Para la recuperación de EPF de la biblioteca de hongos, comience untando los aislados de hongos en una placa SDA de un cuarto de fuerza. Incubarlo en la oscuridad a 25 grados centígrados durante 10-14 días antes de la cosecha de conidios. A continuación, pipetear 2-3 ml de 0,03%Tween 80 en una placa cultivada.
A continuación, utilice un asa de inoculación para raspar los conidios. A continuación, transfiera la suspensión de hongos a un tubo de centrífuga. Agite vigorosamente la suspensión a la velocidad más alta, luego pipetee una muestra en un hemocitómetro para contar el número de conidios.
Diluir los conidios dentro de la suspensión utilizando 0,03%Tween 80 hasta obtener la concentración deseada. Para preparar la cámara de inoculación, primero corte un disco de hoja de 9 centímetros de diámetro utilizando la placa de Petri inferior como molde o con unas tijeras. A continuación, prepare agar agua al 1,5% para cada plato usando un microondas.
Vierta 30 ml del agar agua enfriada en la placa de Petri y deje que se solidifique en una campana de flujo laminar. Cuando la superficie del agar sea semisólida, coloque el disco de la hoja con su superficie abaxial hacia arriba, luego presiónelo ligeramente para incrustarlo en el agar. Ahora, coloque 20 adultos ápteros en el disco de la hoja.
Abra la tapa de la cámara de inoculación para rociar 0,3 ml de suspensión de conidios directamente sobre los pulgones y el disco de la hoja. Una vez que la suspensión se haya secado, cierre la tapa para evitar el ahogamiento de los pulgones de la mostaza. Posteriormente, selle la cámara de inoculación con una película de parafina para mantener una alta cantidad de humedad.
Coloque la cámara en una incubadora configurada a una temperatura de 25 grados centígrados con un fotoperiodo claro y oscuro de 12 horas cada uno. Use un microscopio estereoscópico para contar la mortalidad cada 12 horas durante 5 días. El cribado de virulencia reveló una tasa de supervivencia constante para los pulgones de la mostaza, y el grupo de control mostró una tasa de supervivencia del 85%.
Cordyceps cateninnulata demostró la capacidad más rápida para matar pulgones, lo que resultó en una moralidad del 50% y 90% a los 3 días y 4,5 días después de la inoculación, o DPI. Las cepas 141, 143 y 153 de Beauveria mostraron una capacidad lenta para matar pulgones con solo un 5% de mortalidad a 3 DPI. Aparte de Purpureocillium, la mayoría de los aislados de EPF mostraron tasas de mortalidad corregidas superiores al 70% dentro de 5 DPI.
Beauveria bassiana demostró la tasa de mortalidad más alta del 100% entre los aislados de EPF. Se observó micosis por EPF en cadáveres de pulgones de la mostaza infectados con especies de Metarhizium, Beauveria, Purpureocillium lilacin y Cordyceps cateniannulata durante el cribado de virulencia.
