Establecimiento de un modelo de implantación embrionaria in vitro

Resumen

Este protocolo describe metodologías para establecer un modelo de implantación embrionaria in vitro simple y eficiente para evaluar las moléculas relevantes que afectan el proceso de implantación embrionaria.

Resumen

La implantación embrionaria es el primer paso para el establecimiento de un embarazo exitoso. Un modelo in vitro para la implantación de embriones es fundamental para la investigación biológica básica, el desarrollo de fármacos y el cribado. En este trabajo se presenta un modelo in vitro sencillo, rápido y altamente eficiente para la implantación de embriones. En este protocolo, primero introducimos la adquisición de blastocisto de ratón y la preparación de células de adenocarcinoma de endometrio humano (Ishikawa) para la implantación, seguido del método de cocultivo para embriones de ratón y células de Ishikawa. Por último, realizamos un estudio para evaluar el impacto de concentraciones variables de 17-β-estradiol (_E2) y progesterona (P4) en las tasas de adhesión embrionaria basadas en este modelo. Nuestros hallazgos revelaron que las altas concentraciones de_E2 redujeron significativamente la adhesión embrionaria, mientras que la adición de progesterona podría restaurar la tasa de adhesión. Este modelo ofrece una plataforma sencilla y rápida para evaluar y cribar las moléculas implicadas en el proceso de adhesión, como las citocinas, los fármacos y los factores de transcripción que controlan la implantación y la receptividad endometrial.

Introducción

La implantación del embrión, el paso inicial de un embarazo exitoso, es crucial para comprender su base biológica y abordar los desafíos de la infertilidad. Sin embargo, las restricciones éticas plantean limitaciones significativas en la recolección de muestras clínicas de embriones humanos, lo que dificulta la investigación sobre las intrincadas interacciones entre los embriones humanos y el endometrio durante el embarazo temprano¹. Una comprensión profunda de estos complejos mecanismos es vital para avanzar en la investigación biológica fundamental, el descubrimiento de fármacos y la salud reproductiva.

Los modelos....

Protocolo

El manejo de ratones y los estudios experimentales se realizaron bajo protocolos aprobados por el Comité Animal del Instituto de Tecnologías Biomédicas y Farmacéuticas de Shanghai. Garantice los procedimientos de seguridad: Siempre use el equipo de protección personal (EPP) adecuado cuando manipule productos químicos o materiales biológicos.

1. Adquisición de embriones de ratón

NOTA: Esta sección describe el proceso de obtención de embriones de ratón. Los ratones hembra adultos (6-8 semanas de edad, híbridos C57BL/6 y DBA/2) se mantuvieron en condiciones ambientales estándar de 12 h de luz y 12 h d....

Discusión

La simplicidad y rapidez del modelo in vitro propuesto para la implantación embrionaria ofrece ventajas notables para el cribado de fármacos en fase temprana y otras aplicaciones de investigación. El protocolo sencillo, junto con la naturaleza de alto rendimiento de las líneas celulares de Ishikawa, lo convierte en un candidato ideal para pantallas a gran escala, particularmente en las primeras etapas del descubrimiento de fármacos. Liang¹³ encontró que la eliminación de TAGLN2 dis.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
17-β-estradiol	SIGMA	3301	Most potent mammalian estrogenic hormone
BD Falcon	BD	353001	Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile
Biosafety Cabinet	ESCO	class BSC	Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc
CO2 Incubator	Thermo	8000DH	Embryo culture
Culture plate	Corning	3506	Cell culture
DMEM/F12	Gibco	1133032	DMEM/F12 (1x), liquid 1:1,Contains L-glutamine and 15 mM HEPES buffer
Fetal Bovine Serum	Gibco	10099141	Fetal Bovine Serum, Qualified, Australia Origin
Gelatin	SIGMA	G9391	Type B, powder, BioReagent, suitable for cell culture
HCG	Nanjing Aibei	M2520	Sterilization reagent, intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Hyaluronidase	SIGMA	V900833	Reagent grade, powder
KSOM	Merck	MR-020P-D	(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
L-glutamine	Gibco	25030081	L-glutamine-200 mM (100x), liquid
M2	Merck	MR-015-D	EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
Mineral oil	SIGMA	M8410	Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications
Penicillin-Streptomycin, liquid	Gibco	15140122	10,000 Units penicillin (base) and 10,000 units streptomycin (base), utilizing penicillin G (sodium salt) and streptomycin sulfate in 0.85% saline
PMSG	Nanjing Aibei	M2620	Sterilization reagent ,intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Progesterone	SIGMA	5341	Steroid hormone secreted by the corpus luteum during the latter half of the menstrual cycle
Sodium pyruvate	Gibco	11360070	Sodium pyruvate is commonly added to cell culture media as a carbon source in addition to glucose
Stereomicroscope	Olympus	SZX7	Embryo retrieval and observation of embryo development