Evaluación de la deposición pulmonar regional utilizando modelos pulmonares impresos en 3D específicos del paciente

Resumen

Presentamos un método in vitro de alto rendimiento para cuantificar la deposición pulmonar regional a nivel del lóbulo utilizando modelos pulmonares impresos en 3D derivados de tomografía computarizada con perfiles de flujo de aire ajustable.

Resumen

El desarrollo de terapias específicas para enfermedades pulmonares está limitado por la disponibilidad de métodos de prueba preclínicos con la capacidad de predecir el suministro regional de aerosoles. Aprovechando la impresión 3D para generar modelos pulmonares específicos del paciente, delineamos el diseño de una configuración experimental in vitro de alto rendimiento para cuantificar la deposición pulmonar lobular. Este sistema está fabricado con una combinación de componentes impresos 3D y disponibles comercialmente y permite controlar de forma independiente el caudal a través de cada lóbulo del pulmón. La entrega de aerosoles fluorescentes a cada lóbulo se mide mediante microscopía de fluorescencia. Este protocolo tiene el potencial de promover el crecimiento de la medicina personalizada para enfermedades respiratorias a través de su capacidad para modelar una amplia gama de estados de demografía y enfermedades de los pacientes. Tanto la geometría del modelo pulmonar impreso en 3D como el ajuste del perfil de flujo de aire se pueden modular fácilmente para reflejar datos clínicos de pacientes con diferentes edades, raza y género. Los dispositivos de administración de fármacos clínicamente relevantes, como el tubo endotraqueal que se muestra aquí, se pueden incorporar a la configuración de pruebas para predecir con mayor precisión la capacidad de un dispositivo para dirigir el parto terapéutico a una región enferma del pulmón. La versatilidad de esta configuración experimental permite personalizarla para reflejar multitud de condiciones de inhalación, mejorando el rigor de las pruebas terapéuticas preclínicas.

Introducción

Muchas enfermedades pulmonares como el cáncer de pulmón y la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) presentan diferencias regionales en las características de la enfermedad; sin embargo, hay una falta de técnicas terapéuticas disponibles para el tratamiento de fármacos dirigidos a sólo las regiones enfermas del pulmón^1. Múltiples modelos dinámicos de fluido computacional (CFD) han demostrado que es posible modular los perfiles de deposición de fármacos mediante la identificación de agilizaciónes específicas en el pulmón^2,3. El desarrollo tanto de inhaladores como de adaptadores de tubo endotraqueal (ET) con capacidades de segmentación regionales está en marcha en nuestro laboratorio para controlar la distribución de aerosoles a las regiones pulmonares enfermas. La extensión de estos principios al uso clínico está limitada por la capacidad actual de pruebas preclínicas. La ubicación precisa de un medicamento deposita dentro del pulmón se sabe que es el mejor predictor de eficacia; sin embargo, las evaluaciones farmacéuticas actuales de las terapias inhalables se predicen con mayor frecuencia utilizando correlaciones in vitro-in vivo del tamaño de las partículas para limitarse a aproximar la deposición⁴. Esta técnica no permite ningún análisis espacial para determinar los efectos de diferentes geometrías de las vías respiratorias en la distribución regional a través de los diversos lóbulos del pulmón. Además, esta prueba carece de geometrías pulmonares anatómicamente precisas, que los investigadores han demostrado que pueden tener un impacto significativo en los perfiles de deposición⁵. Se han hecho algunos esfuerzos para incorporar geometrías pulmonares específicas del paciente en los protocolos de prueba a través de la adición de las vías respiratorias superiores; sin embargo, la mayoría de estos enfoques muestra la entrega de aerosoles a varias generaciones del pulmón en lugar de cada lóbulo pulmonar^6,7,8. El siguiente protocolo presenta un método de alto rendimiento para generar modelos pulmonares específicos del paciente con capacidad para cuantificar la deposición relativa de partículas en cada uno de los cinco lóbulos del pulmón^9.

