante de un sistema de cría es la dieta larvaria o sustrato. Se han observado larvas de mosca estables en una amplia gama de substratos en el campo⁷ y son dependientes de la comunidad microbiana del sustrato^8,9. Sustratos naturales de larvas se componen principalmente de descomposición o fermentación de materiales vegetativos a menudo contaminados con desechos nitrogenados.

Para la cría de laboratorio, sustratos larvas mosca estables se componen generalmente de un material vegetativo y una fuente de nitrógeno agregado. Numerosos materiales se han utilizado para las dietas de larvas mosca estables. La primera dieta larval mímico substratos naturales e incluye fermentación de paja de la avena y de^10,de estiércol de caballo o vaca¹¹. Fuentes de carbohidratos incluyen trigo salvado^12,13,14, alfalfa comida^12,13,14 y una formulación comercial desarrollado por especialidades químicas Fabricantes Asociación (CSMA, salvado de trigo 33%, 27% harina de alfalfa, levadura de cerveza de 40% gránulos)^13,14,15,16. Fuentes de nitrógeno incluyen levaduras suspensión¹², harina y bicarbonato de amonio¹⁷. Materias de carga inertes se incluyen a menudo en dietas incluyendo avena cascos¹², bagazo¹³, vermiculita¹⁶, virutas de madera^13,18 y cáscaras de maní pildoradas¹⁴.

Un objetivo primario de la cría de laboratorio es un producto que es como fisiológicamente similar a "wild type" como sea posible a fin de que experimentos de laboratorio producen resultados que reflejan los de poblaciones de campo. Esto requiere que en la cría y selección se reducen al mínimo para mantener la genética diversidad y recursos nutricionales ser comparables a ésos en el campo. Los objetivos secundarios son minimizar gastos y mano de obra. Un componente importante de minimizar los gastos es el uso de componentes de la dieta disponibles localmente. La mosca de los establos presentada sistema de crianza fue desarrollada para cumplir con estos objetivos.

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Protocolo

1. huevo colección (figura 1)

1. Preparar aplaudiéndote, coloque un extremo del paño en ~ 500 mL vaso de precipitados lleno de agua caliente (~ 40 ° C). Sobreponga los lados de la Copa y se fijan con una banda elástica. Doblar el extremo suelto de la tela sobre la parte superior de la Copa.
2. Lugar Copa egging en jaula de moscas de 8 – 10 días para la hembras grávidas ~ 2 h. estable vuela se ovipositan en el paño.
3. Retire la taza compañeros de jaula y enjuague los huevos fuera de la tela egging en una olla pequeña con botella de lavado del apretón.

2. preparar Pan de cría Larval

1. Preparar medio (cantidades para 1 bandeja de cría)
   1. Combinar el salvado de trigo (500 g), virutas de madera (200 g) y harina de pescado (115 g) de pan del plato de plástico de 10 L y mezclar bien.
   2. Añadir bicarbonato de amonio (50 g) agua (~ 25 ° C, 1600 mL) y mezcle hasta que se disuelva.
   3. Agregue una solución de agua a los ingredientes secos y mezclar para no unwetted material. Nivel medio en pan pero no comprimir.
2. Agregar los huevos de mosca estables
   1. Hacer un surco poco profundo en medio de la longitud de la bandeja.
   2. Depositar 1 mL de huevos de mosca estables (~ 8.000 huevos) en surco con pipeta de huevo (figura 2).
      Nota: Pipeta de huevo hecho cortando una pipeta graduada de plástico en el punto deseado, colocar 100 malla pantalla y pega pipeta volver junto.
   3. Cubra los huevos con una capa delgada del medio para evitar la desecación.
   4. Cubrir la cacerola con funda de almohada, cerrar con una banda de caucho y la etiqueta. Coloque bandejas en sala de larvas (23 ± 2 ° C, 30-50% HR y 12:12 [l:] h fotoperiodo).
      Nota: Desarrollo Larval toma 10-14 días desde el momento de la oviposición.

3. procesamiento pupa, larvas hacia el borde del medio 7-9 días después Oviposition y Pupariate por días 13 o 14

1. Valores de Scoop, situada principalmente alrededor de los bordes de la bandeja debajo de la costra que forma sobre la superficie del medio, hacia fuera y coloca en una cacerola limpia.
2. Llene la bandeja, con valores, ½ para ¾ de agua. Romper grumos de moscas y el medio. Componentes de salvado y proteína de trigo del medio se hunden mientras que valores > 1 día de viejo flotador¹⁹.
3. Quitar materiales flotantes, moscas y algunos componentes del medio con un colador y lavar a través de una serie de tamices (#5, #7, #12, #20) para quitar el restante medio. El tamiz #12 recoge los valores y el #20 mantiene residuos entren en el desagüe. Valores entre tamices con un rociador Fregadero de lavado.
4. Aclarar valores, en el tamiz #12, en un recipiente limpio. Llene la olla a ½ lleno de agua. Vierta moscas flotantes en un colador y deje que el agua sobrante al desagüe.
5. Transferencia de escurrir moscas a pantalla de secado con un ventilador y dejar hasta que se seque (figura 3).

4. estante pupa, un método alternativo para la recolección de moscas es con una pupa del estante¹⁸

Nota: El estante se hace de un trozo de plástico corte desde el extremo de una bandeja de plato 10 L (10,2 cm x 10,2 cm de ancho x 31,9 cm largo alto).

