Comience preparando una placa de Petri de mantenimiento temporal con hojas crucíferas extirpadas y papel de filtro infiltrado en agua en la parte inferior. A continuación, coloque cinco pulgones en la placa de Petri preparada. Cuando los pulgones aumenten en número, corte las hojas originalmente extirpadas en cuatro a seis trozos más pequeños.
Transfiera cada trozo de hoja pequeña con los pulgones a placas de Petri separadas que contengan hojas frescas y papel de filtro húmedo. Para recolectar el ADN genómico del pulgón, primero homogeneice los pulgones con un mortero de gránulos. A continuación, extraiga el ADN utilizando un kit de aislamiento de ADN genómico Gene-Spin según las pautas del fabricante.
Finalizar el proceso de extracción eluyendo el ADN genómico con 50 microlitros de agua precalentada libre de nucleasas. Realice la amplificación por PCR y la secuenciación de ADN agregando la muestra de ADN a la mezcla maestra de PCR con pares de cebadores. Analice el producto de PCR mediante electroforesis en gel de agarosa al 1% para confirmar la identidad del pulgón de la mostaza.
Los pulgones recolectados en el campo se confirmaron como pulgones de la mostaza utilizando marcadores moleculares, incluido el tamaño del amplicón de PCR y la secuenciación de CO1 de Lipaphis erysimi.