Los pulmones modelo anatómicamente precisos son generados por la impresión 3D de tomografía computarizada (TC) del paciente. Cuando se utiliza junto con un sistema de flujo fácilmente ensamblado, los caudales relativos a través de cada uno de los lóbulos del pulmón modelo se pueden controlar y adaptar de forma independiente para imitar los de diferentes estados de demografía y/o enfermedad de los pacientes. Con este método, los investigadores pueden probar la eficacia de los métodos terapéuticos potenciales en una geometría pulmonar relevante y correlacionar el rendimiento de cada método con la progresión de la morfología enferma. Aquí, dos diseños de dispositivos desarrollados en nuestro laboratorio son probados por su capacidad para aumentar la deposición en un lóbulo pulmonar deseado mediante el control de la ubicación de la liberación de aerosoles en la boca o la tráquea. Este protocolo también tiene el potencial de afectar significativamente el desarrollo de procedimientos personalizados para los pacientes facilitando la rápida predicción de la eficacia del tratamiento en un pulmón modelo específico de los datos de la tomografía computarizada de ese paciente.

Protocolo

1. Preparación de componentes experimentales impresos en 3D

NOTA: Todo el software utilizado en el protocolo se indica en la Tabla de materiales. Además, el software de corte utilizado es específico de la impresora 3D que aparece en la Tabla de Materiales; sin embargo, este protocolo se puede extender a una amplia gama de impresoras 3D de estereolitografía (SLA).

