Cribado de genotipos de tabaco para la resistencia a Phytophthora nicotianae

Resumen

Aquí, se presenta un protocolo para la detección eficiente y precisa de genotipos de tabaco para la resistencia a Phytophthora nicotianae en plántulas. Este es un enfoque práctico para la cría de precisión, así como para la investigación de mecanismos moleculares.

Resumen

El vástago negro, causado por los oomicetos Phytophthora nicotianae, es destructivo para el tabaco, y este patógeno es altamente patógeno para muchos cultivos solanáceos. P. nicotianae está bien adaptado a las altas temperaturas; por lo tanto, la investigación sobre este patógeno está ganando importancia en la agricultura de todo el mundo debido al calentamiento global. Las variedades de plantas de tabaco resistentes a P. nicotianae se examinan comúnmente mediante inoculación con granos de avena colonizados por P. nicotianae y monitoreo de los síntomas de la enfermedad. Sin embargo, es difícil cuantificar la intensidad de la inoculación ya que la inoculación precisa es crucial en este caso. Este estudio tuvo como objetivo desarrollar un método eficiente y confiable para evaluar la resistencia del tabaco a la infección por P. nicotianae. Este método se ha utilizado con éxito para identificar variedades resistentes, y la eficiencia de la inoculación se confirmó mediante PCR en tiempo real. El método de evaluación de la resistencia presentado en este estudio es eficiente y práctico para la cría de precisión, así como para la investigación de mecanismos moleculares.

Introducción

P. nicotianae es destructivo para muchos cultivos solanáceos. Puede causar "vástago negro"¹ del tabaco, podredumbre foliar y tubérculo ^{de patata2}, podredumbre de la corona y la raíz del tomate y el pimiento ^dulce3, y podredumbre del collar y la raíz de Goji4. P. nicotianae puede atacar todas las partes de las plantas de tabaco, incluidas las raíces, tallos y hojas en cualquier etapa de ^crecimiento5. El síntoma más común de la enfermedad es la base negra del tallo. Las raíces son inicialmente visibles como empapadas en agua y luego s....

Protocolo

1. Materiales

1. Obtener variedades de tabaco.
   NOTA: Para este experimento se obtuvieron "Beinhart1000-1" (una selección de Beinhart 1000) (BH) y "Xiaohuangjin1025" (XHJ) del Genbank Nacional a Mediano Plazo del Recurso de Germoplasma de Tabaco de China. Bh es resistente, mientras que XHJ es susceptible a la infección por P. nicotianae16. Un aislado de campo de P. nicotianae raza 0, que se conservó en el Instituto de Investigación del Tabaco de la Academia China de Ciencias Agrícolas, se utilizó para todas las inoculaciones a lo largo del estudio.

2. Plantación....

Resultados

Las plantas de 4 semanas de edad de la variedad resistente BH y la variedad susceptible XHJ fueron desafiadas con P. nicotianae utilizando el método presentado en este artículo. El experimento fue diseñado con tres réplicas, cada una con 8 plantas por grupo. La infección por P. nicotianae de las dos variedades de tabaco, BH y XHJ, se presenta en la Figura 2. A los 3 días después de la inoculación, para XHJ, las lesiones del tallo cubrieron aproximadamente la mitad .......

Discusión

Se han utilizado múltiples fuentes de resistencia para mejorar la resistencia de P. nicotianae en el tabaco cultivado. Los genes R dominantes individuales, Php y Phl, han sido introgresados a partir de Nicotiana plumbaginifolia y Nicotiana longiflora, respectivamente10. La variedad de tabaco de cigarro Beinhart 1000 tiene el nivel más alto reportado de resistencia cuantitativa a P. nicotianae13. Múltiples experimentos.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
(NH4)2SO4	Sinopharm	10002917	Analytical Reagent
(NH4)6 Mo7O24•2 H2O	Sinopharm	XW131067681	Analytical Reagent
1.5 ml Safe-lock Microcentrifuge Tubes	Eppendorf	30120086	Used for Sample Extarction
2 ml Safe-lock Microcentrifuge Tubes	Eppendorf	30120094	Used for Sample Extarction
Agar	MDBio, Inc	9002-18-0	Materials of Culture Medium
Analytical Balance	AOHAOSI	AX2202ZH	Equipment
Autoclave	Yamatuo	SQ510C	Equipment
Autoclave	YAMATUO	SQ510C	Equipment
Beaker	Bio Best	DHSB-2L	Materials of Culture Medium
Biological Incubator	JINGHONG	SHP-250	Equipment
Ca(NO3)2•4 H2O	Sinopharm	80029062	Analytical Reagent
CaCl2	Sinopharm	10005817	Analytical Reagent
CuSO4•5 H2O	Sinopharm	10008218	Analytical Reagent
Electromagnetic Oven	Bio Best	DHDCL	Equipment
FeSO4•7 H2O	Sinopharm	10002918	Analytical Reagent
Filter Paper	Bio Best	DHLZ-9CM	Material
Fluorescence Ration PCR Instrument	Roche	LightCycler96	Equipment
Gauze	Bio Best	17071202	Materials of Culture Medium
H3BO3	Phytotechnology	B210-500G	Analytical Reagent
Hemocytometer	Solarbio	17072801	Material for disease-resistant  identification
K2SO4	Sinopharm	10017918	Analytical Reagent
KNO3	Sinopharm	10017218	Analytical Reagent
KT Foam Sheet	Bio Best	DHKTB	Material for Seedling
Low Constant Incubator	Jinghong	SHP-250	Equipment
Measuring Cylinder	Bio Best	DHBLLT-1000ML	Materials of Culture Medium
MgSO4•7 H2O	Sinopharm	10013080	Analytical Reagent
Microscope	ECHO	RVL-100-G	Equipment
MnCl2•4 H2O	Sinopharm	G5468154	Analytical Reagent
Na2-EDTA	Sinopharm	G21410-250	Analytical Reagent
NaH2PO4•2 H2O	Sinopharm	20040717	Analytical Reagent
NH4NO3	Sinopharm	B64586-100g	Analytical Reagent
Oatmeal	Bio Best	DHYMP-1.5KG	Materials of Culture Medium
Petri Dish	Bio Best	DHPYM-9CM	Material for disease-resistant  identification
Pipettor	THERMO	S1	Equipment
Potting	Bio Best	DHYCXHP-12CM	Material for Seedling
Potting Soil	Bio Best	DHYMJZ-50L	Seedling Material
Punch	Bio Best	DHDKW	Material
qRT-PCR Plate	Monad	MQ50401S	qRT-PCR Plate
SYBR Green Premix Pro Taq HS qPCR Kit	Accurate Biology	AG11718	PCR Reagent
Toothpick	Bio Best	DHYQ-900	Material
Total RNA Kit II	Omega	R6934-01	PCR Reagent
TransScript® II One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix	Transgen	AH311-02	PCR Reagent
Trays	Bio Best	DHYMTP-90G	Material for Seedling
Vermiculite	Bio Best	DHZS	Seedling Material
Water Purification System	HEAL FORCE	HSE68-2	Equipment
ZnSO4•7 H2O	Sinopharm	10024018	Analytical Reagent