Modificación de los niveles de ácido fólico o colina en la dieta materna para estudiar el impacto de las deficiencias en los resultados de salud de la descendencia

Resumen

Este protocolo describe el método para reducir la ingesta dietética de ácido fólico o colina en ratones hembra antes del embarazo con el objetivo de investigar el impacto de la dieta materna en los resultados de salud de la descendencia.

Resumen

La nutrición materna durante el embarazo y la lactancia juega un papel importante en el neurodesarrollo de las crías. El metabolismo de un solo carbono (1C), que se centra en el ácido fólico y la colina, así como en otras vitaminas B, desempeña un papel clave durante el cierre del tubo neural del feto en desarrollo. Sin embargo, el impacto de estas deficiencias nutricionales maternas durante el embarazo en los resultados de salud de las crías después del nacimiento sigue siendo relativamente indefinido. Además, las deficiencias dietéticas maternas de ácido fólico o colina pueden afectar otros resultados de salud en la descendencia, lo que lo convierte en un modelo valioso. Este protocolo tiene como objetivo describir el procedimiento para inducir una deficiencia en el metabolismo de 1C en ratones hembra a través de modificaciones en la dieta. Las hembras se someten a dietas al destete, hasta los 2 meses de edad, durante 4-6 semanas antes del apareamiento y permanecen a dieta durante todo el embarazo y la lactancia. Las crías de estas hembras pueden ser evaluadas para obtener resultados de salud. Las hembras se pueden usar varias veces para generar descendencia, y los tejidos de las hembras se pueden recolectar para medir las mediciones de metabolitos 1C. Este protocolo proporciona una visión general de cómo inducir deficiencias dietéticas maternas de ácido fólico o colina para estudiar los resultados de salud de la descendencia.

Introducción

La nutrición materna durante el embarazo y la lactancia juega un papel vital en el desarrollo de la descendencia. El metabolismo de un carbono (1C) es una red metabólica clave que integra las señales nutricionales con la biosíntesis, la homeostasis redox y la epigenética. El ácido fólico y la colina son componentes centrales del 1C que desempeñan un papel importante en el cierre del tubo neural. Se recomienda ampliamente que las mujeres tomen suplementos de ácido fólico y colina durante sus años fértiles¹. Si bien el papel crítico del ácido fólico en el desarrollo fetal está claramente establecido, los mecanismos subyacentes involucrados siguen....

Protocolo

Este protocolo fue aprobado, y todos los animales fueron utilizados de acuerdo con las directrices del Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad del Medio Oeste (Protocolo 2983). En este estudio se utilizaron ratones hembra C57BL/6J, de 2 meses de edad (peso corporal, ~20 g). En general, se pueden utilizar ratones hembra en edad reproductiva¹⁰. Para garantizar que se eviten los efectos de la camada, es necesario utilizar varias hembras para cada dieta¹¹. Los detalles de los reactivos y el equipo utilizado en el estudio se enumeran en la Tabla de Materiales.

Discusión

Durante la implementación de este protocolo en los laboratorios de investigación, hay varias notas importantes que los investigadores deben tener en cuenta antes de comenzar los experimentos. En primer lugar, en la fabricación de dietas, es necesario dar suficiente tiempo de antelación para fabricar la dieta antes del inicio del estudio experimental. Los plazos de entrega pueden variar de una empresa a otra, y también hay que tener en cuenta el envío de la dieta. Los ratones hembra que están en edad reproductiva (.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.5 mL tubes	Eppendorf
C57BL/6 Female Mice	Charles River	27	Mice can be bred in house as well.
Choline Deficient Diet	Envigo	TD.06119
Control Diet	Envigo	TD.190790
EDTA tubes
Folic Acid Deficient Diet	Envigo	TD.01546
GraphPad prism			https://www.graphpad.com/features
Housing for rodents	Lab Products, LLC	One CageVentilated Racks & Cages
Liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS)	SCIEX, Framingham, MA	5500 QTrap
Ultra-performance liquid chromatography (UPLC)	Shimadzu, Columbia, MD, USA	Nexera