Comience cultivando la cepa K-10 de mycobacterium paratuberculosis en matraces T25 que contengan medio enriquecido durante dos semanas a 37 grados centígrados. Evalúe el crecimiento de la colonia regularmente a través de la inspección visual. Cultivar 200 mililitros del cultivo de enriquecimiento en un erlenmeyer de 500 mililitros en una incubadora agitadora durante una semana.
Coloque las suspensiones bacterianas a 70 grados centígrados durante cinco a 10 minutos para inactivarlas y centrifugarlas a 3000G durante 10 minutos. Lave los pellets en 20 mililitros de PBS dos veces y centrifugar la suspensión. Transfiera el pellet a un recipiente estéril y congélelo con nitrógeno líquido.
Transfiera el pellet congelado a una cámara de liofilizador inmediatamente. Después de la liofilización, transfiéralo a un banco de limpieza biológica. Usando una espátula de acero inoxidable, desaloje los grumos MAP secos que se adhieren a las paredes internas del recipiente y pulverícelos hasta obtener un polvo fino.
Pesar las células pulverizadas y colocarlas manualmente en un vial aséptico de 10 mililitros.
