Agravamiento de la isquemia miocárdica tras la exposición a partículas en un modelo animal de aterosclerosis

Resumen

Este protocolo describe un modelo animal compuesto con exposición a partículas (PM) que agrava la isquemia miocárdica con aterosclerosis.

Resumen

Los problemas de salud causados por la contaminación del aire (especialmente la contaminación por partículas) están recibiendo cada vez más atención, especialmente entre los pacientes con enfermedades cardiovasculares, lo que agrava los trastornos complicados y causa un mal pronóstico. El modelo de exposición a isquemia miocárdica simple (IM) o partículas (PM) no es adecuado para tales estudios de enfermedades con múltiples causas. Aquí, se ha descrito un método para construir un modelo compuesto que combina la exposición a PM, la aterosclerosis y la isquemia miocárdica. Los ratones ApoE^-/− fueron alimentados con una dieta alta en grasas durante 16 semanas para desarrollar aterosclerosis, se realizó la instilación traqueal de la suspensión estándar de PM para simular la exposición pulmonar de PM, y la arteria coronaria descendente anterior izquierda se ligó una semana después de la última exposición. La instilación traqueal de PM puede simular la exposición pulmonar aguda al tiempo que reduce significativamente el costo del experimento; La clásica ligadura de la arteria descendente anterior izquierda con intubación traqueal no invasiva y un nuevo dispositivo de expansión auxiliar pueden garantizar la tasa de supervivencia del animal y reducir la dificultad de la operación. Este modelo animal puede simular razonablemente los cambios patológicos del paciente de infarto de miocardio agravados por la contaminación del aire y proporcionar una referencia para la construcción de modelos animales relacionados con estudios que involucran enfermedades con múltiples causas.

Introducción

La contaminación del aire se ha asociado con una alta mortalidad por todas las causas y contribuyó con una carga significativa de enfermedad más que la suma de la contaminación del agua, la contaminación del suelo y la exposición ocupacional¹. Un informe de la OMS reveló que la contaminación del aire exterior causó 4,2 millones de muertes prematuras tanto en ciudades como en zonas rurales de todo el mundo en 2016². El 91% de las personas en todo el mundo viven en lugares donde la calidad del aire excede los límites de las directrices de la OMS². Además, la materia particulada fina (PM) (≤2,5 μm de....

Protocolo

Todas las actividades con animales descritas aquí fueron aprobadas por el Comité de Ética Animal del Instituto de Materia Médica China, Academia China de Ciencias Médicas Chinas. Para el estudio se utilizaron ratones machos ApoE−/− (fondo C57BL^/6) de 6-8 semanas de edad.

1. Preparación experimental

1. Prepare anestésicos de tribromoetanol (15 mg/ml): disuelva 0,75 g de tribromoetanol en 1 ml de alcohol terc-amílico (ver Tabla de materiales). Después de la disolución completa, dilúyalo a 50 ml con solución salina estéril. Conservar la solución a 4 °C en un recipiente estéril y evitar la exp....

Resultados

Los ratones fueron sacrificados 24 h después de la ligadura de la arteria coronaria, y la sangre se recogió después de la anestesia. Los ratones fueron anestesiados por tribromoetanol (según el paso 3.2), y la muestra de sangre se recogió del seno retroorbitario. Se extrajo el corazón y se examinó el grado de isquemia mediante tinción de cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio (TTC) (Figura 1). Los tejidos normales se vuelven rojos cuando el TTC reacciona con la succinat.......

Discusión

El establecimiento de un modelo animal compuesto es ligeramente diferente del modelo IM único. Mantener una alta tasa de supervivencia es un desafío en el desarrollo del modelo compuesto. La gravedad de la aterosclerosis en ratones ApoE−^/− se volverá más severa con la extensión del tiempo de alimentación alto en grasas⁷, y la debilidad de los ratones conduce a una mayor mortalidad. Por lo tanto, es necesario monitorear la condición de los ratones durante el experimento contin.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,2,2-Tribromoethanol	Sigma-Aldrich	T48402
75% alcohol disinfectant
Animal ventilator	Shanghai Alcott Biotech	ALC-V8S
Cotton swabs			Sterile
Cotton swabs for babies			Sterile , Approximately 3 mm in diameter
Culture Dish	Corning	430597	150 mm x 25 mm
Diesel Particulate Matter	National Institute of Standards Technology	1650b
Dissection board			About 25 x 17 cm. The dissecting board can be replaced with a wooden board of the same size
High-fat diet for mice			Prescription: egg yolk powder 10%, lard 10%, sterol 1%, maintenance feed 79%
Iodophor disinfectant
LED spotlight			5 V, 3 W,with hoses and clamps
Medical silk yarn ball	Shanghai Medical Suture Needle Factory Co., Ltd.	-	0-0
Medical tape	3M	1527C-0
Micro Vascular Hemostatic Forceps	Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory	W40350
Needle Holders	Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory	JC32010
Normal saline
Ophthalmic Scissors	Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory	Y00040
Ophthalmic tweezer, 10cm, curved, with hooks	Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory	JD1080
Ophthalmic tweezer, 10cm, curved, with teeth	Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory	JD1060
Pipet Tips	Axygen	T-200-Y-R-S	0-200 μL
Pipette	eppendorf	3121000074	100 uL
Safety pin			Approximately 4.5 cm in length , for making chest opening tools
Small Animal I.V. Cannulas	Baayen healthcare suzhou	BAAN-322025	I.V CATHETER 22FG x 25 MM
Suture needle with thread	Shanghai Medical Suture Needle Factory Co., Ltd.	-	6-0,Nylon line
Suture needle with thread	JinHuan Medical	F503	5-0
Syringe			1 mL
Tert-amyl alcohol
Zoom-stereo microscope	Mshot	MZ62