Cirugía de Transferencia Embrionaria por Laparotomía en Primerizas

Resumen

Este protocolo describe la aplicación de la técnica quirúrgica utilizada para transferir embriones de cerdo clonados mediante laparotomía en primerizas.

Resumen

Este protocolo tiene como objetivo demostrar la técnica quirúrgica para transferir embriones de cerdo clonados al oviducto, un método ampliamente utilizado en la producción de cerdos modificados genéticamente para investigación biomédica. Nueve primerizas se sometieron a sincronización hormonal y laparotomía para la transferencia de embriones clonados producidos por transferencia nuclear de células somáticas (SCNT) en etapas de hasta 4 células en el día 2 al oviducto. El diagnóstico gestacional se realizó mediante ecografía a los 30 días de la cirugía de transferencia. Seis de las nueve cerdas jóvenes operadas mostraron signos de embarazo en el examen de ultrasonido. Sin embargo, como no hubo progresión en el desarrollo fetal evaluado por ecografía, las primerizas se sometieron a una necropsia a los 60 días para la recolección de material biológico y la evaluación del sistema reproductivo. Se observaron adherencias en los cuernos uterinos, los ovarios y los oviductos. A partir de la luz uterina de dos de las primerizas sacrificadas, se obtuvieron una y cuatro estructuras embrionarias con edades gestacionales que oscilaron entre los 12 y los 20 días. A pesar de la ausencia de lechones vivos, probablemente atribuida a la baja tasa de eficiencia de la transferencia de embriones de cerdo clonados, que está influenciada por varios factores, incluido el número y la calidad de los embriones transferidos, la técnica quirúrgica presentada demostró ser rápida y segura.

Introducción

Los cerdos son un excelente modelo experimental para la investigación biomédica debido a sus similitudes anatómicas, fisiológicas y genéticas con los humanos¹. Estos animales se han utilizado a menudo en investigaciones relacionadas con los xenotrasplantes, con la intención de producir órganos, células o tejidos que promuevan un bajo riesgo de rechazo cuando se trasplantan a humanos. La investigación en xenotrasplantes tiene como objetivo aumentar la oferta de órganos para trasplante humano, reduciendo así la lista de espera de pacientes².

Protocolo

Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética en Uso de Animales en Investigación de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad de São Paulo, número de protocolo 6088030523. Nueve cerdas jóvenes de siete meses de edad de la granja porcina núcleo de Água Branca, ubicada en la ciudad de Itu, estado de São Paulo, Brasil, se utilizaron justo después de la segunda detección de celo⁹. Los detalles de los reactivos y el equipo utilizado en el estudio se enumeran en la Tabla de Materiales.