1. Convierta las tomografías computarizadas del paciente en objetos 3D (archivos .stl).
   NOTA: Para una discusión más detallada de las características geométricas del modelo pulmonar específico utilizado en estos estudios, consulte Feng et al.⁵.
   1. Renderice tomografías computarizadas en un objeto 3D mediante un software de tomografía computarizada (consulte Tabla de materiales). Abra la tomografía computarizada y cree una máscara en el espacio aéreo utilizando la herramienta Umbral con un ajuste en el rango de -800 a -1000. Con la herramienta Vista previa 3D, vea la representación 3D y exporte el objeto (Archivo | Export )como un archivo .stl.
   2. Importación de los archivos en el software de edición de malla (consulte Tabla de materiales),elimine las operaciones irregulares mediante la herramienta Seleccionar (Esculpir | Pinceles: | "Encogimiento/Suavizado" Propiedades: Resistencia (50), Tamaño (10), Profundidad(0)). Suavizar la superficie(Ctrl+A | Deformar | | suave Suavizado (0.2), Escala de suavizado (1)).
   3. En el software de edición de malla, extienda la pared de estos objetos 2 mm(Ctrl+A | Editar | Desfase) y permita que el objeto interno permanezca hueco de tal forma que sólo quede el muro. Cortar el objeto (Seleccione | Editar | Corte plano) en la tráquea para formar una entrada y en las generaciones 2 o 3 donde el objeto se ramifica a cada lóbulo para crear salidas (Figura 1A).
      NOTA: El espesor de 2 mm se eligió en función de los tamaños de función aceptables especificados por el fabricante de la impresora 3D que aparece en la Tabla de materiales. Este espesor se puede ajustar en función de las especificaciones de la impresora 3D disponibles si se mantiene la geometría interior del modelo.
2. Modifique las geometrías de salida del modelo pulmonar del paciente para que sean compatibles con los componentes de la tapa de salida del lóbulo previamente diseñados(Figura 1B,C)enumerados en la Tabla de Materiales.
   1. Importar el objeto 3D, que replica la tomografía computarizada en el interior, tiene un espesor de pared de 2 mm, y está abierto en la entrada y las salidas, en el software de modelado 3D (ver Tabla de materiales)como cuerpo sólido(abierto | Archivos de malla | Opciones | Cuerpo sólido).
   2. Crear un plano basado en una cara en cada una de las salidas (Insertar | Geometría de referencia | Plano). Con la herramienta de empalme, trace la pared interior y la pared exterior de la toma de corriente en un croquis del plano(Croquis | Spline).
   3. Loft un cilindro (OD 18,5 mm, ID 12,5 mm, H 15,15 mm) para conectarse a la pared interior y exterior del modelo, extendiendo así la salida para que sea uniforme en cada lóbulo(características | Jefe/Base Elevado). Agregue una muesca alrededor del borde de la toma de corriente para que coincida con la tapa(operaciones | Corte extruido | Desplazamiento).
      NOTA: La tapa (Figura 1D) es un cilindro hueco que coincide con las dimensiones de las salidas y tiene un estante que se interconecta con la muesca de la salida del modelo. Un extremo de la tapa se bloquea de tal forma que el ID es más pequeño que el resto de la pieza, esto garantiza un ajuste ajustado alrededor de la conexión de tubo de púas (Figura 1E). La conexión de tubo de púas es una forma de cono de púas de tal manera que el púas se ajusta a través de la abertura de la tapa, pero el resto de la pieza no, lo que permite que la conexión de tubo se ajuste de forma segura en la tapa. Por lo tanto, la tapa se ajusta firmemente alrededor tanto de la conexión de tubo de púas como del modelo pulmonar(Figura 1F,G).
   4. Modifique la entrada del modelo pulmonar en función de las condiciones experimentales deseadas. Las regiones de garganta y glottal se pueden incluir para imitar a un paciente que puede respirar por sí solo(Figura 1B). Las regiones por encima de la tráquea se pueden quitar utilizando un corte extruido para imitar a un paciente intubado en el soporte del respirador(características | Corte extruido) (Figura 1C).
3. Oriente y admita componentes experimentales en el software de corte proporcionado por el fabricante de impresoras 3D.
   1. Importe archivos de pieza 3D en el software de corte de impresora 3D y elija la resina adecuada. Utilice una resina dura para imprimir los modelos pulmonares y las conexiones de tubo de púas, y una resina suave para imprimir las tapas.
      NOTA: La resina utilizada para imprimir las tapas debe tener propiedades elásticas para permitirle estirarse sobre la salida del lóbulo y crear un sello hermético.
   2. Establezca la orientación de la pieza de forma que se minimicen las "islas" y los volúmenes no ventilados. La mejor orientación para los modelos pulmonares es con las salidas de lóbulo mirando lejos de la plataforma de impresión. Asegúrese de que tanto las conexiones de tubo de púas como las tapas tengan las partes más anchas que dan a la plataforma de impresión.
      NOTA: Se pueden ver sectores individuales para comprobar la apariencia de "islas", secciones de la pieza que aparecen por primera vez en un sector sin estar conectadas al cuerpo principal de la pieza. La función de revisión se puede utilizar para comprobar si hay rodajas con volúmenes no ventilados, áreas donde la resina no curada puede quedar atrapada dentro de la pieza durante la impresión. Tanto los volúmenes "islands" como los no ventilados disminuyen la calidad de impresión y podrían provocar un fallo en la impresión.
   3. Al ver cada sector individualmente, agregue soportes a las "islas" restantes de la pieza, así como a cualquier área con voladizos significativos. Exporte y vea los sectores de la impresión para comprobar que todas las áreas son compatibles correctamente.
4. Imprima componentes experimentales y complete el postprocesamiento según las instrucciones del fabricante.
   NOTA: Todos los pasos posteriores al procesamiento descritos a continuación son específicos de la impresora 3D que aparece en la Tabla de materiales. Al utilizar impresoras o materiales alternativos, ajuste estos pasos para reflejar las instrucciones del fabricante.
   1. Para piezas impresas en resina blanda, lave con ≥99% de pureza de alcohol isopropílico (IPA) para eliminar el exceso de resina no curada y cura térmica en un horno de convección durante 8 h de acuerdo con las especificaciones del fabricante.
      NOTA: Las piezas impresas en resina blanda pueden ser muy delicadas inmediatamente después de la impresión, por lo que se debe tener especial cuidado durante los pasos de limpieza. La exposición al IAP debe mantenerse por debajo del límite de exposición al disolvente del material para evitar la degradación de las piezas.
   2. Para piezas impresas en resina dura, lávese con IPA para eliminar el exceso de resina sin curar y curar en un horno UV (luz de 365 nm a 5-10 mW/cm²⁾durante 1 min por lado.
      NOTA: Para evaluar la precisión de la réplica impresa en 3D, se recomienda utilizar el escaneo μCT de la pieza impresa y el software de tomografía computarizada para comparar, cuantitativamente, las variaciones entre la representación 3D original y la réplica impresa en 3D.

