RGBradford: Cuantificación de proteínas con la cámara de un teléfono inteligente

Resumen

Este artículo proporciona un protocolo para la cuantificación de proteínas utilizando el ensayo Bradford y un teléfono inteligente como dispositivo analítico. Los niveles de proteínas en las muestras se pueden cuantificar utilizando datos de color extraídos de una imagen de una microplaca tomada con un teléfono inteligente.

Resumen

La cuantificación de proteínas es un procedimiento esencial en la investigación en ciencias de la vida. Entre otros métodos, el ensayo de Bradford es uno de los más utilizados. Debido a su amplia difusión, se han informado exhaustivamente las limitaciones y ventajas del ensayo de Bradford, incluyendo varias modificaciones del método original para mejorar su rendimiento. Una de las alteraciones del método original es el uso de la cámara de un teléfono inteligente como instrumento analítico. Aprovechando las tres formas del colorante Coomassie Brilliant Blue que existen en las condiciones del ensayo de Bradford, este artículo describe cómo cuantificar con precisión la proteína en muestras utilizando datos de color extraídos de una sola imagen de una microplaca. Después de realizar el ensayo en una microplaca, se toma una imagen con la cámara de un teléfono inteligente y se extraen datos de color RGB de la imagen utilizando una aplicación de software de análisis de imágenes gratuita y de código abierto. A continuación, se utiliza la relación entre la intensidad azul y verde (en la escala RGB) de muestras con concentraciones desconocidas de proteína para calcular el contenido de proteína en función de una curva estándar. No se observan diferencias significativas entre los valores calculados utilizando datos de color RGB y los calculados utilizando datos de absorbancia convencionales.

Introducción

Independientemente del uso posterior (por ejemplo, ELISA, cinética enzimática, Western blot, purificación de proteínas y espectrometría de masas), la cuantificación de proteínas es crucial para un análisis preciso en los laboratorios de ciencias de la vida. Además de su uso como lecturas secundarias (es decir, para calcular los niveles relativos de analitos por masa de proteína), los niveles de proteína en una muestra también pueden ser el resultado deseado en sí mismo. Por ejemplo, uno puede estar interesado en los niveles de proteínas en los recursos alimenticios¹ o en la orina². Hay muchos métodos disponibles para med....

Protocolo

1. Preparación del reactivo de ensayo de proteínas Bradford

1. Disolver 100 mg de Coomassie Brilliant Blue G en 50 ml de etanol al 95% (p/v). Mezclar hasta que Coomassie Brilliant Blue G se disuelva por completo.
   PRECAUCIÓN: El etanol es inflamable y causa irritación en los ojos. Evite las llamas y use gafas.
2. A la solución anterior, agregue 100 ml de ácido fosfórico al 85% (p/v) con cuidado.
   PRECAUCIÓN: El ácido fosfórico es corrosivo para los metales y causa corrosión en la piel, daños oculares graves y toxicidad oral aguda. Use guantes y gafas.
3. Agregue lentamente la solución que contiene Coomassie Brilliant Blue G, e....

Resultados

La Figura 4 es una imagen de una microplaca de la que se extrajeron datos de color y se registró la absorbancia a 450 nm y 590 nm. Los datos de color RGB reportados aquí como representativos se obtuvieron automáticamente como se describe en la sección 5. Un patrón típico de datos de color es un aumento en los valores de azul y una disminución en los valores de rojo y verde (Figura 5). Tenga en cuenta que, a pesar de la reflexión evidente en todos los poc.......

Discusión

Este artículo describe RGBradford, un método que utiliza la cámara de un teléfono inteligente para registrar datos de un ensayo de proteína de Bradford, extraer datos de color y cuantificar con precisión los niveles de proteína en muestras biológicas, como se describió^{originalmente recientemente.} Una diferencia con el método RGBradford original es que aquí se utilizó un procedimiento para obtener datos de color automáticamente con un complemento ImageJ²² . La p.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
96-well flat-bottom polystyrene microtiter plates	Jet Biofil, Guangzhou, China	TCP011096	Any flat-bottom microplate compativle with optical reading will suffice.
Bovine serum albumin	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	A2153
Coomassie Brilliant Blue G	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	B0770
Ethyl alcohol
iPhone 11	Apple	MWM02BR/A	Can be substituted with other smartphone equiped with a camera
iPhone 14 Pro	Apple	N/A
Phosphoric acid	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	695017
Redmi Note 9 Pro	XIAOMI	N/A
S22 Ultra	Samsung	N/A
SpectraMax 384 Plus. Microplate reader.	Molecular Devices, San Jose, CA	PLUS 384	Any microplate reader capable of reading at 450 nm and 590 nm will work. This is optional. The method was actually created to dismiss the need of a microplate reader.