La combinación de fracción vascular estromal aislada mecánicamente e hidrogel de fibrina: un protocolo de procesamiento

Resumen

La fracción vascular estromal (FSV) aislada mecánicamente en combinación con un hidrogel de fibrina ofrece un portador fácil y eficiente de células estromales viables derivadas del tejido adiposo para diversas indicaciones, incluida la ingeniería de tejidos o la cicatrización de heridas. Aquí, presentamos la preparación de una construcción mecánica de hidrogel de fibrina SVF (mSVF) para investigación traslacional y aplicación clínica.

Resumen

El potencial regenerativo de las células estromales derivadas del tejido adiposo (ASC) ha ganado una atención significativa en la investigación regenerativa y traslacional. En el pasado, la extracción de estas células del tejido adiposo requería un proceso basado en enzimas de varios pasos, lo que daba como resultado una mezcla celular heterogénea formada por ACS y otras células, que se denominan conjuntamente fracción vascular estromal (SVF). Los protocolos de aislamiento SVF mecánico (mSVF) introducidos más recientemente requieren menos tiempo y evitan las preocupaciones regulatorias. Recientemente propusimos un protocolo que genera mSVF rico en células estromales basado en una combinación de emulsificación y centrifugación. Un problema actual en la aplicación de mSVF para la aplicación de terapia de heridas es la falta de un andamio que brinde protección contra la manipulación mecánica y la desecación. En el pasado, se ha demostrado que los hidrogeles de fibrina son un complemento útil en la transferencia celular para la cicatrización de heridas. En el presente trabajo, delineamos los pasos de preparación de una construcción de hidrogel de fibrina mSVF como un enfoque novedoso para la investigación traslacional y la aplicación clínica.

Introducción

En los últimos años, la cirugía plástica regenerativa se ha convertido en un pilar adicional de la cirugía plástica¹. La cirugía plástica regenerativa tiene como objetivo restaurar el tejido dañado mediante la transferencia de factores solubles, células y tejido extraído del paciente para promover la restauración del tejido de una manera mínimamente invasiva². Las células madre derivadas del tejido adiposo (ASC) han ganado atención debido a su capacidad para diferenciarse en múltiples linajes mesenquimales, lo que las convierte en un candidato prometedor para

Protocolo

Este estudio se realizó de acuerdo con la Declaración de Helsinki. Todos los donantes adultos dieron su consentimiento informado por escrito para permitir el uso posterior de las muestras de tejido recolectadas. El protocolo sigue los lineamientos del comité de ética en investigación en humanos de nuestra institución.

1. Recolección de tejido adiposo

1. Recolección del tejido adiposo mediante la realización de una liposucción estándar en una técnica convencional de recolección de grasa descrita en publicaciones anteriores^26,27

Discusión

El aislamiento mecánico de SVF proporciona una alternativa elegante al enfoque enzimático tradicional y ofrece un amplio acceso para la aplicación clínica²⁹. De hecho, la mSVF, tal como se propone en el presente manuscrito, ya está en uso clínico para el tratamiento de tejidos blandos de cicatrices o como complemento para procedimientos cosméticos³⁰. El protocolo presentado aquí proporciona un método sencillo para la administració.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
12-Wellplate	Sarstedt	83.3921
4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)	Biochemica	A1001.0010
50 mL-Falcon	Falcon	352070
Absorbent Towels, Two Pack	Halyard	89701
Alamar blue 25 mL	Invitrogen	DAL1025
Albumin, Bovine (BSA)	VWR	0332-500G
Biotek Cytation 5	Agilent		Cell Imaging Multimode Microplate Reader
CaCl2	Sigma-Aldrich	C5670-500G
Cryostat	Microtome
DMEM with 4,5 g/L glucose,with L-Glutamine, with sodium pyruvate	VWR	392-0416
DPBS	Gibco	14190-144
Epinephrin	Sigma-Aldrich	E4250
Fetal Bovine Serum	Biowest	S181H-500
Fibrinogen Human Plasma 100 mg	Sigma-Aldrich	341576-100MG
Formalin	Fisher Scientific	SF100-4
Formalin 4%	Formafix	1308069
FSC 22-Einbettmedium, blau	Biosystems	3801481S
Hematoxylin & Eosin Solution	Sigma-Aldrich	H3136 / HT110132
Lactated Ringer’s Solution 1000 mL	B Braun	R5410-01
Mercedes Cannula 4mm	MicroAire	PAL-R404LL
NaCl 0.9%	Bbraun	570160
OCT Embedding Matrix 125 mL	CellPath	KMA-0100-00A
Paraformaldehyde	Fisher Scientific	10342243
PBS 1%	Sigma-Aldrich	P4474
PenStrep	Sigma-Aldrich	P4333-100ML
Petridish 150mm	Sarstedt	83.1803
Phalloidin-iFluor 488 Reagent	Abcam	ab176753
Sterile Syringe 20 mL Luer	HENKE-JECT	5200-000V0
Sterile Syringe 30 mL Luer-Lock	BD	10521
Thrombin from Human Plasma	Sigma-Aldrich	T6884-100UN
Tranexamic acid	Orpha Swiss	6837093
Tulipfilter 1.2	Lencion Surgical	ATLLLL
Tulipfilter 1.4	Lencion Surgical	ATLLLL