2. Montaje del sistema de tubos para el control del caudal

1. Atornille los accesorios de tubo de púas de 1/4" en el lado del colector con 6 puertos(Figura 2A-6)y un tubo de púas de 3/8" que se ajuste al puerto restante.
2. Corte el tubo de 1/4" a las longitudes deseadas e inserte en cada extremo de las válvulas push-to-connect(Figura 2A-5). Conecte cada válvula a uno de los accesorios de 1/4" insertados en el colector.
3. Conecte un medidor de flujo(Figura 2A-4)al otro extremo de cada válvula.
4. Coloque el sistema de tubos en la parte superior de la tabla de madera de modo que el accesorio único de 3/8" del colector se extienda más allá del borde del tablero. Para fijar en su lugar, añadir dos tornillos a un lado de la placa de madera y fijar el colector a los tornillos utilizando alambre.
5. Añadir cuatro tornillos colocados alrededor de cada una de las válvulas y medidores de flujo y utilizar alambre para fijar cada uno de ellos a la placa de madera(Figura 2E).
6. Con aproximadamente 6" de tubo de identificación de 3/8", conecte el colector a un filtro de grado de vacío de tamaño de poro de 0,1 μm en línea. Conecte el otro extremo del filtro al controlador de flujo utilizando otro tubo de ID de 6" de 3/8"
   NOTA: El sistema de tubos solo debe montarse una vez.

3. Montaje de tapas de salida de lóbulo con modelo pulmonar del paciente

NOTA: Esta parte del protocolo debe completarse antes de cada ejecución experimental.

1. Inserte la conexión de tubo de púas en la tapa con boquilla que sobresale a través de la abertura en la base de la tapa. En primer lugar, inserte un extremo de la base ovalada de conexión de tubo de púas en la tapa. Luego, estira cuidadosamente la tapa flexible sobre el otro extremo de la base ovalada, teniendo especial cuidado de no romper la base delgada.
   NOTA: Las tapas recién impresas pueden ser más rígidas de lo deseado y se pueden estirar corriendo dos dedos a lo largo del interior de la tapa.
2. Corte el papel filtrante de 10 μm de forma que sea ligeramente más grande que el área de salida. Doble el papel de filtro sobre la toma del lóbulo y sujete en su lugar con una mano.
3. Por otro lado, utilice pinzas para estirar la tapa con conexión de tubo de púas sobre la salida. Presione la tapa hacia abajo hasta que la muesca de la tapa coincida con la muesca correspondiente en la salida del lóbulo (Figura 2C).
   NOTA: Rasgar el papel filtrante en este paso puede invalidar los resultados, por lo que se debe tener especial cuidado para evitar la fuerza excesiva al presionar la tapa en la salida.
4. Repita para todas las salidas de lóbulos restantes (Figura 2D).

4. Generación de perfil de flujo de aire clínicamente relevante

NOTA: Esta parte del protocolo debe completarse antes de cada ejecución experimental.

