Para comenzar, tome 10 miligramos de mitocondrias de levadura cruda recién aisladas y vuelva a suspenderlas en 1,6 mililitros de tampón SM a cuatro grados centígrados mediante pipeteo. Luego, transfiera la suspensión mitocondrial a un matraz Erlenmeyer de 100 mililitros preenfriado. Lentamente, agregue 16 mililitros del tampón de hinchamiento, usando una pipeta de vidrio de 20 mililitros mientras aplica una agitación suave constante sobre hielo.
Incubar las muestras bajo agitación suave constante durante 30 minutos en hielo. Luego, agregue lentamente cinco mililitros de solución de sacarosa de 2,5 molares con una pipeta de vidrio de cinco mililitros, permitiendo que la membrana interna se contraiga. Incubar las muestras bajo una agitación suave durante 15 minutos en hielo.
Para generar vesículas de membrana submitocondrial, transfiera la suspensión mitocondrial a una célula de roseta preenfriada y sonique la suspensión al 10% de amplitud durante 30 segundos mientras se enfría la célula de roseta en un baño de hielo. Deje reposar la suspensión durante 30 segundos en un baño de hielo.
