Para comenzar, coloque los trozos de las muestras de placenta en PBS. Deseche la placa coriónica, la decidua materna y cualquier infarto visible del espécimen. Diseccionar la muestra de tejido restante en explantes vellosinos con un diámetro de sección transversal de aproximadamente 0,5 centímetros.
Transfiera los explantes a una placa de Petri llena de PBS fresco. Con un par de fórceps, agite cada explante en el PBS para eliminar toda la sangre. Debajo de una campana estéril, use cerraduras luer para conectar cinco cámaras a la botella de depósito.
Invierta las cámaras al revés y retire la parte inferior. Ahora use pinzas para colocar las placas de metal en el centro de las partes superiores de las cámaras con los clavos apuntando hacia arriba. Llene la mitad de las cámaras con un mililitro de medio de cultivo precalentado.
Agregue 20 mililitros adicionales del medio en el depósito. Con unas pinzas, coloque con cuidado el explante velloso en las agujas de la placa metálica de la cámara. Coloque cuatro explantes en una sola cámara.
Vuelva a colocar la parte inferior de las cámaras para cerrarla. A continuación, conecte la tubería de la bomba a la bomba para conectar el circuito de flujo con la bomba peristáltica dentro del biorreactor. Arréglalo en la cuarta etapa.
En el menú Bombas, elija el modo Manual. Ajuste la velocidad de la bomba a un mililitro por minuto y haga clic en Ejecutar para comenzar a bombear. Mantenga las cámaras en ángulo durante el llenado para garantizar un llenado completo.
Cuando finalice el proceso de llenado, vuelva a invertir la cámara. Confirme que las cámaras estén seguras y cierre ambas tapas del biorreactor. Una vez completada la incubación del tejido, haga clic en Abortar para detener la bomba.
A la vez, abra dos tapas del biorreactor y una cámara de flujo. Use fórceps para quitar con cuidado los explantes de la placa de metal para su posterior análisis. Los explantes teñidos inmunohistoquímicamente mostraron una presentación visual bien estructurada y organizada del citoesqueleto en tejido fresco y de cultivo de flujo.
Con el tiempo, la agregación de microfilamentos se observó cada vez más en explantes estáticos, lo que significa una degradación de la estructura del citoesqueleto. La disminución de la integridad de los tejidos a lo largo del tiempo de cultivo fue confirmada por la hematoxilina y la eosina. Los tejidos frescos mostraron un estroma denso y apretado.
Después de 48 horas de cultivo de flujo, se observaron fragmentos parcialmente desprendidos del sincitiotrofoblasto. La integridad del tejido se conservó inadecuadamente ya después de 24 horas en una condición de cultivo estático, que se deterioró aún más después de 48 horas. La tinción de células endoteliales mostró células distintivamente organizadas en el tejido fresco.
La integridad morfológica se mantuvo ampliamente incluso después de 48 horas en los cultivos de flujo. Sin embargo, el explante estático mostró un colapso parcial incluso después de 24 horas, que se deterioró aún más después de 48 horas.