1. Conecte cada salida del lóbulo modelo pulmonar al tubo del medidor de flujo y la válvula correspondientes, teniendo cuidado de no aplicar demasiada presión lateral a la conexión de tubo de púas. Conecte el medidor de flujo electrónico a la entrada de boca del modelo pulmonar para medir el caudal total de aire al modelo pulmonar.
2. Encienda el controlador de flujo(Figura 2A-7)y la bomba de vacío (Figura 2A-8). Seleccione el ajuste "configuración de prueba" en el controlador de flujo y aumente lentamente el caudal hasta que el medidor de flujo electrónico muestre el caudal total deseado.
3. Con las válvulas(Figura 2E-5),ajuste el caudal a través de cada uno de los cinco lóbulos pulmonares: Superior derecho (RU), Medio derecho (RM), Inferior derecho (RL), Superior izquierdo (LU) e Inferior izquierdo (LL). Una vez que los caudales del lóbulo mostrados en los medidores de flujo(Figura 2E-4)sean constantes al valor deseado, compruebe de nuevo el caudal total en el medidor de flujo electrónico para verificar que no hay fugas en el sistema.
   1. Si hay una discrepancia en el caudal total, baje el caudal con el controlador de flujo, fije todas las válvulas a la configuración completamente abierta y repita los pasos 4.2 y 4.3.
      NOTA: Los resultados presentados aquí se obtuvieron utilizando perfiles de flujo de aire basados en datos reportados por Sul et al.¹⁰ Estas fracciones de flujo de barra de lobar se calcularon utilizando imágenes de tomografía computarizada en rodajas finas de pulmones de pacientes a plena inspiración y expiración, comparando los cambios relativos en el volumen de cada lóbulo pulmonar. Los resultados se presentan para dos condiciones de flujo distintas, ambas a un caudal total de entrada de 1 L/min. El perfil de flujo de salida del lóbulo pulmonar sano se distribuye a cada toma por el siguiente porcentaje del flujo de entrada: LL-23,7%, LU-23,7%, RL-18,7%, RM-14,0%, RU-20,3%. El perfil de flujo de salida del lóbulo COPD se distribuye entre cada toma por el siguiente porcentaje del flujo de entrada: LL-10,0%, LU-29,0%, RL-13,0%, RM-5,0%, RU-43,0%^9,10.
4. Salga de la función " configuración deprueba" del controlador de flujo, pero deje la bomba de vacío encendida.
   NOTA: Apagar la bomba de vacío entre ajustar los caudales y realizar el experimento de deposición puede provocar imprecisiones en el perfil de flujo generado. Se recomienda dejar la bomba de vacío encendida una vez que se establezcan los caudales deseados para completar las pruebas de deposición de aerosoles.

5. Entrega de aerosol al modelo pulmonar

NOTA: Los experimentos deben realizarse en una campana de humo con la faja cerrada para minimizar la exposición a cualquier aerosol generado por el nebulizador.

1. Llene el nebulizador con la solución de las partículas fluorescentes deseadas(Figura 2A-1)y conéctese a la entrada del modelo pulmonar (Figura 2B).
   NOTA: Los resultados presentados aquí se obtuvieron utilizando 30 ml de una dilución de 1:100 de partículas de poliestireno fluorescente de 1 μm en metanol.
   1. Para validar la configuración experimental, conecte el nebulizador directamente a la entrada del modelo pulmonar sin ningún dispositivo de segmentación.
   2. Para medir la eficacia de un dispositivo de segmentación, conecte el nebulizador al dispositivo e inserte el dispositivo en el modelo pulmonar.
2. Conecte la línea de aire comprimido al nebulizador y cierre la faja del capó del humo tanto como sea posible.
3. Establezca el controlador de flujo para que se ejecute para una prueba de 10 s. Antes de pulsar el inicio, abra ligeramente la válvula de aire comprimido para comenzar a generar un aerosol dentro del nebulizador.
4. Pulse start en el controlador de flujo y abra inmediatamente la válvula de aire comprimido completamente. Una vez que el controlador de flujo alcance aproximadamente 9 s, comience a cerrar la válvula de aire comprimido.
5. Una vez que la válvula de aire comprimido esté completamente cerrada, desconecte el nebulizador de la línea de aire comprimido, cierre completamente la faja del capó del humo, apague la bomba de vacío y deje que los aerosoles se despejen de la campana del humo durante unos 10 minutos.
   NOTA: Es importante apagar la bomba de vacío después de completar una carrera para evitar que se acumule un vacío dentro del sistema de tuberías.
6. Después de esperar una cantidad suficiente de tiempo, desconecte el modelo pulmonar del sistema de tuberías, teniendo especial cuidado de no romper las conexiones de tubo de púas.
7. Retire las tapas de salida del lóbulo ejecutando un par de pinzas debajo del borde de la tapa y levantándola suavemente del modelo pulmonar.
8. Retire el papel filtrante de la tapa y colóquelo en una placa de 24 pozos con el lado en el que las partículas depositadas están en la parte inferior mirando hacia el pozo de la placa. Repita para las salidas restantes y etiquete el pozo correspondiente a cada lóbulo.
   NOTA: Para evitar que cualquier deposición de partículas residuales afecte a experimentos posteriores, es importante enjuagar tanto el modelo pulmonar como los componentes de la tapa con IPA o disolvente adecuado entre carreras. Esto se puede recoger e incluir en el análisis como se desee. Además, se mantiene un registro para asegurarse de que todas las réplicas utilizadas se han expuesto mínimamente a IPA para mantener la integridad de la pieza y se recomienda la inspección de piezas visuales antes de su uso.

