Lesión por congelación en el músculo masetero de ratón para establecer un modelo de fibrosis muscular orofacial

Resumen

El objetivo de este protocolo es establecer un modelo de fibrosis muscular orofacial. La comparación de la histología entre ratones maseteros y músculo tibial anterior después de la lesión por congelación confirmó la fibrosis del músculo masetero. Este modelo facilitará una mayor investigación sobre el mecanismo subyacente a la fibrosis del músculo orofacial.

Resumen

El músculo orofacial constituye un subconjunto del tejido muscular esquelético, con una trayectoria evolutiva y un origen de desarrollo distintos. A diferencia de los músculos de las extremidades derivados de los somitas, los músculos orofaciales se originan en los arcos branquiales, con contribuciones exclusivas de la cresta neural craneal. Un estudio reciente ha revelado que la regeneración también es diferente en el grupo de músculos orofaciales. Sin embargo, el mecanismo regulatorio subyacente aún no se ha descubierto. Los modelos actuales de regeneración del músculo esquelético se centran principalmente en el músculo de las extremidades y el tronco. En este protocolo, se utilizó hielo seco para inducir lesiones por congelación en el músculo masetero del ratón y el músculo tibial anterior para crear un modelo de fibrosis del músculo orofacial. La dinámica temporal de las células satélite musculares y los progenitores fibroadipogénicos fue diferente entre los dos músculos, lo que provocó un deterioro de la regeneración de las miofibras y una deposición excesiva de la matriz extracelular. Con la ayuda de este modelo, se podría llevar a cabo una investigación más profunda sobre la regeneración muscular en el área orofacial para desarrollar enfoques terapéuticos para pacientes con enfermedades orofaciales.

Introducción

Los músculos orofaciales son fundamentales en las actividades fisiológicas diarias, como la masticación, el habla, la respiración y^{la expresión facial}. Sin embargo, en las deformidades orofaciales congénitas, estos músculos exhiben alteraciones atróficas y fibróticas, lo que conduce a un deterioro de la salud corporal y de la cognición social². La cirugía reconstructiva facial sigue siendo el tratamiento de primera línea, pero hasta el 30-70% de los pacientes postoperatorios aún sufren pérdida de masa muscular y disfunción muscular ^3,4 El fracaso de la regeneraci....

Protocolo

Todos los procedimientos con animales de este estudio fueron revisados y aprobados por el Comité de Ética de la Escuela de Estomatología de China Occidental de la Universidad de Sichuan (WCHSIRB-D-2020-114). Los ratones machos C57BL/6 (5 semanas de edad) se criaron en una instalación con humedad controlada (53 ± 2%) y temperatura controlada (23 ± 2 °C) y se sometieron a un ciclo de luz/oscuridad de 12 h. Consulte la Tabla de materiales para obtener detalles relacionados con todos los materiales, reactivos e instrumentos utilizados en este protocolo.

1. Lesión por congelación

1. Anestesia: Sedar a los....

Resultados

La tinción de HE y Sirius Red (Figura 4 y Figura Suplementaria S1) reveló una regeneración muscular completa de la AT en este modelo de lesión por congelación. Por el contrario, el MAS mostró una regeneración alterada de las miofibras y una deposición excesiva de la matriz extracelular. La histología del músculo MAS y TA intacto se muestra en la Figura 4A,B, donde las miofibras están alineadas y el á.......

Discusión

Existe una variedad de modelos de lesiones para estudiar la regeneración del músculo esquelético, incluyendo el uso de estímulos físicos, químicos y quirúrgicos 10,11,12,13,14,15,16. La cardiotoxina y el cloruro de bario son los dos productos químicos más utilizados para iniciar la .......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 mL syringe	Shifeng Medical Apparatus and Instrument (Chengdu, Sichuan, China)	1-ml syringe	/
Acetone	Chron Chemicals	Aceton	/
Adhesion microscope slides	Citotest Scientific	188105	/
Animal depilatory	Phygene Scientific	PH1877	/
BSA (bovine serum albumin)	Solarbio Life Sciences	A8010	/
DAPI	Solarbio Life Sciences	C0065	/
Donkey anti-goat Alexa Fluor 488	Abcam	ab150129	1:200
donkey serum	Solarbio Life Sciences	SL050	/
Dry Ice	Sinrro Technology (Chengdu, Sichuan, China)	rice-shaped dry ice	/
IFKine Red Donkey anti-rabbit	Abbkine Scientific Company	A24421	1:200
Insulation barrels (big)	Thermos	D600	/
Insulation barrels (small)	Polar Ware	250B	/
Isoflurane	RWD Life Technology Company (Shenzhen, Guangdong, China)	R510-22	/
Isopentane	MACKLIN	M813375	/
Laminin	Sigma-Aldrich	L9393	1:1000
Liquid nitrogen	Sinrro Technology (Chengdu, Sichuan, China)	/	/
M.O.M kit	Vector Laboratories	BMK-2202
Mice	Dashuo Biological Technology Company(Chengdu, Sichuan, China)	5 weeks old	/
mounting medium	Solarbio Life Sciences	S2100	/
Nertral balsam	Solarbio Life Sciences	G8590	/
Pax7	Developmental Studies Hybridoma Bank	Pax7	1:5
Pdgfra	R&D systems	AF1062	1:40
Sirus Red Staining Kit	Solarbio Life Sciences	G1472	/
Surgical instruments (forceps, scissors, needle holder, scalpel, and suture)	Zhuoyue Medical Instrument (Suqian, Jiangsu, China)	/	/
Tissue-tek OCT	Sakura	4583	/
Triton	Shanghai Scigrace Biotech	ABIO-Biofroxx-0006A	/
Zoletil	Virbac	Zoletil 50	/