Para comenzar, tome el tubo de biopsia de piel con medio de fibroblastos. Retire el medio y lave la biopsia de punzón de piel tres veces con cinco mililitros de PBS estéril y precalentado. Usando fórceps estériles, transfiera la biopsia por punción de piel a una placa de cultivo celular de 10 centímetros y córtela a lo ancho en tres o cuatro pedazos con un bisturí estéril, dejando la epidermis y la dermis.
Transfiera cada pieza a un plato estéril de cultivo celular de plástico de 35 milímetros y presiónelo suavemente en el plato de cultivo. Deje que se seque durante cinco a 10 minutos hasta que el líquido se evapore y la biopsia se adhiera al plástico de cultivo celular. Usando una pipeta de 1.000 microlitros, añadir un mililitro de medio de fibroblastos gota a gota alrededor de la biopsia hasta un volumen final de tres mililitros.
Incubar la muestra durante siete días a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono sin alimentar ni mover el plato. Al final de la incubación, cambie el medio a un medio de fibroblastos fresco y precalentado. Finalmente, use un microscopio de contraste de fase para monitorear los fibroblastos en forma de huso superados alrededor de la biopsia de piel y congele las células seleccionadas después de cultivarlas.
