Un modelo de aneurisma de aorta abdominal de ratón por infiltración periadventicial de cloruro de calcio y elastasa

Resumen

Este manuscrito presenta un protocolo para establecer un modelo de aneurisma de aorta abdominal en ratón utilizando cloruro de calcio y elastasa, combinando las ventajas de los métodos de modelado anteriores. Este modelo se puede utilizar para investigar los mecanismos fisiopatológicos subyacentes a los aneurismas de aorta abdominal.

Resumen

El aneurisma de aorta abdominal (AAA) es una enfermedad potencialmente mortal asociada con altas tasas de mortalidad. Se caracteriza por la dilatación permanente de la aorta abdominal con un aumento de al menos el 50% del diámetro arterial. Se han introducido varios modelos animales de AAA para imitar los cambios fisiopatológicos y estudiar los mecanismos subyacentes de AAA. Entre estos modelos, los modelos AAA inducidos por cloruro de calcio (CaCl₂) y elastasa se utilizan comúnmente en ratones. Sin embargo, estos métodos tienen ciertas limitaciones. La perfusión tradicional de elastasa pancreática porcina (EPP) intraluminal se asocia con una alta dificultad técnica y una alta tasa de ruptura, mientras que la administración periadventicial de EPP produce resultados inconsistentes. Además, el modelo AAA inducido por CaCl₂ carece de características humanas de AAA, como la aterotrombosis y la rotura del aneurisma. Por lo tanto, se ha propuesto la aplicación combinada de CaCl₂ y PPE como un enfoque para mejorar las tasas de éxito e inducir mayores aumentos de diámetro en modelos animales AAA. Este manuscrito presenta un protocolo completo para establecer un modelo de AAA de ratón mediante infiltración periaórtica de PPE y CaCl₂ en el segmento infrarrenal de la aorta abdominal. Siguiendo este protocolo, podemos lograr una tasa de formación de AAA de aproximadamente el 90% con simplicidad técnica y reproducibilidad. Otros experimentos ecográficos e histológicos confirman que este modelo reproduce eficazmente los cambios morfológicos y patológicos observados en el AAA humano.

Introducción

El aneurisma de aorta abdominal (AAA) se define como un aumento de diámetro de más del 50% o un diámetro aórtico máximo superior a 3 cm en la aorta abdominal. Esta afección representa una amenaza significativa para la vida, con una tasa de mortalidad de alrededor del 90% tras la rotura de un aneurisma ^1,2,3. Actualmente, la reparación quirúrgica abierta y la reparación aórtica endovascular (EVAR) son las únicas intervenciones disponibles para los pacientes con AAA ^4,5,6

Protocolo

El protocolo de experimentación con animales cumplió con la Guía del Instituto Nacional de Salud para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (NIH Pub No. 86/23, 1985) y fue aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales del Hospital de China Occidental, Universidad de Sichuan (Aprobación Número 202311300012). Para este estudio se utilizaron ratones machos C57/B6J de ocho a diez semanas de edad. Los detalles de los reactivos y equipos utilizados se enumeran en la Tabla de Materiales.

1. Preparación preoperatoria

1. Obtener los animales y alim....

Discusión

La investigación de los mecanismos moleculares del AAA requiere un modelo animal estable. En consecuencia, se han establecido numerosos modelos animales de AAA desde su desarrollo inicial por Economou et al. en la década de 1960²⁹. Entre estos modelos, el CaCl₂ se emplea con frecuencia en roedores debido a su rentabilidad, simplicidad técnica y reproducibilidad confiable. Sin embargo, se ha demostrado que la infiltración perivascular de CaCl₂

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anesthesia Machine	RWD	R550
Butorphanol	Jiangsu Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd	220608BP	1ml: 1mg
C57BL/6JGpt Male Mice	GemPharmatech	N000013
Calcium Chloride	Sigma Aldrich	C4901	100 g
Carprofen	MCE	HY-B1227	100 mg
Chow Diet	Dossy Experimental Animals Co.Ltd
Digital Caliper	Greener	IP54
Ethanol	Jinhe Pharmaceutical Co.Ltd	539682	75%/500 mL
EVG Staining Kit	Solarbio	G1597
GraphPad Prism	Graphpad		Ver 9.0.0
H&E Staining Kit	Servicebio	G1076
Insulin Syringe	BD	2143420
Isoflurane	RWD	R510-22-4	100 mL
Masson Staining Kit	Servicebio	G1006
Normal Saline	Servicebio	G4702	500 mL
Paraformaldehyde	Biosharp	BL539A	4%/500 mL
PBS, 1x	Servicebio	G4202	500 mL
Porcine Pancreatic Elastase	Sigma Aldrich	E1250	100 mg
Povidine Iodine	Yongan Pharmaceutical Co.Ltd		5%/100 mg
Prolene Polypropylene Suture	Ethicon LLC	8709H
Rodent Ultrasound System	Fujifilm	Vevo 3100LT
Stereo Microscope	Olympus	SZ61
Ultrasonic Couplant	Keppler	KL-250	250 g