Una técnica de inyección intraperitoneal en peces cebra adultos que minimiza el daño corporal y la mortalidad asociada

Resumen

Se describe un nuevo método de inyección intraperitoneal (IP) en pez cebra adulto. Cuando se manipulan compuestos tóxicos como la doxorrubicina, este procedimiento es más eficaz que los dos métodos IP descritos anteriormente. La técnica está diseñada para ser fácilmente adoptada por investigadores con experiencia limitada en el modelo de pez cebra.

Resumen

El pez cebra adulto (Danio rerio), que es genéticamente accesible, se está empleando como un valioso modelo de vertebrado para estudiar trastornos humanos como la miocardiopatía. La inyección intraperitoneal (IP) es un método importante que suministra compuestos al cuerpo para probar efectos terapéuticos o generar modelos de enfermedades como la miocardiopatía inducida por doxorrubicina (CID). Actualmente, existen dos métodos de inyección de IP. Ambos métodos tienen limitaciones cuando se manejan compuestos tóxicos como la doxorrubicina, que resultan en efectos secundarios que se manifiestan como daño severo a la forma del cuerpo y muerte de los peces. Si bien estas deficiencias podrían superarse mediante una amplia formación de los investigadores, es deseable un nuevo método de inyección de IP que tenga efectos secundarios mínimos. Aquí, se informa de un método de inyección IP único que es capaz de manejar compuestos tóxicos. Se puede producir una reducción constante de la función cardíaca sin que se produzca una muerte significativa de los peces. La técnica puede ser fácilmente dominada por investigadores que tienen una experiencia mínima con el pez cebra adulto.

Introducción

El pez cebra (Danio rerio) ha ganado atención como un modelo experimental para el estudio de enfermedades humanas porque este animal abarca una alta homología de genes y órganos con los humanos, fertilización externa, facilidad de manipulación genética y transparencia corporal en la madurez temprana, lo que facilita una gran cantidad^{de aplicaciones de} imagen. A diferencia del proceso sencillo de administrar medicamentos directamente al agua para embriones y larvas de pez cebra, la administración de medicamentos a un pez cebra adulto presenta un esfuerzo más complejo y desafiante.

En l....

Protocolo

Todos los procedimientos realizados fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de Mayo Clinic, adhiriéndose a los estándares descritos en la "Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio" (National Academies Press, 2011). Todos los peces cebra del estudio pertenecen a la cepa Wild Indian Karyotype (WIK). Los detalles de los reactivos y el equipo utilizado para el estudio se enumeran en la Tabla de Materiales.

1. Preparación y almacenamiento de la solución madre de doxorrubicina

1. Obtenga el stock de doxorrubicina de una fuente comercial.
   NOTA: La doxorrubic....

Discusión

A diferencia de los dos métodos de inyección IP existentes ^4,10, el nuevo método de inyección IP se caracteriza por las siguientes características distintivas. En primer lugar, se utiliza un ángulo de penetración de la aguja único (cercano a cero); en segundo lugar, la aguja penetra en el pez a través de un lugar único, es decir, un orificio natural en la superficie ventral de un pez, lo que facilitaría la inyección; y por último, el movimie.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
10 μL NanoFil-syringe	World Precision Instruments, Inc	NANOFIL	injection tool
34 G needle	World Precision Instruments, Inc	NI34BV-2	injcetion tool
60 mm Petri dish	fisher scientific/fisherbrand	FB0875713A	placing the sponge
Dissecting microscope	Nikon	SMZ800	Injceting the Dox
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG	drug for creating DIC model
Echocardiography	VISUAL SONICS	Vevo 3100	measuring cardiac function
Foam Sponge	Jaece Industries	L800-D	placing the fish
Hank's balanced salt solution (HBBS)	Thermo Fisher	14025076	Vehicle for Dox
Microcentrifuge	southernlabware	MyFuge/C1012	collect the Dox solution
Precision Balance Scale	Torbal	AD60	Digital scales
Tricaine	Argent	MS-222	Anesthetizing fish
Tube	Eppendorf	1.5 mL	storage
vevo LAB  software	FUJIFILM VISUAL SONICS	5.6.0	quantification of the heart