Optimización del procedimiento de cría de avispas libres de gérmenes

Resumen

Los embriones de avispa Nasonia se diseccionaron de pupas de Lucillia sericata después de la parasitación durante 12-24 h y se lavaron con alcohol y solución de hipoclorito de sodio al 10% para obtener embriones libres de gérmenes. Después de criar los embriones libres de gérmenes y suministrarles el medio de cría Nasonia para crecer y desarrollarse in vitro, se obtuvieron adultos de Nasonia libres de gérmenes.

Resumen

La tecnología de cría aséptica es un método de cultivo de insectos en condiciones estériles o casi estériles, que puede eliminar eficazmente la influencia de microorganismos externos en la microbiota de los insectos y, por lo tanto, promover el rápido desarrollo de la investigación de la microbiota de los insectos. Nasonia (género de avispas) es un insecto avispa parásito que tiene muchas ventajas, como una vida útil corta, alta variación genética, fácil operación, etc., y es ampliamente utilizado como un sistema modelo de insectos. A diferencia del tratamiento antibiótico, que solo puede reducir el número de microorganismos en animales, las técnicas de cría aséptica pueden controlar tanto la composición como la cantidad de microorganismos en animales, facilitando aún más el estudio de las interacciones huésped-microbio. Sin embargo, las versiones anteriores del medio de cría Nasonia (NRM) tienen algunos defectos y problemas, como un proceso de preparación complejo y lento, fácil contaminación por bacterias u hongos y corto tiempo de almacenamiento. Por lo tanto, este estudio resuelve estos problemas optimizando las herramientas utilizadas en el proceso de preparación de MRN, las condiciones de almacenamiento y las proporciones de componentes. El medio optimizado podría permitir el almacenamiento a -20 °C durante al menos 3 meses y eliminar la posibilidad de contaminación por MRN durante la alimentación de avispas estériles. Esto mejora aún más la tasa de supervivencia y el nivel de salud de la Nasonia aséptica, que es importante para usar Nasonia como modelo para la investigación microbiana.

Introducción

Los animales libres de gérmenes son animales que no tienen microorganismos vivos detectables ni parásitos¹. Los embriones libres de gérmenes pueden obtenerse diseccionando a la madre en condiciones asépticas y posteriormente criados en sistemas de barrera². Estos animales pueden utilizarse para estudiar los efectos de los microorganismos en los animales, como la microbiota intestinal, el sistema inmunitario y el metabolismo¹. Con ciertos medios técnicos, muchos insectos e incluso mamíferos pueden volverse estériles ^3,4

Protocolo

1. Preparación de medio de cría deNasonia libre de gérmenes 

1. Coloque las pupas de L. sericata disponibles comercialmente (consulte la Tabla de materiales) en una superficie que pueda acomodar todas las pupas, como una bandeja o una hoja de papel. Deseche cualquier larva subdesarrollada, pupas viejas oscuras, conchas de pupa vacías, aserrín u otras impurezas. Mantenga solo pupas jóvenes que sean de color rojo parduzco y transfiéralas a un vaso de precipitados (aproximadamente 3,000-4,000 pupas).
   NOTA: Después de realizar muchos experimentos, se descubrió que el medio hecho de las pupas vi....

Discusión

Con la aplicación de tecnologías de detección de alto rendimiento como la genómica y la metabolómica, los investigadores se han dado cuenta gradualmente de que existe una enorme diversidad genética y complejidad metabólica en la microbiota intestinal¹⁶. Estas bacterias simbióticas están estrechamente relacionadas con diversos estados fisiológicos o patológicos, como el metabolismo nutricional del huésped, los tumores, la inmunidad y el envejecimiento a través de interacciones compleja.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.22 Sterile vacuum filter	NEST	331011
10% SodiumHypochlorite	LIRCON	XB-84BS-1
1x PBS solution	Solarbio	P1020
200 mesh nylon net	BIOBYING	BY-378Z
24 well-plate	NEST	702001
8, 1.2, 0.8, and 0.45 µm filters	Shanghai Xingya Purification Material Factory	HN-AA-JT-10079
Absolute ethyl alcohol	Macklin	E809057-500ml
Cell Strainer	BIOLOGIX	15-1100
Commercial Drosophila Medium	Boer	B645446-500ml
Dissecting needle	Bioroyee	17-9140
Garlic press	Taobao	No Catalog numbers	Purchase on Taobao
Lucillia sericata pupae	Hefei Dayuan Biotechnology Co., Ltd.	No Catalog numbers	Purchase on Taobao
Small writing brush	Cestidur	BL0508
Stereoscope	SOPTOP	RX50
Tweezers	SALMART	A109001-56