1. Preparar el medio como se describe en 2.1. Forma cónica medio pan de ~2.5 cm profundo en un extremo ~7.5 cm profundidad en el otro.
2. Coloque el estante en el medio en el extremo poco profundo del pan cría y cinta para evitar que las larvas arrastrándose junto a la plataforma (figura 4).
   1. Saturar la esponja (~14.5 x 9.0 x 4.5 cm³, celulosa regenerada) y envolverlo en un paño empapado de agua (30,5 x 42 cm², algodón) y un lugar en el estante cerca de media pulgada desde el medio.
3. Agregue los huevos como se describe en 2.2 y proceder como antes.
   1. Asegurarse de cacerolas de todos los días que la esponja permanezca húmeda.
4. Valores de enjuague de la plataforma, esponja y trapo en un plato limpio pan y vierta en el colador 14 días después de la oviposición.

5. Control de calidad

1. Pesar todos los valores producidos en bandeja (peso total).
2. Aislar 100 moscas, pesar y colocar en una placa de Petri de 9 cm.
3. Cuenta y sexo adultos ~ 5-8 días más adelante para determinar la velocidad de emergencia y la sex ratio. Tienda platos de Petri con adultos emergidos en un congelador para contar en una fecha posterior si es necesario. Moscas son sexadas por la forma de sus ojos y el ancho de la placa fronto-orbital²⁰ o genitales bajo magnificación baja.
4. Registro de peso total, peso de 100 moscas y el número de emergidos machos y hembras.

6. preparación de sangre

1. Recoger sangre bovina fresca de un matadero local en cubetas de 19 L que contiene 70 g de citrato de sodio dihidrato tribásico en 500 mL de agua. Remover vigorosamente por 5 a 10 min de la sangre y regresó al laboratorio.
2. Sangre de tensión a través de un colador para quitar coágulos y repartido en los envases de 2 L, etiqueta con la fecha de colección y tienda en un congelador (-20 ° C).
3. Retire el recipiente de lugar en refrigerador y congelador 2 días antes de la necesaria. Sangre puede utilizarse durante 2 semanas una vez descongeladas y almacenadas en el congelador hasta por 1 año.

7. adulto mantenimiento

1. Preparación de jaulas, parte inferior de jaula de línea con papel de estraza para facilitar la limpieza.
2. Colocar 50 g de pupas de mosca estables seco (~ 3.500) en cada jaula. Adultos eclose unas horas a un par de días después de la transformación pupal.
3. Lugar fresco de la sangre había empapada femenino servilleta encima de cada jaula para la alimentación. Iniciar la alimentación dentro de las 24 h de eclosión adulto y repetir diariamente hasta un día antes de la oviposición (9 – 10 días después de la emergencia).
4. Después de la oviposición (sección 1), coloque la jaula en el congelador durante 4-8 h y a continuación limpie quitando el papel, aclara Patricio desde los lados y el piso con agua caliente y restregar todas las superficies con detergente y lejía. Enjuagar las jaulas con agua caliente y deje que se seque.

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Resultados

Larvas pupariate 10 – 14 días y los adultos emergen de 14 a 16 días después de la oviposición. Tiempo de generación, huevo a huevo, es ~ 24 días. Datos de cría para mayo de 2013 a de 2017 de enero con tres diferentes agentes aumentadores de volumen y dos colonias se presentan en la figura 5. Cottonwood dio el mejor rendimiento, 3867 ±1442 ( ± desviación estándar) pesa 12,5 mg 1...

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Discusión

Moscas de los establos se encuentran en una amplia variedad de substratos en la naturaleza y pueden criarse en muchos tipos de medios de comunicación en el laboratorio. Se han utilizado virutas de madera y vermiculita como agentes de carga. La vermiculita funcionó bien, pero separar valores de cría medio difícil y caro (~$0.60/pan). Posiblemente por el mayor rigor de separar los valores del medio, eclosión también fue menor con vermiculita, 57% vs. 75% de virutas de madera. Virutas de álamo eran comparables a la v...

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Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
Diamalt	Premier Malt Products, Inc., Saddle Brook, NJ	2540
CSMA Fly media	Purina Animal Nutrition, Arden Hills, MN	5S6Z
Thin Maxi Pad	The Tranzonic Co., Cleveland, OH, USA	5001M
Calf Manna	MannaPro, Chesterfield, MO, USA	Manna Pro
Ammonium Bicarbonate	Spectrum Chemical Manufacturing Corp, Gardena, CA	A1125
Wheat bran, Coarse	Siemer Milling Company, Teutopolis, IL
Wood shavings	Tractor Supply Company, Brentwood, TN	502770699
Fishmeal	Consumer Supply Distributing, North Sioux City, SD	F1550
Adult cages	All Aluminum Window Company, Lincoln, Ne	Custom	45 × 45 × 45 cm, 18 × 16 mesh aluminum screen, stockinette access
9 × 28 cm black cotton cloth	Robert Kaufman Fabrics, Los Angeles, CA	K040-114	Egging cloth
10 L plastic dish pans	Rubbermaid, Saratoga Springs, NY	FG2951ARWHT	Larval pans
Stockinette, Cotton, 12 inch x 25 yard roll	Tex-Care Medical Company, Burlington, NC	91311-225