6. Imagen del papel filtrante de salida

1. Coloque la placa del pozo en el microscopio digital de fluorescencia y ajuste el microscopio a una ampliación de 4x y al canal de fluorescencia adecuado.
2. Identifique visualmente qué papel filtrante del lóbulo tiene la mayor cantidad de deposición de partículas y utilice la función"Exponer automáticamente". Tome nota de los valores de tiempo de exposición e integración resultantes.
3. Aplique esta exposición a todos los filtros para la ejecución y evalúe si la configuración produce una imagen satisfactoria para todas las áreas de alta deposición de los filtros.
   NOTA: La configuración de enfoque se puede cambiar de filtro a filtro; sin embargo, todos los filtros para una ejecución determinada deben analizarse en la misma configuración de exposición. Sólo es posible tener un marco de enfoque a la vez, por lo que las curvas o desgarros en el papel filtrante pueden evitar que todas las partículas depositadas en la vista estén enfocadas. Esto se puede evitar asegurándose de que el papel filtrante esté plano contra la parte inferior de la placa del pozo.
4. Tome al menos tres imágenes del papel filtrante de cada lóbulo en ubicaciones aleatorias y guárdelas como archivos de .tiff.

7. Cuantificación de la deposición de partículas

1. Importe todas las imágenes de papel de filtro para una ejecución determinada en una sesión de ImageJ.
2. Cambie el tipo de cada imagen a 8 bits seleccionando Imagen | Tipo | 8 bits.
3. Abra la imagen con la mayor fluorescencia y seleccione Imagen | Ajustar | Umbral para abrir una ventana de umbral. Ajuste los valores de umbral para minimizar la señal de fondo del papel filtrante y defina claramente los bordes de las partículas. Consulte la Figura 3 para obtener representaciones de umbrales de buena calidad y mala calidad.
   NOTA: Para los filtros con altos niveles de deposición, se puede observar una "corona" de fluorescencia, causada por la difracción de la luz por las fibras de papel filtrante, alrededor de grandes agrupaciones de partículas. Al umbral de estas imágenes, un rango demasiado grande muestra pequeños puntos o formas "similares a plumas" alrededor de estas agrupaciones, como se observa en las imágenes de umbral "pobres" en la Figura 3. Esto se puede mejorar aumentando gradualmente el límite inferior del umbral hasta que la señal de las fibras de papel filtrante se minimice sin ocultar la señal de las propias partículas.
4. Propague los ajustes de umbral de la imagen de fluorescencia más alta a todas las demás imágenes.
5. Cuantifique el número de partículas y el área fluorescente total seleccionando Analizar | Analizar partículas.
   NOTA: Los conjuntos de datos se comparan con la prueba de comparaciones múltiples de Sidak y una ANOVA bidireccional. Además, la deposición en solo el lóbulo de interés se compara con una prueba T de estudiante que asume la misma varianza.

