Modelado in vitro de la deposición de grasa en la enfermedad hepática esteatótica asociada a la disfunción metabólica

Resumen

Este artículo describe el uso de células HepG2 inducidas por ácido oleico como modelo para la enfermedad hepática esteatótica asociada a la disfunción metabólica.

Resumen

La prevalencia de la enfermedad hepática esteatótica asociada a la disfunción metabólica (MASLD, por sus siglas en inglés) ha aumentado debido a los cambios en los patrones económicos y de estilo de vida, lo que ha provocado importantes problemas de salud. En informes anteriores se ha estudiado el establecimiento de modelos animales y celulares para MASLD, destacando las diferencias entre ellos. En este estudio, se creó un modelo celular mediante la inducción de la acumulación de grasa en MASLD. Las células HepG2 se estimularon con el ácido graso insaturado ácido oleico a varias concentraciones (0,125 mM, 0,25 mM, 0,5 mM, 1 mM) para emular MASLD. La eficacia del modelo se evaluó mediante ensayos del kit de recuento de células-8, tinción con Oil Red O y análisis del contenido de lípidos. Este estudio tuvo como objetivo crear un modelo celular fácil de operar para las células MASLD. Los resultados de los ensayos del kit de recuento de células 8 mostraron que la supervivencia de las células HepG2 dependía de la concentración de ácido oleico, con un IG₅₀ de 1,875 mM. La viabilidad celular en los grupos de 0,5 mM y 1 mM fue significativamente menor que en el grupo control (P < 0,05). Además, la tinción de Oil Red O y el análisis del contenido de lípidos examinaron la deposición de grasa a diferentes concentraciones de ácido oleico (0,125 mM, 0,25 mM, 0,5 mM, 1 mM) en células HepG2. El contenido de lípidos de los grupos de 0,25 mM, 0,5 mM y 1 mM fue significativamente mayor que el del grupo control (P < 0,05). Además, los niveles de triglicéridos en los grupos de OA fueron significativamente más altos que en el grupo control (P < 0,05).

Introducción

La enfermedad hepática esteatótica asociada a la disfunción metabólica (MASLD, por sus siglas en inglés) abarca una variedad de afecciones, que incluyen esteatosis simple, esteatohepatitis no alcohólica (EHNA), cirrosis y carcinoma hepatocelular ^1,2,3,4,5,6, todas atribuidas a factores distintos al consumo de alcohol⁷. La MASLD es la enfermedad hepática más prevalente causada por lesión metabólica hepática, afectando a casi una cuarta parte de la po....

Protocolo

NOTA: Consulte la Tabla de materiales para obtener detalles relacionados con todos los materiales, instrumentos y reactivos utilizados en este protocolo.

1. Cultivo celular

1. Cultivo de células HepG2 en matraces de cultivo que contienen el medio Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) (que contiene 10% de suero fetal bovino [FBS], 100 unidades/mL de penicilina y 100 μg/mL de estreptomicina). Mantener los matraces de cultivo a 37 °C en una incubadora con 5% de CO₂ .

2. Efecto del ácido oleico en la viabilidad celular medido por el kit de recuento celular....

Discusión

El MASLD es un síndrome clinicopatológico caracterizado por un depósito excesivo de grasa intracelular en los hepatocitos debido a factores más allá del alcohol y otros agentes hepáticos establecidos¹⁸. La MASLD está estrechamente relacionada con la lesión hepática por estrés metabólico adquirido, especialmente asociada con la resistencia a la insulina y la susceptibilidad genética. Para estudiar y cribar eficazmente los fármacos para detectar la MASLD, es crucial seleccionar un model.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.22 µm filter	Millex
0.25% Trypsin-EDTA (1x) Trypsin-EDTA	Gibco	25200-056
0.45 µm filter	Millex
2 mL Crygenic Vials	CORNING	430659
25 cm2 Cell Culture Flask	CORNING	430639
6-well cell culture plate	CORNING	3516
96-well cell culture plate	CORNING	3599
Blood Count Plate	Shanghai Jing Jing Biochemical Reagent & Instrument Co.	02270113
Cell Counting Kit-8 assays	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	CA1210-1000T
CO2 incubator	NUAIRE	NU-5710E
DMSO Dimethyl sulfoxide	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	D8371
Dulbecco's Modified Eagle Medium	Gibco	8122691
Enzyme Labeling Equipment	Tecan	Spark
Fetal Bovine Serum, Qualified	Gibco	10099141
HepG2 cells line	Beijing North China Chuanglian Biotechnology Research Institute (BNCC)	221031
Human Triglyceride (TG) ELISA instruction	Nanjing Jiacheng Bioengineering Institute	20170301
Inverted Microscope for Cell Culture	Leica	DMi1
Isopropanol	Tianjin Zhiyuan Chemical Reagent Co.	2021030141
Oil Red Stain Kit, For Cultured Cells	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	G1262
Oleic acid	Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.	A502071
Penicillin Streptomycin	Gibco	15140122
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