1. Preparación animal

1. Ayunar a lo....

Discusión

El método quirúrgico descrito ha sido realizado previamente por otros grupos de investigación que trabajan con la producción de cerdos clonados o cerdos clonados genéticamente modificados, con reportes de nacimientos después de la implementación de esta técnica 15,16,17,18,19,20. Las .......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.25 mL straw	generic	-	Surgical material
1 mL syringe	Descarpack	341001	Surgical material
10 mL syringe	Descarpack	324601	Surgical material
20 mL syringe	Descarpack	324801	Surgical material
3 mL syringe	Descarpack	324201	Surgical material
5 mL syringe	Descarpack	324401	Surgical material
60 mL syringe	Descarpack	323201	Surgical material
9 mm endotracheal tube	Rusch	112482-000090	Surgical material
Allis forceps	generic	-	Surgical instrument
Amox LA	JA Saúde Animal	MAPA registration: 8.781/2004	Pharmaceutical drug
Bakhaus forceps	generic	-	Surgical instrument
Catheter 20G	Descarpack	362401	Catheter for intravenous access
Cetamin	Agener União	MAPA registration: SP-000292-5.000011	Anesthetic
Conductive clinical gel	RMC	ANVISA registration: 80122200013	Surgical material
Dipyrone D-500	Zoetis	MAPA registration: SP0000728-46	Pharmaceutical drug
Disposable scalpel n. 22	Wiltex	ANVISA registration: 10150470565	Surgical instrument
Disposable sterile sponge-brush	Rioquimica	7.89778E+12	Surgical asepsis
Easy-Scan:Go	IMV	ESCG01	Ultrasound
Endozime AW Plus	Ruhof	34514	Detergent for surgical instruments
Fentanil (Fentanest)	Cristália	ANVISA registration: 1029800810159	Anesthetic
Gosset retractor	generic	-	Surgical instrument
Halstead-mosquito hemostatic forceps	generic	-	Surgical instrument
Healing ointment - Unguento Pearson	Pearson SA	MAPA registration: SP0000094-16	Pharmaceutical drug
hydrogen peroxide solution	Rioquimica	ANVISA registration: 218690015	Surgical material
Isofluorane	Biochimico	ANVISA registration: 100630222	Anesthetic
IV Drip set extensor	generic	-	Fluid therapy
IV Macro drip set	Descarpack	410301	Fluid therapy
Lactofur (ceftiofur)	Ourofino SA	MAPA registration: SP0000051-50	Pharmaceutical drug
Laringoscope	-	-	Surgical instrument
Maxicam 2%	Ourofino SA	MAPA registration: SP0000051-69	Pharmaceutical drug
Micropore adhesive 5 cm x 10 cm	generic	1530	Surgical material
Midazolam	Hipolabor	ANVISA registration: 1134301430035	Anesthetic
Multi-Way IV Infusion Set	Descarpack	413201	Fluid therapy
Needle 40 mm x 1.2 mm	Descarpack	353601	Sterile needle for applying medicines and anesthetics.
Needle 40 mm x 1.6 mm	Wiltex	ANVISA registration: 10150470664	Sterile needle for applying medicines and anesthetics.
Needle holder	generic	-	Surgical instrument
Nylon 2 suture trhead	Shalon Medical	N502CTI40	Surgical material
Ordinary pen	generic	-	Regular pen for taking notes
Physiological solution 0.9% 500 mL bag	JP Farma	MS:1.0491.0070	Fluid therapy
Polyglycolic acid 2 suture thread	Atramat	G4099-75H	Surgical material
Potassium chloride	Samtec	ANVISA registration: 1559200010139	Parenteral drug
Procedure gloves	Descarpack	122401	Personal Protective Equipment (PPE)
Propofol (Provive)	União Química	ANVISA registration: 1049714490057	Anesthetic
Ringer lactate solution 500 mL bag	JP Farma	MS:1.0491.0061	Fluid therapy
Riohex 0.5% clorexidine alcohol solution	Rioquimica	218690356	Surgical asepsis
Riohex 2% clorexidine solution with surfactant	Rioquimica	218690356	Surgical asepsis
Scalp 21 G	Descarpack	421201	Surgical material
Shoe covers	generic	-	Personal Protective Equipment (PPE)
Sterile compresses	Cremer	ANVISA registration: 10071150065	Surgical material
Sterile gauze pad	Procitex	ANVISA registration: 80245210083	Surgical material
Sterile surgical drapes 140 cm x 90 cm	Venkuri	7010003	Surgical material
Sterile surgical drapes 150 cm x 190 cm	PolarFix	F00208	Surgical material
Sterile surgical gloves	Mucambo	CA: 39.317	Personal Protective Equipment (PPE)
Stethoscope	generic	-	Surgical equipment
Surgical cap	Descarpack	93201	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical gown	Descarpack	231101	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical mask	Descarpack	110701	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical scissors blunt-blunt	generic	-	Surgical instrument
Surgical scissors sharp-sharp	generic	-	Surgical instrument
Surgical stapler	Tradevet	-	Surgical material
Tekbond super glue	Tek Bond	78072720030	Surgical material
Thermometer	generic	-	Surgical equipment
Three Way Stopcock	Solidor	374	Surgical material
Tramadol hydrocloride	Agener União	MAPA registration: SP-000292-5.000002	Anesthetic
Transparent film dressing	Skinupper	ANVISA registration: 82307460014	Surgical material
Waterproof adhesive 10 cm x 4.5 cm	generic	364828	Surgical material