Mejora de la fiabilidad de los biobancos de tumores de próstata con una técnica de muestreo y caracterización histológica mejoradas

Resumen

Este protocolo describe un método para facilitar la recolección de muestras de prostatectomía radical. El objetivo es mapear, caracterizar y micro-macro diseccionar muestras de tejido de los especímenes en base a criterios anatomopatológicos antes de almacenarlas en un Biobanco.

Resumen

La adquisición de muestras de tejido tumoral frescas y bien caracterizadas es fundamental para realizar estudios "ómicos" de alta calidad. Sin embargo, puede ser particularmente desafiante en el contexto del cáncer de próstata (CP) debido a la naturaleza única de este órgano y la alta heterogeneidad asociada con este tumor. Por otro lado, caracterizar histopatológicamente las muestras antes de su almacenamiento sin causar alteraciones significativas en los tejidos también es un desafío intrigante. En este contexto, presentamos un nuevo método de adquisición, mapeo, caracterización y microdisección de tejido prostático resecado basado en criterios anatomopatológicos.

A diferencia de los protocolos publicados anteriormente, este método reduce el tiempo necesario para el análisis histopatológico de la muestra prostática sin comprometer su estructura, que es crucial para evaluar los márgenes quirúrgicos. Además, permite la delineación y micro-macro disección de muestras frescas de tejido prostático, con un enfoque en áreas tumorales histológicas definidas por criterios patológicos como la puntuación de Gleason, lesiones precursoras (neoplasia intraepitelial prostática de alto grado - PIN) y lesiones inflamatorias (prostatitis). Estas muestras se almacenan en un Biobanco para su posterior análisis de investigación.

Introducción

El cáncer de próstata (CP) es el^2º cáncer más frecuente en hombres y la^5ª causa de muerte en todo el mundo¹. El tratamiento y el pronóstico del paciente dependen de la estadificación y el grado (puntuación de Gleason) del tumor, como lo demuestran las tasas de supervivencia a 5 años más altas de los tumores localizados y de grado bajo (grado 6 de Gleason) (99%) en comparación con los grados de Gleason altos y los tumores metastásicos (31%)².

La recidiva local del CP y el fracaso del tratamiento se han relacionado con la alta heterogeneidad genética intratumoral caracterís....

Protocolo

Este método se desarrolló a través de esfuerzos colaborativos que involucraron a diferentes servicios clínicos (Urología, Anatomía Patológica y el Biobanco del Hospital La Fe). El estudio se llevó a cabo de acuerdo con las directrices institucionales, nacionales e internacionales para el bienestar humano, y recibió la aprobación del Comité de Ética para la Investigación Biomédica del Instituto de Investigación Sanitaria Hospital Universitario y Politécnico La Fe (Valencia, España). Todas las muestras se almacenaron en el Biobanco del Hospital La Fe (PT13/0010/0026). El procedimiento general se detalla en la Figura 1.

Discusión

En cualquier estudio de investigación, la obtención de muestras de calidad es un requisito esencial para reducir los sesgos sistemáticos y obtener resultados fiables²². Por lo tanto, el control de variables preanalíticas como la temperatura a la que se procesan y almacenan las muestras, el tiempo transcurrido desde la recolección de la muestra hasta el almacenamiento, el uso de materiales esterilizados o los efectos que la adición de conservantes u otros aditivos puede tener en las muestras .......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cadiere forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471049. 18 uses.
Conventional slides	Knittel Glass	2021	Ground/ Frosted end
Cryostat microtome	Thermo Fisher Scientific	---	Criostato CryoStar NX50
Cryotubes	Greiner Bio-One GmbH	Ref.: 122280.	CRYO S. PP, with screw cap, sterile.
Da Vinci surgical system	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	XI model
Dissection instruments	Bayer	---	Two tweezers and a surgical blade
DPX Eukitt	Medizin- und Labortechnik GmbH	6.00.01.0001.06.01.01
Eosin	Agilent	157252
Fenestrated bipolar forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471205. 14 lives.
Force bipolar	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471405. 12 uses.
Freezers	Thermo Scientific		MODEL 907. -80 ºC
Hematoxylin	Agilent	157251
Inmunohistochemistry Slides	Agilent-Dako	K802021-2
Large needle driver	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471006. 15 uses.
Maryland bipolar forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471172. 14 uses.
Microscope	Olympus	---	Olympus cx40
Microtome blades	PFM Medical	a35
Monopolar curved scissors	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 470179. 10 uses.
OCT compound	NEG-50	LOT.117340
PlusSpeed S Single-use Biopsy Device with beveled tip	Peter Pflugbeil GmbH	PSS-1825-S
ProGasp forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471093. 18 uses.
Sample holder Disc	Davidson Cryo Chuck. BradleyProducts		30 mm
Tissue ink	Pelikan	2021	Ink 4001 brilliant black (301168)
Xylol	Quimipur	Ref. 169