Agregue aproximadamente 0.75 miligramos de levadura seca a 200 microlitros de la solución salina equilibrada de Hanks, o HBSS, que contiene iones de calcio y magnesio. A continuación, incuba la mezcla en una ThermoMixer a 100 grados centígrados y 500 rpm durante un mínimo de 15 minutos. Después de la incubación, transfiera cinco microlitros de suspensión de levadura a 45 microlitros de colorante azul de tripano al 0,2%.
Cuente las células de levadura utilizando una cámara de Neubauer. Ajustar la concentración de la suspensión inicial a 33.000 células de levadura por microlitro utilizando HBSS con calcio y magnesio. A continuación, mezcle suavemente y transfiera cinco microlitros de los neutrófilos polimorfonucleares activados previamente preparados a cinco microlitros de la suspensión de células de levadura en un nuevo tubo de microcentrífuga estéril.
Transfiera inmediatamente seis microlitros de los neutrófilos polimorfonucleares y la suspensión de levadura a tres pocillos de un portaobjetos de vidrio limpio, de dos microlitros cada uno, e incube el portaobjetos en una cámara humidificada durante 40 minutos. Después de la tinción con panóptico rápido, observe las células bajo el microscopio. Aunque tanto el FMLP de 100 nanomolares como el péptido antimicrobiano de 16 micromolares indujeron un aumento del engullido de levaduras, la diferencia no fue estadísticamente significativa hasta la estimulación dual, que aumentó significativamente la fagocitosis en comparación con el grupo control.
