Para comenzar, transfiera las plantas de papa infectadas con el virus a una cámara de crecimiento mantenida a 22 grados centígrados. Elija una planta para observar y use cinta adhesiva para inmovilizar completamente la segunda hoja inoculada. A continuación, conecte el microscopio digital a la computadora e inicie el software de captura de imágenes.
Coloca la hoja bajo el microscopio. Luego, use el dial para enfocar la superficie de la hoja. Para ajustar la configuración de la cámara, haga clic en el botón Configuración.
Ahora, establece el brillo en 64, el contraste en 14 y el tono en cero. A continuación, ajusta el balance de blancos. A continuación, establece la saturación en 47, la nitidez en cero y la gamma en cinco.
Haga clic en el icono de captura de imagen y seleccione la opción Video de lapso de tiempo. A continuación, configure la captura de imágenes cada 15 minutos durante un total de 24 horas. Presione el botón Inicio para comenzar la captura de la imagen.
Para guardar las imágenes capturadas, seleccione todas las imágenes y haga clic en el icono Guardar. Ahora, elige las opciones de exportación. Luego, establezca los puntos por pulgada al máximo.
Una vez guardadas, elimine todas las imágenes del programa. Para editar las imágenes, inicie un software de edición como ImageJ. Haga clic en Archivo, luego seleccione Importar y elija Secuencia de imágenes para importar las secuencias de tiempo de las imágenes desde un solo campo de visión.
Pegue la ruta del directorio de imágenes guardadas y presione Aceptar. Una vez completada la conversión, ImageJ iniciará automáticamente un reproductor de vídeo interno que mostrará el vídeo terminado. Haga clic en Archivo, luego en Guardar como y seleccione el formato AVI para exportar el archivo de video.
Cuando se abra una pequeña ventana, establezca la velocidad de fotogramas en 0,3 FPS y, a continuación, pulse Aceptar para guardar el vídeo como un archivo AVI. Se utilizaron plantas de papa inoculadas de tres a cuatro semanas de edad con al menos tres o cuatro hojas completamente desarrolladas para el análisis microscópico digital. La misma área en la hoja inoculada se observó a intervalos de 15 minutos para determinar la ocurrencia de la lesión y su expansión en el tiempo.
A las 14 horas de observación, no se apreciaba ninguna lesión. Unos 90 minutos después, se registró una lesión visible. La lesión comenzó a expandirse dos horas más tarde y continuó expandiéndose durante las siguientes ocho horas y media.
