Para comenzar el procedimiento dentro de la sala de cirugía correctamente organizada, coloque al cerdo anestesiado en decúbito reclino y asegúrese de que todas las líneas y tubos conectados estén asegurados. Elimine cualquier residuo de vello del área afeitada designada para herir con crema depilatoria. Después de esterilizar los sitios de la herida, marque el área con una plantilla de quemadura estéril y un marcador cutáneo quirúrgico.
Ajuste el quemador ajustando el punto de ajuste de la unidad de control a 150 grados centígrados. El punto de ajuste bajo a 145 grados centígrados y el punto de ajuste alto a 155 grados centígrados. Usando bloques de acero inoxidable calentados conectados al dispositivo de quemadura, cree una herida por quemadura de espesor completo colocando los bloques sobre la piel durante 60 segundos.
Tome una foto digital de todo el lomo del cerdo, incluyendo un cartel con el punto de tiempo y la fecha de identificación del cerdo. Luego, tome imágenes por separado para cada herida junto con una regla y un cartel que muestre la identificación del cerdo, la identificación de la herida y el punto de tiempo. Para evaluar la perfusión microvascular de la herida en tiempo real mediante imágenes de moteado láser o LSI, obtenga imágenes de todas las heridas en un solo registro utilizando un generador de imágenes de perfusión sanguínea LASCA.
Para medir la pérdida de agua transepidérmica o TEWL, coloque una cubierta limpia de la sonda sobre la punta de la sonda TEWL, que estará en contacto con el tejido de la herida. Mide cada herida cinco veces, primero en el centro, seguido de cada esquina. A continuación, exporte todas las lecturas a una hoja de cálculo.
Realizar una ecografía armónica o un mapeo HUSD escaneando la herida con una sonda ecográfica desde la línea media o columna vertebral, partiendo de la piel normal y avanzando hacia la cara lateral del cerdo sobre las heridas hasta llegar de nuevo a la piel normal. Siga el patrón de escaneo para cada herida tanto en el modo B como en el modo de elastografía tisular. Cambie la anotación después de que se visualice cada herida tanto en el modo B como en el modo elasto, que son dos grabaciones por herida.
Una vez que se hayan completado todas las imágenes, cubra las heridas por quemaduras individualmente con apósitos de película transparente o con el apósito de prueba. A continuación, coloque un apósito de película transparente más grande sobre toda la zona de la herida. Aplique una segunda capa de gasa en rollo sin apretar alrededor de todo el tronco del cerdo para absorber cualquier líquido que exuda de las heridas.
Cubra la gasa sin apretar con una capa de vendaje elástico flexible. Cubra el vendaje elástico con una capa final de cinta elástica de cuatro pulgadas. Después de suspender el gas anestésico al completar el vendaje, permita que el cerdo permanezca con oxígeno durante al menos cinco minutos.
Para inocular las heridas por quemaduras en el tercer día después de la quemadura, disperse el inóculo por la superficie de las heridas expuestas con una pipeta y extiéndalo uniformemente con un esparcidor desechable. Para recolectar las biopsias de tejido para su análisis después de la toma de imágenes, infiltre el área alrededor de la herida con bupivacaína al 0,5%. Con un bisturí desechable con una hoja de tamaño 10, corte una tira de 3-4 milímetros de ancho de un borde de la herida al otro, manteniendo pequeños márgenes de piel normal en ambos lados.
Cortar una biopsia con sacabocados de 6 milímetros de la herida, ya sea del lecho de la herida o del borde de la herida. Lograr la hemostasia después de la recolección de las muestras presionando suavemente la herida con una gasa estéril. Cubra la herida con un apósito no adherente y venda como se demostró anteriormente.
El análisis de la muestra de biopsia mediante tinción con hematoxilina y eosina mostró distorsión y necrosis de todas las capas histológicas de la piel. La biopelícula establecida se validó aún más en el séptimo día después de la inoculación por la unidad formadora de colonias. Escanee las imágenes de microscopía electrónica y la tinción de inmunofluorescencia.
Las heridas por quemaduras mostraron una membrana biogénica gruesa en la superficie de la herida al séptimo día después de la inoculación, lo que confirmó la infección y el establecimiento de biopelícula. El área de la herida comenzó a encogerse en el día 14, pero se observó una cicatrización incompleta a aproximadamente el 25% del tamaño original de la herida en el día 56, lo que indica la cronicidad de la herida. La cronicidad de la herida y el deterioro de la cicatrización de la herida se confirmaron aún más mediante el TEWL que mostró una alta pérdida de agua transepidérmica en todos los puntos de tiempo medidos.
Esto también fue confirmado por la supresión de las proteínas de unión estrecha, ZO-1 y 2, y la restauración deficiente de la función de barrera de la piel.
