El protocolo de la Unidad de Accidente Cerebrovascular del Ratón con puntuación neurológica estandarizada para estudios traslacionales de accidente cerebrovascular del ratón

Resumen

Este artículo presenta un protocolo para ejecutar el concepto de unidad de accidente cerebrovascular (mSU) altamente traslacional y probado de forma independiente en ratones de gran carrera. También proporciona un protocolo estandarizado para la ejecución de la escala focal experimental de ictus en ratones, que evalúa los déficits focales de ictus detectados incluso a largo plazo.

Resumen

El modelo de filamento de oclusión de la arteria media (fMCAo) es quizás el modelo de accidente cerebrovascular de ratón más traslacional, ya que permite una isquemia controlada con reperfusión/recanalización intravascular. Sin embargo, no está alineado con los avances clínicos actuales para la atención del ictus (p. ej., las unidades de ictus), suele emplear puntuaciones neurológicas subjetivas o vagas entre los laboratorios y presenta una alta mortalidad en la fase aguda. Aquí, abordamos estas limitaciones con protocolos guiados por video validados. Presentamos el protocolo de la Unidad de Accidente Cerebrovascular del ratón (mSU) con videos instructivos y un algoritmo de decisión (Puntuación de estratificación del riesgo), cerrando la brecha entre el modelado clínico y el modelado del accidente cerebrovascular del ratón. Para aumentar la precisión y la sensibilidad de la puntuación neurológica del ictus, presentamos por primera vez un formato estandarizado en vídeo de la Escala Experimental del Ictus focal (fESS) y demostramos su valor hasta 6 meses después del ictus. Además, se presentan los protocolos para la prueba de peldaños de escalera en ratones, así como la conocida prueba de cilindro, para una evaluación cuantitativa e imparcial de la función motora de las extremidades. Los resultados ponen de manifiesto la eficacia traslacional de la mSU. La ESS focal (fESS) sobresale sobre otras escalas conocidas en la detección de déficits focales de accidente cerebrovascular, la captura de la recuperación y el mantenimiento de la sensibilidad hasta 6 meses después del accidente cerebrovascular. Las pruebas de peldaños y cilindros cuantifican y controlan objetivamente los déficits motores de las extremidades delanteras y traseras a largo plazo. En resumen, la integración de mSU, fESS y pruebas de función motora proporciona un marco sólido para las investigaciones de accidentes cerebrovasculares clínicamente relevantes. Nuestros protocolos mejoran el valor traslacional en la investigación de golpes de ratón.

Introducción

El accidente cerebrovascular isquémico grande es una de las principales causas de morbilidad y discapacidad en todo el mundo¹. Aun así, la investigación sobre el ictus de ratón se enfrenta a un bloqueo traslacional en casi todos los tratamientos probados preclínicamente hasta el momento². Las múltiples razones de este problema y los esfuerzos para superarlo han sido revisados en detalle en publicaciones anteriores². Estos desafíos surgen de la limitada integración de los avances clínicos en modelos animales relevantes² y de las debilidades ....

Protocolo

Los experimentos reportados en este artículo se llevaron a cabo siguiendo las directrices nacionales y europeas para el uso de animales de experimentación y fueron aprobados por los comités gubernamentales griegos (Atenas, Licencia No "843895_06-09-2022").

1. La "unidad de trazo del ratón" (mSU)

1. Evaluar diariamente el estado clínico del animal ("visitas") y calcular su puntuación RSS
   1. Imprimir el Archivo Suplementario 1, preferiblemente antes de la cirugía del animal, para el registro de datos y el seguimiento.
   2. Evalúe clíni....

Resultados

La mSU, como se ha descrito anteriormente, comienza después de la operación fMCAo. Nuestros resultados representativos en las dos cohortes independientes de ratones con fMCAo accidente cerebrovascular y simulacro (Figura 4a) confirman el valor previamente demostrado de mSU, particularmente durante el período crítico entre los días 3 y 10¹³. En nuestras cohortes, la mortalidad se produjo en 3/15 animales de la cohorte 1 (ictus, 6 .......

Discusión

El presente protocolo es una guía completa del protocolo de soporte de mSU, diseñado para reducir la mortalidad artefactual entre los días 3 y 10 en ratones sometidos a grandes accidentes cerebrovasculares territoriales mediante el modelo fMCAo¹³. Además, el presente protocolo incluye una guía de video estandarizada para el componente focal de la escala ESS (fESS) para reducir la subjetividad extendida y el sesgo de la puntuación focal neurológica en ratone.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tools for mSU
5% Dextrose solution	VIOSER S.A	na (not applicable)	Any genericon
Contactless Digital Thermometer	AVRON	YTC20095	Any genericon
Digital weight scale	KERN & Sohn Gmbh	FCB6K1	Any genericon
Food pellets	Mucedola srl	na	Any genericon, use the normal food of your animal facility
Heating Plate	Photax	na	Photax dishwarmer 2
Liquid antiseptic	Schülke & Mayr GmbH	na	Octenisept®
Normal food blender		na	For pellet pulverizing. Any genericon
Normal saline	DEMO S.A.	na	Sodium Chloride Injection 0,9%
Pinsetter and cotton buds		na	Any genericon
Sugar		na	Any genericon
Syringes (1ml) with 27-gauge needle		na	Any genericon. For food administration (without needle) and for subcutaneous fluid administration (with needle)
Tools for ESS
45° angled surface	construct it	na	Made out of plexiglas or other material, with rubber-surface, for climbing tests
cotton swab	Any genericon	na	commercial ear cotton buds, make its cotton tip long and thinned
edge-sharpened wooden stick	Any genericon	na	e.g. toothpicks
Long beam	construct it	na	Dimensions: 1 x 1 x1cm, approximately 100cm long, wooden. Place between two table-edges for beam walking test
Thick glove	Any genericon	na	to prevent animal trauma when falling from beam