Colocación periorbitaria de una sonda láser Doppler para la monitorización del flujo sanguíneo cerebral antes de la oclusión de la arteria cerebral media en modelos de roedores

Resumen

Aquí se muestra un procedimiento quirúrgico mínimamente invasivo, que consiste en colocar la sonda láser Doppler en el cráneo sobre la región distal de la arteria cerebral media (ACM), una ubicación periorbitaria adecuada para ratas y ratones, para evaluar el flujo sanguíneo durante la oclusión transitoria de ACM.

Resumen

La oclusión de la arteria cerebral media (MCAO, por sus siglas en inglés) es el método de referencia para el modelado preclínico del accidente cerebrovascular isquémico en roedores. Sin embargo, el éxito de la oclusión no está garantizado ni siquiera por las manos quirúrgicas más hábiles. Los errores ocurren principalmente cuando el filamento no se coloca a la profundidad correcta e incluyen casos de infarto o perforación del vaso, lo que puede causar la muerte. La flujometría láser Doppler (LDF) es una técnica fiable que proporciona información en tiempo real sobre el flujo sanguíneo cerebral regional (CBF) durante el procedimiento MCAO. Aquí demostramos una técnica rápida para la colocación periorbital de una sonda láser Doppler para la medición de CBF tanto en ratones como en ratas. Nuestro razonamiento fue simplificar la implementación de LDF, fomentando el uso generalizado para mejorar la confiabilidad quirúrgica. La técnica elimina la necesidad de adelgazamiento del cráneo y equipo especializado, con la colocación en la región periorbitaria en lugar de la colocación dorsal, lo que promueve la eficiencia y la facilidad de adopción. El protocolo descrito aquí abarca las preparaciones prequirúrgicas, la colocación de la sonda Doppler periorbitaria y los cuidados postoperatorios. Los resultados representativos incluyen representaciones visuales de los elementos del procedimiento junto con trazados representativos de LDF que ilustran cirugías exitosas de MCAO, con casos de colocación fallida de filamentos que conducen a complicaciones. El protocolo ilustra el LDF en la confirmación de la correcta colocación del filamento y ofrece un procedimiento simplificado en comparación con los métodos alternativos.

Introducción

El método de oclusión de la arteria cerebral media (MCAO) ha sido ampliamente utilizado en roedores desde que se introdujo en la comunidad científica para su aplicación en ratas en 1986¹ con la adaptación de Longa descrita en 1990², y adaptaciones para ratones poco después³. Aunque no se describió en la publicación de Longa, el uso de la señal de flujometría láser Doppler (LDF) para confirmar la colocación del filamento fue pronto descrito en la literatura⁴. El empleo de LDF durante el procedimiento MCAO ocupa un lugar destacado en la liter....

Protocolo

Se utilizaron ratones y ratas adultos para ilustrar este protocolo (25 g, C57BL/6J, Jackson Laboratories; 250 g, Sprague Dawley, Envigo). El manejo de los animales y los procedimientos experimentales se realizaron con aprobación y de acuerdo con el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Arizona, las leyes nacionales y de acuerdo con los principios del cuidado de los animales de laboratorio¹¹. Las ratas y ratones se alojaron con un horario de luz/oscuridad de 12 horas (7 a.m.-7 p.m.) con comida y agua disponibles ad libitum.

1. Preparació....

Discusión

El MCAO es el procedimiento de referencia para modelar la oclusión y reperfusión de las arterias cerebrales en roedores y ha sido la piedra angular de la investigación preclínica del ictus, permitiendo la inducción de isquemia focal en roedores para imitar la fisiopatología del ictus humano. Se trata de un procedimiento quirúrgico exigente con una importante variabilidad inter e incluso intracirujano. Si bien no hay evidencia de que la aplicación de LDF reduzca la variabilidad, p.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
curved spring scissors	Castroviejo	1501710
forceps #5	Fine science tools	11250-20
forceps #5/45	Fine science tools	1151-35
Forcepts Cautery tool	Conmed	M18019-01
Laboratory tape	Fisherbrand Labeling Tape	15-950
Laser Doppler Monitor	Moore Instruments	MOORVMS-LDF
LDF software	Perisoft for Windows or moorSOFT	NA
Mouse clippers	Philips Norelco	MG7910
Periflux System 4000, probe 407	Perimed	equipment no longer available
plastic wrap	Glad	press n seal
Rat clippers	oster	A5 or similar
Small rodent anesthesia	JD Medical	custom order
small scissors	excelta	362 Sissors or similar
Temperature monitor system with probe	Physitemp	TCAT-2AC Controller