Caracterización de la morfología vascular de la degeneración macular neovascular asociada a la edad mediante angiografía con verde de indocianina

Resumen

Actualmente, la angiografía con fluoresceína (AF) es el método preferido para identificar patrones de fuga en modelos animales de neovascularización coroidea (NVC). Sin embargo, la AF no proporciona información sobre la morfología vascular. Este protocolo describe el uso de la angiografía con verde de indocianina (ICGA) para caracterizar diferentes tipos de lesiones de NVC inducida por láser en modelos de ratón.

Resumen

La degeneración macular asociada a la edad (DMAE) es una de las principales causas de ceguera entre las personas mayores, y su prevalencia está aumentando rápidamente debido al envejecimiento de la población. La neovascularización coroidea (NVC) o DMAE húmeda, que representa entre el 10% y el 20% de todos los casos de DMAE, es responsable de un alarmante 80%-90% de la ceguera relacionada con la DMAE. Las terapias anti-VEGF actuales muestran respuestas subóptimas en aproximadamente el 50% de los pacientes. La resistencia al tratamiento anti-VEGF en pacientes con NVC a menudo se asocia con NVC arteriolar, mientras que los respondedores tienden a tener NVC capilar. Si bien la angiografía con fluoresceína (AF) se usa comúnmente para evaluar los patrones de fuga en pacientes con DMAE húmeda y modelos animales, no proporciona información sobre la morfología vascular de las NVC (NVC arteriolar vs. NVC capilar). Este protocolo introduce el uso de la angiografía con verde de indocianina (ICGA) para caracterizar los tipos de lesiones en modelos de ratón con CNV inducida por láser. Este método es crucial para investigar los mecanismos y las estrategias de tratamiento de la resistencia a los anti-VEGF en la DMAE húmeda. Se recomienda incorporar la AGIC junto con la AF para una evaluación exhaustiva de las características vasculares y de fuga de la NVC en estudios mecanicistas y terapéuticos.

Introducción

La degeneración macular asociada a la edad (DMAE) es una afección prevalente que conduce a una pérdida grave de la visión^{en personas mayores}. Solo en los Estados Unidos, se prevé que el número de pacientes con DMAE se duplique, llegando a casi 22 millones para 2050, en comparación con los 11 millones actuales. A nivel mundial, se espera que el número estimado de casos de DMAE alcance la asombrosa cifra de 288 millones en 2040².

La neovascularización coroidea (NVC), también conocida como DMAE "húmeda" o neovascular, puede tener efectos devastadores en la visión debido a la formación de vasos sa....

Protocolo

Los experimentos con animales realizados en este estudio recibieron la aprobación de los Comités Institucionales de Cuidado y Uso de Animales (IACUC, por sus siglas en inglés) del Baylor College of Medicine. Todos los procedimientos se llevaron a cabo de acuerdo con las pautas descritas en la Declaración de la Asociación para la Investigación de la Visión y la Oftalmología (ARVO) para el uso de animales en la investigación oftálmica y de la visión. Para el presente estudio se utilizaron ratones machos y hembras C57BL/6J jóvenes (7-9 semanas) y viejos (12-16 meses). Los animales se obtuvieron de una fuente comercial (ver Tabla de Materiales).

Discusión

Este estudio demostró el uso de la angiografía con verde de indocianina (ICGA) para identificar la morfología vascular de la neovascularización coroidea arteriolar y capilar (NVC) en modelos de ratón con NVC inducida por láser. Las propiedades de la luz infrarroja y unida a la hemoglobina del colorante verde de indocianina (ICG) permitieron la detección de la morfología de la NVC, lo que es difícil de lograr mediante la angiografía con fluoresceína (AF), el método actual empleado por la comunidad investigador.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
32-G Insulin Syringe	MHC Medical Products	NDC 08496-3015-01
Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit secondary antibody	Invitrogen	A11008
Anti-α smooth muscle Actin antibody	Abcam	ab5694
Bovine Serum Albumin	Santa Cruz Biotechnology, Inc.	sc-2323
C57BL/6J mice (7-9 weeks)	The Jackson Laboratory	Strain #:000664
Fluorescein Sodium Salt	Sigma-Aldrich	MFCD00167039
Gaymar T Pump Heat Therapy System	Gaymar	TP-500	Water circulation heat pump for mouse recovery after imaging
GenTeal Gel	Genteal	NDC 58768-791-15	Clear lubricant eye gel
GS-IB4 Alexa-Flour 568 conjugate	Invitrogen	I21412
Heidelberg Eye Explorerer	Heidelberg Engineering, Germany	HEYEX2
Indocyanine Green	Pfaultz & Bauer	I01250
Ketamine	Vedco Inc.	NDC 50989-996-06
Paraformaldehyde	Acros Organics	416785000
Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution (0.5%)	Sandoz	NDC 61314-016-01
Spectralis Multi-Modality Imaging System Heidelberg Engineering, Germany SPECTRALIS HRA+OCT Tropicamide ophthalmic solution (1%) Bausch & Lomb NDC 24208-585-64 for dilation of pupils GenTeal Gel Genteal NDC 58768-791-15 clear lubricant eye gel Ketamine Vedco Inc NDC 50989-996-06 Xylazine Lloyd Laboratories NADA 139-236 Acepromazine Vedco Inc NDC 50989-160-11 32-G Needle Steriject PRE-32013 1-ml syringe BD 309659 Indocyanine Green Pfaltz & Bauer I01250	Heidelberg Engineering, Germany	SPECTRALIS HRA+OCT
Triton X-100	Sigma-Aldrich	X100-1L
Tropicamide ophthalmic solution (1%)	Bausch & Lomb	NDC 24208-585-64	For dilation of pupils
Xylazine	Lloyd Laboratories	NADA 139-236