Resultados

Las partículas en este rango de tamaño (1-5 μm) y las condiciones de flujo (1-10 L/min) siguen las líneas de flujo de fluidos basadas tanto en su número teórico de Stokes como en los datos in vivo; por lo tanto, en ausencia de un dispositivo de entrega dirigido, se espera que las partículas liberadas en el modelo pulmonar se depositen de acuerdo con el porcentaje de flujo de aire total desviado a cada lóbulo. Las cantidades relativas de administración de partículas a cada lóbulo se pueden comparar con los dato...

Discusión

El dispositivo actual de última generación para pruebas farmacéuticas pulmonares de una dosis completa de inhalación es el Next Generator Impactr (NGI), que mide el diámetro aerodinámico de un aerosol^4. Estos datos de tamaño se utilizan entonces para predecir la generación pulmonar a la que el aerosol se depositará en función de una correlación desarrollada para un macho adulto sano^{de 11}años. Desafortunadamente, este método es limitado en su capacidad para eval...

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
1/4" Plastic Barbed Tube Fitting	McMaster Carr	5372K111
10 um Filter Paper	Fisher	1093-110
1um Fluorescent Polystyrene Particles	Polysciences	15702-10
1um Non-Fluorescent Polystyrene Particles	Polysciences	8226
2-Propanol	Fisher	A516-4	Referred to in protocol as "IPA"
3/8" Plastic Barbed Tube Fitting	McMaster Carr	5372K117
Air Flow Meter (1 - 280 mL/min)	McMaster Carr	41695K32	Referred to in protocol as "flow meter"
Carbon M1 3D Printer	Carbon 3D		https://www.carbon3d.com/, Associated software referred to in protocol as "slicing software"
Collison Jet Nebulizer	CH Technologies	ARGCNB0008 (CN-25)	6 Jet MRE style horizontal collision with glass jar, Referred to in protocol as "nebulizer", http://chtechusa.com/Manuals/MRE_Collison_Manual.pdf
Convection Oven	Yamato	DKN602
Copley Critical Flow Controller TPK2000 Reve 120V	MSP Corp	0001-01-9810	Referred to in protocol as "flow controller"
Copley High Capacity Pump Model HCP5	MSP Corp	0001-01-9982	Referred to in protocol as "vacuum pump"
Cytation	BioTek	CYT5MPV	Multifunctional Spectrophotometer/Fluorescent imager equiped with 4x/20x/40x objectives and DAPI/GFP/TexasRed laser/filter cubes
EPU40 Resin	Carbon 3D		https://www.carbon3d.com/materials/epu-elastomeric-polyurethane/, Referred to in protocol as "soft resin"
Filter for vacuum pump	Whatman	6722-5000
Flow Meter Model DFM 2000	MSP Corp	0001-01-8764	Referred to in protocol as "electronic flow meter"
ImageJ Software	ImageJ		https://imagej.nih.gov/ij/download.html
Inline Air Flow Control Valve (Push-to-Connect)	McMaster Carr	62005K333	Referred to in protocol as "valve"
Inline Filter Devices	Whatman	WHA67225000
Marine-Grade Plywood Sheet	McMaster Carr	62005K333	Referred to in protocol as "wooden board"
Materialise Mimics Software	Materialise		https://www.materialise.com/en/medical/mimics-innovation-suite, Referred to in protocol as "CT scan software"
Meshmixer Software	Autodesk		http://www.meshmixer.com/, Referred to in protocol as "mesh editing software"
Methanol	Fisher	A454-4
Opticure LED Cube	APM Technica	102843	Referred to in protocol as "UV oven"
PR25 Resin	Carbon 3D		https://www.carbon3d.com/materials/uma-urethanemethacrylate, /Referred to in protocol as "hard resin"
PVC Tube for Chemicals	McMaster Carr	5231K161	1/4" ID
Screws
SolidWorks Software	Dassault Systèmes SolidWorks Corporation		https://www.solidworks.com/, Referred to in protocol as "3D modeling software"
Straight Flow Rectangular Manifold	McMaster Carr	1125T31
Tubing to Flow Controller	McMaster Carr	5233K65	3/8" ID
Wire