Un modelo modificado de preparación para la reperfusión de oclusión de la arteria cerebral media

Resumen

Este protocolo describe el proceso de preparación para la reperfusión de la oclusión de la arteria cerebral media a través de la arteria carótida común.

Resumen

El modelo de reperfusión de oclusión de la arteria cerebral media (MCAO/R) es crucial para comprender los mecanismos patológicos del accidente cerebrovascular y para el desarrollo de fármacos. Sin embargo, entre los métodos de modelado comúnmente utilizados, el método de Koizumi a menudo se enfrenta a un escrutinio debido a su ligadura de la arteria carótida común (CCA) y su incapacidad para lograr una reperfusión adecuada. Del mismo modo, el método Longa ha sido criticado por desconectar y ligar la arteria carótida externa (ECA). Este estudio tiene como objetivo introducir un método de preparación de modelos modificado que preserve la integridad del ACE, implica la inserción de una sutura de nailon monofilamento a través del CCA, la reparación de la incisión del CCA ligada y el mantenimiento de la reperfusión del CCA. La reperfusión del flujo sanguíneo se confirmó mediante imágenes de flujo de moteado láser. Los métodos de evaluación, como la escala de Longa, la puntuación de gravedad neurológica modificada, la tinción con cloruro de trifeniltetrazolio (TTC) y el marcaje con inmunofluorescencia de las neuronas, demostraron que este enfoque podría inducir daño estable del nervio isquémico. Este protocolo modelo MCAO/R modificado es simple y estable, y proporciona una valiosa orientación para los profesionales en el campo de la isquemia cerebral.

Introducción

Según la Organización Mundial de la Salud, el ictus se ha mantenido como la segunda causa de muerte en todo el mundo durante la última década, con una alta tasa de incidencia, alta mortalidad y alta tasa de discapacidad ^1,2. A medida que la población mundial envejece, se espera que la incidencia de accidentes cerebrovasculares aumente en los países en desarrollo, lo que podría convertirse en la principal causa de muerte prematura y discapacidad en adultos. Además, existe una tendencia a que los accidentes cerebrovasculares ocurran a una edad más temprana de³ años. La pérdida de la fuerz....

Protocolo

El protocolo experimental se llevó a cabo de acuerdo con las directrices del Comité de Uso de Animales de Laboratorio y del Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Medicina Tradicional China de Chengdu (Número de registro: 2019-DL-002). Todos los datos de investigación con animales se han documentado siguiendo las directrices ARRIVE (Animal Research: Reporting In Vivo Experiments). Para este estudio se utilizaron ratas macho Sprague Dawley (SD) con un peso de 250 g ± 20 g y con edades comprendidas entre 6 y 8 semanas. Los detalles sobre los animales, los reactivos y el equipo empleado se enumeran en la Tabla de Materiale....

Resultados

Las imágenes de flujo de moteado láser demostraron que antes de la oclusión de la sutura de nailon monofilamento, había abundante flujo sanguíneo en el área de la arteria cerebral media (MCA), y se registraron los valores basales de flujo sanguíneo de las ratas. Después de la oclusión del MCA, el valor del flujo sanguíneo en el lado isquémico del cerebro disminuyó rápidamente. Antes de retirar la sutura, se volvieron a comprobar los valores de flujo sanguíneo en el lado isquémico para confirmar si la sutur.......

Discusión

El modelo de oclusión de la arteria cerebral media (MCAO) inducida por una sutura de nailon monofilamento es el método más común utilizado para preparar modelos de MCAO. Este enfoque es ampliamente adoptado en estudios preclínicos y ha ganado el reconocimiento de muchos profesionales debido a su simplicidad, falta de necesidad de craneotomía, trauma quirúrgico mínimo y capacidad para lograr la reperfusión.

Existen dos técnicas quirúrgicas clásicas para el filamento intraluminal MCA.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
Animal anesthesia system	Rayward Life Technology Co., Ltd	R500IE
Animal temperature maintainer	Rayward Life Technology Co., Ltd	69020
Cy3 secondary antibody	Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd	GB21303
DAP1 antibody	Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd	G1012
DCX antibody	Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd	GB13434
Goat serum	Beyotime Biotechnology Co., LTD	C0265
GraphPad Prism	GraphPad Software	GraphPad Prism 8.0
ImageJ	National Institutes of Health	ImageJ software
Isofluran	Rayward Life Technology Co., Ltd	R510-22
Laser speckle blood flow imaging system	Rayward Life Technology Co., Ltd	PeriCam PSI NR
MAP-2 antibody	Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd	GB11128
Miniature hand-held skull drill	Rayward Life Technology Co., Ltd	87001
monofilament suture	Rayward Life Technology Co., Ltd	250-280g
NeuN antibody	Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd	GB11138
OCT embedding agent	BIOSHARP	BL557A
Penicillin sodium	Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd.	17121709-2
Quick Antigen Retrieval Solution for Frozen Sections	Beyotime Biotechnology Co., LTD	P0090
SD rats	SPF ( Beijing ) Biotechnology Co.,Ltd.	250-280g
Triton X-100	Beyotime Biotechnology Co., LTD	ST795
TTC	Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd.	2019030101