Flow Cytometric Detection of Adipose-Derived Stem Cell Expression Markers

Comience ajustando la concentración de suspensión de células madre derivadas de tejido adiposo murino descongelado utilizando PBS con suero bovino fetal al 5%. Alícuota 100 microlitros de la suspensión que contiene 100, 000 células en un tubo de centrífuga de 1,5 mililitros. Agregue las cantidades adecuadas de anti-CD105 AF594 y anti-CD31 AF680 según las instrucciones del fabricante.

Incubar durante 20 minutos en la oscuridad a cuatro grados centígrados. Eliminar el exceso de manchas lavando con PBS/FBS y centrifugar a 250 x g durante cinco minutos. Resuspender las células en 300 microlitros de formalina al 1%.

Cree un gráfico de diagrama de puntos haciendo clic en el símbolo del polígono para seleccionar la subpoblación de interés y excluir las áreas de escombros utilizando FSC-A versus SSC-A gating. A continuación, haga clic en el símbolo del polígono para generar un nuevo diagrama de puntos y excluir las celdas dúplex y múltiples utilizando SSC-H frente a SSC-A seguido de FSC-H y FSC-A. Utilice Y610-mCHERRY para los detectores AF594 y R660 APC-A para los fluoróforos AF680, respectivamente.

Haga clic en el símbolo del cuadrante y establezca el umbral de cada detector para las células de autofluorescencia. Seleccione muestras etiquetadas con CD105 y población positiva para mostrarlas en Q1LR. A continuación, elija muestras etiquetadas con CD31 y población positiva para mostrar en Q1LR.

El inmunofenotipado mostró que el 98,7% de la población celular era positiva para CD105, mientras que sólo el 5,88% expresaba el marcador CD31.