Extracción secuencial de sangre de la vena cava inferior seguida de la vena porta para evaluar los metabolitos microbianos intestinales en ratones

Resumen

El protocolo demuestra un método para recolectar sangre de las venas portas y la vena cava inferior de ratones secuencialmente para evaluar la producción y absorción de metabolitos microbianos intestinales.

Resumen

Se sabe que los productos microbianos intestinales actúan tanto localmente dentro del intestino como se absorben en la circulación, donde sus efectos pueden extenderse a numerosos sistemas de órganos distantes. Los ácidos grasos de cadena corta (AGCC) son una clase de metabolitos producidos por los microbios intestinales durante la fermentación de la fibra dietética no digerible. Ahora se reconoce que contribuyen de manera importante a la forma en que el microbioma intestinal influye en los sistemas de órganos extraintestinales a través del intestino-pulmón, el intestino-cerebro y otros ejes de órganos intestinales en todo el huésped. Los AGCC se absorben desde el colon, a través del tejido intestinal, hasta la vena porta (PV). Luego pasan a través del hígado y se consumen en varios órganos como el cerebro, los músculos, el tejido adiposo y los pulmones. Los AGCC se miden más fácilmente en el material fecal expulsado, sin embargo, se han obtenido mediciones más precisas a partir del contenido fecal intracolónico. Aquí proponemos que el muestreo de PV y plasma circulante sistémico de un solo sujeto puede ser preferible para estudiar la absorción, el transporte y los niveles sistémicos de AGCC en ratones. Presentamos una nueva técnica para la toma eficiente de muestras de sangre de la VP y la vena cava inferior (VCI) que permite la recolección de volúmenes relativamente grandes de sangre de las circulaciones portal y sistémica. Esto se logra mediante la ligadura de la VP, lo que permite la dilatación o el agrandamiento de la VP a medida que se rellena desde las venas mesentéricas que drenan hacia ella. Con este método, pudimos mejorar la tasa de recolección exitosa, así como la cantidad total de sangre recolectada (hasta 0,3 mL de VCI y 0,5 mL de PV).

Introducción

Los ácidos grasos de cadena corta (AGCC) son una clase importante de metabolitos producidos por la microbiota intestinal. Su papel fundamental en la interacción entre el microbioma intestinal y otros órganos distantes¹ ha sido respaldado por investigaciones que describen cómo modulan la inflamación, señalizan a través de receptores dedicados y sirven como sustratos en el metabolismo celular ^2,3,4,5. Un trabajo reciente de nuestro grupo ha propuesto que los AGCC son reguladores inflama....

Protocolo

Todos los pasos de este procedimiento de no supervivencia fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Universidad de California en San Francisco. El sexo y la cepa de ratones utilizados fueron ratones machos C57BL/6J (de 25-35 g de peso y 12-15 semanas de edad). También se pueden utilizar hembras y/u otras cepas de ratón estándar.

1. Anestesia

1. Limpie la mitad inferior del abdomen del ratón con hisopos de etanol al 70%. Administrar la anestesia mediante una inyección intraperitoneal de tribromoetanol (250-400 mg/kg). También se puede util....

Discusión

Este artículo describe un método innovador in vivo para la recolección casi simultánea de muestras de sangre secuencialmente de la VCI y la VP en el mismo ratón experimental. Este método es útil para medir los niveles de productos generados por la microbiota intestinal, como los AGCC, que transitan por la circulación portal. El volumen máximo medio de sangre que se puede recoger durante un procedimiento terminal en ratones (con un peso de 25-30 g) es de aproximadamente .......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,2,2 Tribromoethanol, 97% (Avertin)	Sigma Aldrich	T48402-25G	Anesthetic agent
Buprenorphine Hydrochloride Injection 0.3 mg/mL	PAR Pharmaceutical	NDC 42023-179-05	Analgesic agent
Dressing Forceps	Miltex	6-100	Dissection
Graefe Forceps	Roboz	RS-5136	Dissection
Hepatin sodium 1000 USP units/mL	Hikma	NDC 0641-0391-12	Blood sample syringes/tubes heparinization
Prolene 7-0	Ethicon	8696G	Portal vein ligature
Scissors	F.S.T	14058-11	Dissection
Student Halsted-Mosquito Hemostats	F.S.T	91308-12	Dissection
Surgical tape	3M Transpore	1527-1	Mouse limbs fixation
U-100 Insulin Syringe 28G1/2	EXEL	26027	Blood sample collection