Para empezar, retire el vello de la zona precordial del ratón anestesiado con crema depilatoria y coloque el ratón de espaldas en la plataforma de monitorización fisiológica. Aplique una pequeña cantidad de gel conductor a la lámina de cobre en la mesa de monitoreo fisiológico. Asegure la pausa del mouse en este gel para facilitar la captura de datos de electrocardiograma y respiración.
Aplique una pequeña cantidad de gel de transmisión de ultrasonidos para garantizar una calidad de imagen óptima. Alinee la plataforma lateralmente en un ángulo pequeño entre la sonda y la plataforma, y obtenga una vista del eje largo paraesternal del corazón. A continuación, localice la sección de corazón adecuada en el modo B.
Active el Doppler color en la pantalla táctil y mueva ligeramente la sonda para encontrar la posición correcta. Ahora, cambie al modo de onda de pulso presionando el botón correspondiente. Coloque la línea indicadora amarilla en la arteria coronaria paralela a la dirección del flujo y presione el botón Save Clip para documentar los datos de referencia.
Aumente la concentración de isoflurano al 3% y espere 30 segundos. Asegúrese de que la velocidad del flujo aumente gradualmente con el tiempo. Presione con frecuencia el botón Guardar clip nuevamente para capturar el flujo sanguíneo a su velocidad más alta.
Después de completar la imagen ecocardiográfica, retire con cuidado al animal de la plataforma. Utilice las herramientas de función de velocidad máxima para medir las velocidades diastólicas máximas y evaluar la función sistólica del corazón utilizando las imágenes adquiridas. Calcule la TFG dividiendo la velocidad de flujo coronario máximo diastólico al flujo máximo por la velocidad de flujo coronario pico diastólico al inicio.
Realizar una toracotomía en el cuarto espacio intercostal para exponer el corazón. A continuación, ligar la arteria LAD con una sutura de seda 5-0. Verificar la isquemia en ratones a través de la confirmación visual de la visualización de la decoloración aguas abajo en el miocardio isquémico.
Realice una oclusión de la arteria LAD durante 30 minutos. A continuación, suelte la ligadura y confirme la reperfusión controlando el enrojecimiento de la zona del músculo cardíaco descolorido durante uno o dos minutos. Después de la oclusión coronaria y la reperfusión, cierre el tórax en capas y deje que los ratones se recuperen durante aproximadamente media hora.
Medir de nuevo la CFR a las 1, 3, 5, 8, 24 y 48 horas después de la reperfusión como se ha demostrado anteriormente. Antes de la cirugía de reperfusión por isquemia, se midió el CFR basal y los ratones tenían un valor normal de CFR. Sin embargo, después de la cirugía, hubo una disminución notable de la CFR después de una hora de reperfusión.
A medida que se prolongaba el tiempo de reperfusión, los valores de CFR se mantuvieron consistentemente bajos, lo que sugiere que la hipoperfusión podría persistir durante al menos dos días. No se observaron cambios significativos en la función cardíaca del ventrículo izquierdo cuando la CFR se redujo significativamente en los ratones.
